放射治療是癌癥患者的主要治療方法之一。人類非小細胞肺癌腫瘤對輻射的抵抗是NSCLC治療的重要挑戰(zhàn)。而且,可傳送到腫瘤的輻射劑量又受到輻射對周圍健康組織附帶損害的限制。所以非常有必要尋找一個有效的輻射增敏劑。近年來,研究人員開發(fā)了一種新型釓基納米顆粒治療診斷劑(AGuIX(?)),用于MRI引導的放射治療(RT),并已被證明可作為有效的輻射增敏劑。已經(jīng)確定的是AGuIX納米顆粒是由于輻射誘導下低能光電子和俄歇電子的激發(fā)以及相互作用而放大了輻射效應(yīng)。在人非小細胞肺癌細胞H1299中,我們證明了 AGuIX納米顆粒加劇了輻射誘導的DNA DSBs損傷并減少了 DNA修復。在H1299異種移植瘤裸鼠模型中,我們觀察到在放射治療前預(yù)處理AGuIX納米顆粒顯著加劇了腫瘤細胞損傷以及明顯的生長抑制。我們的研究為發(fā)現(xiàn)AGuIX納米顆粒的放射增敏機制奠定了基礎(chǔ),為AGuIX納米顆粒作為放射增敏藥物提供了科學依據(jù)。目的:明確AGuIX納米顆粒在體內(nèi)外對非小細胞肺癌細胞H1299的輻射增敏作用;初步探究AGuIX納米顆粒的輻射增敏機制。方法:將細胞分為以下四組:對照組,AGuIX納米顆粒組,輻射組和AGuIX納米顆粒聯(lián)合輻射組。通過克隆形成實驗觀察細胞增殖,流式細胞術(shù)測定細胞凋亡,從而觀察AGuIX納米顆粒對非小細胞肺癌細胞H1299的輻射增敏作用。流式細胞術(shù)測定細胞周期觀察AGuIX納米顆粒對H1299細胞周期的影響。免疫熒光實驗和彗星實驗觀察AGuIX納米顆粒對H1299細胞的DNA損傷修復的影響。此外,我們使用蛋白質(zhì)印跡法檢測DNA損傷修復相關(guān)蛋白的表達情況。體內(nèi)實驗中,我們在不同處理組的人非小細胞肺癌細胞H1299荷瘤裸鼠中觀察腫瘤的生長情況以及腫瘤組織內(nèi)的DNA損傷情況。結(jié)果:通過克隆形成實驗我們觀察到AGuIX納米顆粒對H1299細胞有明顯的輻射增敏作用,并且利用流式細胞術(shù)在AGuIX納米顆粒聯(lián)合輻射組中檢測到更多的凋亡細胞。在流式細胞術(shù)測定細胞周期實驗中,我們觀察到與單獨使用輻射相比,在輻射前預(yù)處理AGuIX納米顆粒使H1299細胞G2/M期阻滯延遲。在免疫熒光實驗中我們觀察到在單獨輻射組和AGuIX納米顆粒聯(lián)合輻射組中,γH2AX 陽性細胞數(shù)有顯著差異,AGuIX納米顆粒聯(lián)合輻射組明顯多于單獨輻射組。彗星實驗表明,AGuIX納米顆粒加劇了輻射誘導的DNA損傷,并減少了DNA損傷的修復。體內(nèi)實驗中,在AGuIX納米顆粒和輻射的聯(lián)合治療組中觀察到顯著的腫瘤生長抑制以及腫瘤組織內(nèi)的DNA損傷,并在統(tǒng)計學上顯著高于單獨AGuIX納米顆粒組和單獨輻射組。結(jié)論:我們的數(shù)據(jù)表明AGuIX納米顆�？赡苁且环N新型的非小細胞肺癌輻射增敏劑。AGuIX納米顆粒的輻射增敏機制涉及到加重的DNA損傷以及減少的DNA損傷修復,但具體的信號通路仍有待研究。無論如何,我們的研究為AGuIX納米顆粒作為輻射增敏藥物提供了科學依據(jù)。
【學位單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R734.2;R730.55
【部分圖文】：

我們通過克隆形成實驗來探宄ＡＧｕＩＸ納米顆粒對非小細胞肺癌Ｈ１２９９細胞??輻射敏感性的影響�？寺⌒纬蓪嶒灲Y(jié)果顯示，ＡＧｕＩＸ納米顆粒增強了非小細胞??肺癌Ｈ１２９９細胞的輻射敏感性（圖１－２Ａ，?１－２Ｂ）。為了進一步評價ＡＧｕＩＸ納米??顆粒對非小細胞肺癌Ｈ１２９９細胞的輻射增敏作用，我們利用流式細胞術(shù)測定了??細胞凋亡。流式細胞術(shù)測定細胞凋亡的實驗結(jié)果顯示ＡＧｕＩＸ納米顆粒聯(lián)合照射??組的Ｈ１２９９細胞的總凋亡率明顯高于單獨照射組，且單獨ＡＧｕＩＸ納米顆粒組與??對照組相比也顯示出明顯升高的凋亡率（圖１－２Ｃ，１－２Ｄ）。??Ａ?Ｂ??１６??

圖.口目如，口閱叫.的

?ＨＴＣ－Ａ?ＨＴＣ－Ａ??圖１－２?ＡＧｕＩＸ納米顆粒對Ｈ１２９９細胞輻射敏感性的影響??（Ａ）?Ｈ１２９９細胞的克隆形成情況；（Ｂ）?Ｈ１２９９細胞的存活分數(shù)。細胞給予單獨使用ＡＧｕＩＸ??納米顆粒、單獨照射、ＡＧｕＩＸ納米顆粒和照射聯(lián)合處理。（Ｃ）照射后２４小時ＡＧｕＩＸ納米??顆粒引起的細胞凋亡增加的定性流式細胞術(shù)數(shù)據(jù)圖。（Ｄ）?ＡＧｕＩＸ納米顆粒和輻射聯(lián)合處理??誘導細胞凋亡增加的定量分析。數(shù)據(jù)分析為平均值士ＳＤ的結(jié)果ｅ?ＰＰｃＯ．ＯＳ；?＊＊Ｐ＜０．０１；??＊＊＊?尸?＜０．００１；?ｎ＝３）??１．３．３輻射誘導下ＡＧｕＩＸ納米顆粒對Ｈ１２９９細胞ＤＮＡ損傷的影響??為了探究輻射誘導下ＡＧｕＩＸ納米顆粒對非小細胞肺癌Ｈ１２９９細胞增敏的可??能機制，我們通過免疫熒光實驗檢測了與細胞ＤＮＡ損傷相關(guān)的蛋白ＹＨ２ＡＸ和??５３ＢＰ１的表達和聚集情況。實驗結(jié)果顯示，ＡＧｕＩＸ納米顆粒聯(lián)合照射組的Ｈ１２９９??細胞中表達ｙＨ２ＡＸ和５３ＢＰ１蛋白的陽性細胞數(shù)（單個細胞中ｆｏｃｉ＞１０）均明顯高??于單獨照射組（圖１－３Ａ，?１－３Ｂ）。說明輻射誘導下ＡＧｕＩＸ納米顆粒加劇了?Ｈ１２９９??細胞的ＤＮＡ損傷。??１７??
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1 杜亞南;新型釓基納米顆粒-AGuIX對非小細胞肺癌細胞輻射增敏作用的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2019年

本文編號：2878580