目的先天缺牙是一種常見(jiàn)的遺傳性疾病,會(huì)導(dǎo)致咀嚼功能紊亂,造成發(fā)音、美觀及社會(huì)心理等諸多方面的問(wèn)題。先天缺牙的病人常常伴發(fā)一系列全身其他疾病,甚至與腫瘤的發(fā)生相關(guān)。研究表明,先天性頜面部發(fā)育不良尤其是牙齒缺失與腫瘤的發(fā)生二者共享相同的基因調(diào)節(jié)信號(hào)通路。近年研究證據(jù)提示從先天性牙齒缺失作為出發(fā)點(diǎn),追蹤和早期發(fā)現(xiàn)腫瘤的發(fā)生成為可能。癌癥的早期診斷是一個(gè)有效提高生存質(zhì)量和時(shí)間的方法,也具有成本效益。因此,在抗擊癌癥的過(guò)程中,尋找生物學(xué)或表型的風(fēng)險(xiǎn)標(biāo)記物具有重要意義。本研究旨在通過(guò)對(duì)先天缺牙伴腫瘤易感家系致病基因初步鎖定為切入點(diǎn),研究二者的信號(hào)通路或調(diào)節(jié)方式,為腫瘤疾病的基因篩查提供參考。內(nèi)容先天缺牙是指在牙胚形成過(guò)程中未能發(fā)育和未能形成牙齒,或是在牙胚發(fā)育早期,即牙蕾形成期的先天性異常。除已明確的綜合征型先天缺牙,很多非綜合征型先天缺牙患者也常伴隨全身其他系統(tǒng)的疾病或發(fā)育異常。本研究通過(guò)對(duì)一個(gè)先天缺牙并伴有腫瘤多發(fā)的家系進(jìn)行臨床表型的分析和全基因組外顯子的測(cè)序,初步探討牙齒先天缺失與全身疾病之間的內(nèi)在聯(lián)系。方法1.先天缺牙伴有全身其他疾病的患者家系臨床資料和血樣采集:對(duì)臨床接診過(guò)程中發(fā)現(xiàn)的先天缺牙伴全身其他組織器官發(fā)育異�；虬┳�、腫瘤發(fā)生的家系進(jìn)行包括口頜情況及全身狀況的詳細(xì)檢查,必要時(shí)于綜合性醫(yī)院或?qū)？漆t(yī)院進(jìn)行專項(xiàng)檢查,拍攝全景片以明確余留及缺失牙數(shù)、是否有埋伏阻生齒等;詳細(xì)追問(wèn)個(gè)人既往史、家族遺傳史等病史資料,繪制家系遺傳學(xué)圖譜,進(jìn)行遺傳特征分析;在符合倫理委員會(huì)各項(xiàng)規(guī)定及受檢者知情同意的前提下,抽取所有能取得聯(lián)系的家系成員靜脈外周血標(biāo)本置于EDTA抗凝管中。2.全外顯子測(cè)序:提取全血樣的前基因組DNA,經(jīng)分析檢測(cè)DNA降解程度低,無(wú)RNA、蛋白質(zhì)等污染,含量在0.6ug以上的合格DNA樣品,經(jīng)PCR線性擴(kuò)增后文庫(kù)質(zhì)檢,符合標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行下一步測(cè)序。3.全外顯子檢測(cè)結(jié)果描述和分析:首先進(jìn)行測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估,測(cè)序數(shù)據(jù)量、比對(duì)率和錯(cuò)誤率達(dá)到標(biāo)準(zhǔn),則進(jìn)行下一步分析,未達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)的重新建庫(kù)或重測(cè)序。將符合標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)序序列人類基因組序列第37版參考基因組(GRCh37)進(jìn)行比對(duì),篩查樣本中的變異信息,并對(duì)篩查出的突變進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和注釋。最后,利用已有數(shù)據(jù)庫(kù),通過(guò)分析突變的有害性、結(jié)合樣本情況和基于基因功能及表型等方法,過(guò)濾出與疾病相關(guān)的有價(jià)值的突變位點(diǎn)和(或)基因。結(jié)果1.通過(guò)對(duì)家系成員進(jìn)行全身檢查和口腔專科檢查,結(jié)合基因檢測(cè)結(jié)果證實(shí),本研究家系成員的先天缺牙為典型常染色體顯性遺傳方式,伴有明顯的腫瘤易感性。2.先證者及其母親在牙發(fā)育相關(guān)基因DSPP上共有25個(gè)突變位點(diǎn),其中包括23個(gè)位于外顯子區(qū)域的8個(gè)錯(cuò)義突變。3.在與腫瘤及牙齒發(fā)育共同致病的基因AXIN-2上共有6個(gè)突變位點(diǎn),有兩個(gè)位于外顯子區(qū)域的同義突變。4.發(fā)現(xiàn)新型致病基因ZNF609上有2個(gè)突變位點(diǎn),兩個(gè)突變均位于外顯子區(qū)域,其中一個(gè)為具有較強(qiáng)致病性的錯(cuò)義突變。5.AXIN-2以及ZNF609基因上的突變可能是該家系成員腫瘤易感的原因。結(jié)論1、本研究檢測(cè)出先證者及其母親在AXIN-2基因上的共同突變,可能與該家族非綜合征型牙齒先天缺失和巨結(jié)腸的發(fā)生有內(nèi)在聯(lián)系;而DSSP基因的突變可能是導(dǎo)致受檢者牙齒先天缺失、余留牙齒形態(tài)異常的潛在原因,其致病機(jī)制仍需進(jìn)一步的研究驗(yàn)證;AXIN-2基因和DSSP基因?qū)ο忍烊毖赖陌l(fā)生可能存在內(nèi)在的協(xié)同作用,二者的突變共同導(dǎo)致了牙齒發(fā)育異常的發(fā)生。2、本研究結(jié)果可以進(jìn)一步印證牙齒先天缺失與多種腫瘤的發(fā)生之間可能存在內(nèi)在聯(lián)系。3、先天缺牙可能是未來(lái)腫瘤研究中一個(gè)極具潛力的風(fēng)險(xiǎn)指標(biāo)。
【學(xué)位單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R782.1;R440
【部分圖文】：

