目的篩選出能與耐甲氧西林金黃色葡萄球菌ftsZ基因緊密結(jié)合的反義肽核酸序列,評價其體外抗菌活性。方法選用兩種計算機軟件（Mfold、RNA Structure 5.2）和斑點雜交篩選出最佳反義序列PNA,并連接穿膜肽（cell penetrating peptide,CCPs）形成肽-PNA（peptide-PNA, PPNA）,另設(shè)一條與最好序列有3個錯配堿基的肽核酸序列作為對照,連接穿肽形成錯配的肽肽核酸（scrambled peptide-PNA, Scr PPNA）。將不同濃度的肽肽核酸處理MRSA后,間隔1h測定A600值同時做平板菌落計數(shù),觀測其對細菌生長的抑制作用。結(jié)果斑點雜交實驗結(jié)果表明,計算機輔助軟件設(shè)計的11條反義寡核苷酸序列中,有4條序列顯示強弱不同的雜交信號,第3號探針雜交信號最強,而1條正義序列沒顯示任何信號,PPNA在30和40μmol/L分別具有抑菌作用和殺菌作用,并具有濃度依賴性,而Scr PPNA在高濃度時對細菌也無生長抑制作用,驗證了肽核酸的特異性。結(jié)論成功的篩選出一條在體外對MRSA的生長有顯著的影響的反義肽核酸序列,有望為抗MRSA感染患者提供新... 

【文章來源】：中國抗生素雜志. 2020,45(09)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

fts Z基因PCR擴增產(chǎn)物1%瓊脂糖凝膠電泳

以反義肽肽核酸作用的時間為橫坐標，縱坐標為MRSA細菌菌落數(shù)10的對數(shù)值，繪制出折線圖(圖6)。結(jié)果表明，體外斑點雜交實驗雜交信號最強的序列PPNA在劑量40μmol/L濃度時處理2h后，MRSA CY-11菌落計數(shù)結(jié)果，細菌菌落數(shù)由105CFU/m L減少到102CFU/m L,6h后細菌被全部殺死，表明PPNA具有快速殺菌效果，在劑量為30μmol/L濃度時對MRSA CY-11顯示出抑菌效果，當劑量為20和10μmol/L時，對細菌的生長無抑制作用。而堿基錯配的序列Scr PPNA對細菌生長無抑制作用。這項研究結(jié)果表明反義肽肽核酸在體外實驗具有殺菌作用，并具有特異性。3 討論

不同濃度的PPNA對細菌的生長抑制作用

【參考文獻】：
期刊論文
[1]如何應(yīng)對多重耐藥菌醫(yī)院感染的嚴峻挑戰(zhàn)[J]. 孟秀娟,吳安華.  中國感染控制雜志. 2019(03)

碩士論文
[1]以金黃色葡萄球菌RNA聚合酶σ70因子為靶標的反義肽核酸的設(shè)計、合成及抗MRSA的活性研究[D]. 桑國軍.第四軍醫(yī)大學 2012



本文編號：2978944