目的篩選出能與耐甲氧西林金黃色葡萄球菌ftsZ基因緊密結(jié)合的反義肽核酸序列,評(píng)價(jià)其體外抗菌活性。方法選用兩種計(jì)算機(jī)軟件（Mfold、RNA Structure 5.2）和斑點(diǎn)雜交篩選出最佳反義序列PNA,并連接穿膜肽（cell penetrating peptide,CCPs）形成肽-PNA（peptide-PNA, PPNA）,另設(shè)一條與最好序列有3個(gè)錯(cuò)配堿基的肽核酸序列作為對(duì)照,連接穿肽形成錯(cuò)配的肽肽核酸（scrambled peptide-PNA, Scr PPNA）。將不同濃度的肽肽核酸處理MRSA后,間隔1h測定A600值同時(shí)做平板菌落計(jì)數(shù),觀測其對(duì)細(xì)菌生長的抑制作用。結(jié)果斑點(diǎn)雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,計(jì)算機(jī)輔助軟件設(shè)計(jì)的11條反義寡核苷酸序列中,有4條序列顯示強(qiáng)弱不同的雜交信號(hào),第3號(hào)探針雜交信號(hào)最強(qiáng),而1條正義序列沒顯示任何信號(hào),PPNA在30和40μmol/L分別具有抑菌作用和殺菌作用,并具有濃度依賴性,而Scr PPNA在高濃度時(shí)對(duì)細(xì)菌也無生長抑制作用,驗(yàn)證了肽核酸的特異性。結(jié)論成功的篩選出一條在體外對(duì)MRSA的生長有顯著的影響的反義肽核酸序列,有望為抗MRSA感染患者提供新... 

【文章來源】：中國抗生素雜志. 2020,45(09)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

fts Z基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物1%瓊脂糖凝膠電泳

以反義肽肽核酸作用的時(shí)間為橫坐標(biāo)，縱坐標(biāo)為MRSA細(xì)菌菌落數(shù)10的對(duì)數(shù)值，繪制出折線圖(圖6)。結(jié)果表明，體外斑點(diǎn)雜交實(shí)驗(yàn)雜交信號(hào)最強(qiáng)的序列PPNA在劑量40μmol/L濃度時(shí)處理2h后，MRSA CY-11菌落計(jì)數(shù)結(jié)果，細(xì)菌菌落數(shù)由105CFU/m L減少到102CFU/m L,6h后細(xì)菌被全部殺死，表明PPNA具有快速殺菌效果，在劑量為30μmol/L濃度時(shí)對(duì)MRSA CY-11顯示出抑菌效果，當(dāng)劑量為20和10μmol/L時(shí)，對(duì)細(xì)菌的生長無抑制作用。而堿基錯(cuò)配的序列Scr PPNA對(duì)細(xì)菌生長無抑制作用。這項(xiàng)研究結(jié)果表明反義肽肽核酸在體外實(shí)驗(yàn)具有殺菌作用，并具有特異性。3 討論

不同濃度的PPNA對(duì)細(xì)菌的生長抑制作用

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]如何應(yīng)對(duì)多重耐藥菌醫(yī)院感染的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)[J]. 孟秀娟,吳安華.  中國感染控制雜志. 2019(03)

碩士論文
[1]以金黃色葡萄球菌RNA聚合酶σ70因子為靶標(biāo)的反義肽核酸的設(shè)計(jì)、合成及抗MRSA的活性研究[D]. 桑國軍.第四軍醫(yī)大學(xué) 2012



本文編號(hào)：2978944