發(fā)布時間：2021-01-09 05:10

　　目的:檢測皖南地區(qū)臨床分離的鮑曼不動桿菌ISAba1和OXA基因流行趨勢,以及研究ISAba1對OXA-23基因表達的影響。方法:采用VITEK 2 compact全自動微生物鑒定儀檢測90株非重復的鮑曼不動桿菌,多重聚合酶鏈式反應（MPCR）檢測OXA基因和插入序列（ISAba1）。TA克隆耐藥基因全序列blaoxa-23、插入序列ISAba1和ISAba1-blaoxa-23,構(gòu)建基因重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化到大腸埃希菌DH5α中,后經(jīng)轉(zhuǎn)化到大腸埃希菌Rosetta（DE3）表達宿主菌株;SDS-PAGE檢測pET28b（+）-blaoxa-23、pET28b（+）-ISAba1、pET28b（+）-ISAba1-blaoxa-23和轉(zhuǎn)化子（pET28b（+））在表達菌株中的表達,通過肉湯稀釋法測定表達后的陽性菌株和轉(zhuǎn)化子對亞胺培南和美羅培南的最低抑菌濃度（MIC）。結(jié)果:90株非重復鮑曼不動桿菌,blaoxa-23基因陽性的菌株有73株,blaoxa-51基因陽性的菌株有90株,ISAba-1基因陽性的菌株有86株,未檢測到blaoxa-24基因、blaoxa-58基因陽性菌株。其中17株... 

【文章來源】：皖南醫(yī)學院安徽省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

部分多重PCR檢測ISAba1及4種blaoxa酶基因的擴增產(chǎn)物條帶注：M為Marker；1-2,4-8,10-11泳道為含有blaOXA-23，blaOXA-51和ISAba1的菌株檢測結(jié)

R 檢測 ISaba1-blaOXA-23、blaOXA-23 和 ISaba1 的擴增產(chǎn)物rker；1 泳道為 ISaba1-blaOXA-23 的目的基因檢測結(jié)果；2-5 泳道為 bl結(jié)果；6-9 泳道為 ISaba1 的檢測結(jié)果；粒的鑒定結(jié)果laOXA-23 和 ISABa1 陽性菌株進行全序列 PCR 擴增，ISABa1，ISABa1-blaOXA-23 全序列及空載的 PET-28b(+質(zhì)粒 PCR 鑒定結(jié)果顯示 blaOXA-23，ISABa1，ISABa1-blaO體均連接成功，PCR 電泳結(jié)果見圖 2。提取經(jīng)雙酶切鑒定正l 交送南京金斯瑞公司采用雙向測序，測序引物為 pET-28b(+軟件與 GenBank 中已報道的基因序列進行比對，都與

圖 2 重組質(zhì)粒雙酶切鑒定 Marker；1 泳道為空載 pET-28b(+)質(zhì)粒；2 泳道為含有 blaOXA-23 的重組泳道為含有 ISAba1 的重組質(zhì)粒檢測結(jié)果；4 泳道為含有 ISABa1-blaOXA-果。菌株表達藥敏 液體稀釋法藥敏結(jié)果顯示含有單一 blaOXA-23 的重組質(zhì)粒 Ros化空載質(zhì)粒 pET-28b(+)的 Rosetta 菌株相比亞胺培南的 MIC 值從4ug/ml,美羅培南的 MIC 值從 0.03ug/ml 增加 4ug/ml,即亞胺培南和 分別增加了 33 和 133 倍。而單一 ISAba1 的重組質(zhì)粒 Rosetta 表達質(zhì)粒pET-28b(+)的Rosetta菌株相比亞胺培南的MIC值從0.12ug羅培南的 MIC 值從 0.03ug/ml 增加 0.5ug/ml,即亞胺培南和美羅培

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]中國部分地區(qū)鮑曼不動桿菌多位點序列分型及碳青霉烯類抗生素耐藥機制研究[D]. 符一騏.浙江大學 2012
[2]碳青霉烯類抗生素耐藥鮑曼不動桿菌耐藥機制及同源性研究[D]. 周華.浙江大學 2008

碩士論文
[1]成都醫(yī)學院附一院鮑曼不動桿菌對氨基糖苷類藥物高水平耐藥的流行病學研究[D]. 王彥宏.成都醫(yī)學院 2016



本文編號：2966031