目的探索研究p53與線粒體共定位的最佳免疫熒光條件,為檢測蛋白質(zhì)與線粒體共定位的研究提供參考。方法低氧處理HeLa細胞,免疫印跡檢測p53表達;分別使用甲醇固定HeLa細胞、甲醇:丙酮混合液（體積比1∶1）固定HeLa細胞、4%多聚甲醛固定HeLa細胞,前二者不作通透處理,后者用0.1%聚乙二醇辛基苯基醚（Triton-X 100）通透,同時染色p53和線粒體;用4%多聚甲醛固定HeLa細胞后,降低Triton-X 100濃度至0.05%、0.025%、0.01%和0.005%,同時染色p53和線粒體;用4%多聚甲醛固定HeLa細胞后,Triton-X 100濃度降至0.01%和0.005%,通透標記p53后再次使用0.1%Triton-X 100重新通透細胞器膜染色線粒體。結(jié)果低氧后p53表達上調(diào)（P<0.01）,可用于后續(xù)免疫熒光實驗。使用甲醇和混合液固定組均可同時在細胞核及細胞質(zhì)內(nèi)觀察到明顯的p53信號,并可觀測到其與線粒體的共定位,混合液組共定位更明顯。多聚甲醛固定組用0.1%Triton-X 100通透后p53信號主要在細胞核內(nèi),未能觀察到共定位;使用4%多聚甲醛固定后... 

【文章來源】：華西醫(yī)學. 2020年08期

【文章頁數(shù)】：6 頁


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