表 1 非綜合征型缺失患者先天缺失恒牙牙位記錄患者及牙弓右側(cè) 左側(cè)8 7 6 5 4 3 2 1 1 2 3 4 5 6 7 8III-4上頜 ★ ★下頜 ☆ ★ ★ ☆ ★II-7上頜 ★ ★ ★下頜 ★ ★表 1：★表示牙齒缺失，☆為乳牙滯留。從表中可看出，先證者 III-4 下頜切牙缺失，除右側(cè)第三磨牙外第三磨牙全部缺失，側(cè)切牙為乳牙滯留；II-7 左側(cè)上頜第二磨牙缺失，全部第三磨牙缺失。

圖 3 II-4（先證者母親）口腔曲面體層片圖 2：先證者母親 II-7 輕中度牙周炎，先天缺失 5 顆恒牙（包括第三磨牙）。2. 基因組全外顯子測(cè)序及生物信息分析結(jié)果2.1 測(cè)序深度、覆蓋度分布有效測(cè)序數(shù)據(jù)通過(guò)一款基于 BWT 的快速比對(duì)工具 BWA 比對(duì)到人類基因組序列第 37 版參考基因組（The Genome Reference Consortium Human GenomeBuild，GRCh37），得到更節(jié)約空間，計(jì)算機(jī)機(jī)可讀的 bam 格式的生物信息二進(jìn)制文件。然后，用基于操作 sam 和 bam 文件格式的工具合集 SAMtools 對(duì)最初的比對(duì)結(jié)果進(jìn)行排序；再用 Picard 標(biāo)記重復(fù) reads（mark duplicate reads）。最后，

測(cè)序深度圖4：左圖為不同測(cè)序深度的堿基比例，右圖為不同深度上的累積堿基比例
【參考文獻(xiàn)】

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1 凌豫琦;張瓊;鄒靜;;混合牙列期兒童的牙齒數(shù)目及形態(tài)異常的分析[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;2015年06期

2 徐秀敏;梅陵宣;;axin-2與牙發(fā)育的關(guān)系[J];國(guó)際口腔醫(yī)學(xué)雜志;2008年06期

3 王鳳瑋;溫玲;朱思偉;姚嬙;蔡玉梅;馬剛;;結(jié)直腸癌組織中突變型Axin2對(duì)Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的調(diào)控及其機(jī)制[J];癌癥;2007年10期

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本文編號(hào)：2894635