【摘要】：氣相色譜法是一種以氣體作為流動(dòng)相的色譜方法,具有分離效率高,樣品用量少,分析速度快和操作流程簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。隨著高效能色譜柱和高靈敏檢測(cè)器的出現(xiàn),氣相色譜法已廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、工業(yè)、食品、衛(wèi)生、醫(yī)藥、環(huán)境等領(lǐng)域,常用于大多數(shù)有機(jī)物的檢測(cè)分析。采用氣相色譜法檢測(cè)沸點(diǎn)高、極性大或熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)時(shí),往往需要通過(guò)衍生的方法將其轉(zhuǎn)化為適于分析的衍生物。常用的氣相衍生試劑包括硅烷化試劑、烷基化試劑、�；噭┑取Ｈ樗岷捅崾瞧咸烟谴x的重要產(chǎn)物,兩者在乳酸脫氫酶的催化下進(jìn)行可逆性轉(zhuǎn)化,以維持機(jī)體的穩(wěn)定。在細(xì)胞水平上,乳酸是葡萄糖無(wú)氧呼吸的最終代謝產(chǎn)物,可反映細(xì)胞的線粒體功能和糖酵解狀態(tài),還可作為癌細(xì)胞的能量來(lái)源。在臨床上,乳酸和丙酮酸是各類疾病篩選有效的指標(biāo)。測(cè)定機(jī)體乳酸和丙酮酸的含量具有重要的生理和病理意義,本實(shí)驗(yàn)建立了衍生氣相色譜的方法應(yīng)用于生物樣本中乳酸和丙酮酸的檢測(cè)。主要內(nèi)容如下:第一部分衍生氣相色譜法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基中的乳酸目的:建立衍生氣相色譜法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基中乳酸含量的新方法,并用于定量暴露于不同劑量鄰苯二甲酸-2-乙基己基酯的心肌細(xì)胞和不同培養(yǎng)時(shí)間的肺癌細(xì)胞的乳酸分泌量。方法:建立兩種細(xì)胞模型后,收集細(xì)胞培養(yǎng)基并用去離子水稀釋,氯甲酸乙酯作為衍生試劑,在優(yōu)化的色譜和衍生條件下,通過(guò)氣相色譜-氫火焰離子化檢測(cè)器定量分析培養(yǎng)基中的乳酸。結(jié)果:在最佳條件下,乳酸在0.100~5.00 mmol/L的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,回歸方程為Y=93.191+850.95X,相關(guān)系數(shù)(r)為0.9997。該方法的檢出限(LOD)為0.67μmol/L(S/N=3),定量限(LOQ)為2.20μmol/L(S/N=10)。細(xì)胞培養(yǎng)基中三種不同濃度的平均加標(biāo)回收率為99.60%~100.76%,精密度RSD5.49%。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)建立了一種檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基中乳酸含量的衍生氣相色譜方法。該方法簡(jiǎn)便、快速、靈敏,可用于定量生物樣品中的乳酸。第二部分衍生化USAEME-GC同時(shí)檢測(cè)動(dòng)物組織中的乳酸和丙酮酸目的:將液相微萃取和氣相衍生方法相結(jié)合,建立衍生超聲乳化液相微萃取-氣相色譜法(USAEME-GC)同時(shí)檢測(cè)動(dòng)物組織中的乳酸和丙酮酸,并用于定量小鼠缺氧模型心臟組織中的乳酸和丙酮酸。方法:建立動(dòng)物缺氧模型后,心臟組織用1.2%的高氯酸進(jìn)行勻漿,甲氧胺鹽酸鹽和氯甲酸異丁酯作為衍生試劑,在優(yōu)化的USAEME-GC條件下,用氣相色譜-氫火焰離子化檢測(cè)器對(duì)心臟組織中的乳酸和丙酮酸進(jìn)行定量分析。結(jié)果:在最佳條件下,乳酸和丙酮酸分別在50.0~1.00×10~3μmol/L、1.00~100.0μmol/L的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,回歸方程分別為Y=199.04+3.7173 X,r=0.9999;Y=2.3100 X-1.1838,r=0.9999。乳酸檢出限為0.12μmol/L,定量限為0.41μmol/L;丙酮酸檢出限為0.29μmol/L,定量限為0.97μmol/L。兩種分析物的加標(biāo)回收率為93.60%~102.80%,精密度小于6.20%。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)建立了一種同時(shí)檢測(cè)心臟組織中乳酸丙酮酸含量的原位衍生超聲乳化液相微萃取-氣相色譜方法。該方法簡(jiǎn)單、快速、靈敏,為生物樣品中乳酸和丙酮酸的同時(shí)檢測(cè)提供了定量方法以及為線粒體疾病的診斷提供了技術(shù)輔助支持。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R446.1;O657.71
【文章目錄】：
中文摘要
abstract
英文縮寫(xiě)
第一部分 衍生氣相色譜法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基中的乳酸
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
第二部分 衍生化USAEME-GC同時(shí)檢測(cè)動(dòng)物組織中的乳酸和丙酮酸
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
結(jié)論
綜述 生物樣本中乳酸色譜檢測(cè)方法的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷

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本文編號(hào)：2870766