【摘要】：目的1.通過基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)直接檢測血培養(yǎng)陽性標(biāo)本中腸桿菌科細(xì)菌水解厄他培南的能力,從而快速篩查產(chǎn)碳青霉烯酶腸桿菌科細(xì)菌。2.建立利用MALDI-TOF MS對耐碳青霉烯類肺炎克雷伯菌(CRKP)進行分型的方法,從而快速進行CRKP醫(yī)院感染流行病學(xué)分析。3.利用MALDI-TOF MS篩選獲得ST11型產(chǎn)KPC-2碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌的單個特異峰,快速篩查此類型別肺炎克雷伯菌,從而為臨床合理有效治療和院感控制提供依據(jù)。方法1.選取32株產(chǎn)碳青霉烯酶和32株不產(chǎn)碳青霉烯酶的腸桿菌科細(xì)菌用于模擬血培養(yǎng)陽性標(biāo)本,利用MALDI-TOF MS直接檢測此類模擬標(biāo)本中腸桿菌科細(xì)菌對厄他培南的水解能力,根據(jù)厄他培南及其水解產(chǎn)物質(zhì)量峰的強度計算logRQ值,并確定其cutoff值。收集385例已檢出腸桿菌科細(xì)菌的臨床血培養(yǎng)陽性標(biāo)本進行MALDI-TOF MS厄他培南水解試驗,并對水解試驗陽性的菌株以及水解試驗陰性但對碳青霉烯類抗菌藥物耐藥的菌株進行碳青霉烯酶基因檢測。2.選取52株包含25種ST型的CRKP,根據(jù)信噪比(S/N)、變異系數(shù)(CV系數(shù))以及不同分組的S/N比值確定特異峰挑選標(biāo)準(zhǔn),并篩選出一系列特異質(zhì)量峰,隨后利用這些特異峰對另外24株包含本實驗室常見5種ST型的CRKP進行分型,同時與多位點序列分型(MLST)結(jié)果進行比較。3.首先選取118株肺炎克雷伯菌(ST11型產(chǎn)KPC-2肺炎克雷伯菌67株,非該型別的肺炎克雷伯菌51株)作為特異峰篩選組,對血平板上的純菌落進行蛋白質(zhì)提取點樣后,利用MALDI-TOF MS獲得評分≥2.30的質(zhì)量圖譜,通過ClinPro Tools 3.0軟件和Flexanalysis 3.0軟件篩選出ST11型產(chǎn)KPC-2肺炎克雷伯菌的最特異質(zhì)量峰。其次選取89株肺炎克雷伯菌(ST11型產(chǎn)KPC-2肺炎克雷伯菌37株,非該型別的肺炎克雷伯菌52株),同樣的試驗方法獲取質(zhì)量圖譜,對該特異峰進行驗證。最后隨機收集95株麥康凱平板上生長的肺炎克雷伯菌且質(zhì)譜評分≥2.00的臨床分離株及其圖譜,進一步評估此特異峰的臨床應(yīng)用價值。結(jié)果1.在64個模擬血培養(yǎng)陽性標(biāo)本中,32株不產(chǎn)碳青霉烯酶的菌株logRQ值平均為-0.85±0.14,32株產(chǎn)碳青霉烯酶的菌株logRQ值平均為0.87±0.55,當(dāng)cutoff值設(shè)定為-0.45時,根據(jù)logRQ值直接判斷腸桿菌科細(xì)菌是否產(chǎn)碳青霉烯酶的敏感度和特異度均為100%。收集已檢出腸桿菌科細(xì)菌的臨床血培養(yǎng)陽性標(biāo)本共385例,其中81.3%(313/385)為碳青霉烯類抗菌藥物敏感的腸桿菌科細(xì)菌(CSE),logRQ值均小于-0.45,符合率為100%,另外18.7%(72/385)為碳青霉烯類抗菌藥物耐藥的腸桿菌科細(xì)菌(CRE),其中62株的logRQ值大于-0.45,10株logRQ值小于-0.45,這些菌株中67株檢出碳青霉烯酶基因,另外5株未檢出常見的碳青霉烯酶基因。以碳青霉烯酶基因檢測為金標(biāo)準(zhǔn),利用MALDI-TOF MS厄他培南水解試驗直接篩查碳青霉烯酶的特異度和敏感度分別為100%(5/5)和92.5%(62/67)。2.按照標(biāo)準(zhǔn)(1)S/N≥4(2)S/N比值≥1.5(3)CV≤40%,在52株CRKP中共篩選出45個特異峰,利用特異峰對其中的29株CRKP(只選取包含3個或3個以上菌株的ST型)進行分型,與MLST分型結(jié)果符合率最高,達(dá)82.8%,按照此標(biāo)準(zhǔn)篩選出的特異峰對另外24株CRKP進行分型,與MLST分型結(jié)果符合率達(dá)83.3%。3.在一定試驗條件下,通過MALDI-TOF MS篩選獲得ST11型產(chǎn)KPC-2肺炎克雷伯菌的最佳特異峰為m/z 4521,以該峰作為鑒別此型別細(xì)菌的特征峰,其特異度和敏感度分別為98.1%和97.3%,且該特異峰的重復(fù)性達(dá)97.4%。而采用臨床常規(guī)鑒定圖譜對特異峰的臨床應(yīng)用價值進行評估,其特異度和敏感度仍可達(dá)95.2%和96.9%。結(jié)論1.利用MALDI-TOF MS厄他培南水解試驗可快速、準(zhǔn)確地篩查血培養(yǎng)陽性標(biāo)本中腸桿菌科細(xì)菌的碳青霉烯酶,為臨床早期合理的抗感染治療提供重要依據(jù)。2.利用MALDI-TOF MS篩選出不同ST型CRKP的一系列特異峰,用于CRKP的分子流行病學(xué)分析,從而快速有效地監(jiān)測醫(yī)院感染的暴發(fā)流行。3.微生物實驗室在臨床日常工作中可依據(jù)肺炎克雷伯菌鑒定圖譜是否存在特異峰m/z 4521來直接鑒別ST11型產(chǎn)KPC-2肺炎克雷伯菌,從而快速準(zhǔn)確地為臨床合理有效治療和院感控制提供依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R446.5;O657.63
【圖文】：

圖 1：MALDI-TOF MS 檢測的厄他培南質(zhì)量峰和水解產(chǎn)物質(zhì)量峰Figure 1 Peaks of ertapenem and its hydrolysed, decarboxylated form detected by MALDI-TOFMS注：ETP 是對照，厄他培南可自行發(fā)生一定程度的水解；Positive 是 MALDI-TOF MS 厄他培南水解試驗陽性結(jié)果；Negative 是 MALDI-TOF MS 厄他培南水解試驗陰性結(jié)果3.1.3 logRQ 值及其 cutoff 值根據(jù)公式計算 32 株產(chǎn)酶株和 32 株不產(chǎn)酶株的 logRQ 值，繪制散點圖，見圖 2。與厄他培南溶液孵育 2 小時后，產(chǎn)酶株 logRQ 值的平均值為 0.87±0.55，不產(chǎn)酶株 logRQ 值的平均值為-0.85±0.14。繪制利用 logRQ 值判斷腸桿菌科細(xì)菌是否產(chǎn)碳青霉烯酶的方法的 ROC 曲線，見圖 3，曲線下面積（area under curve，AUC）為 1.00，P 值<0.001，表明根據(jù) logRQ 值篩查腸桿菌科細(xì)菌是否產(chǎn)碳青霉烯酶具有很高的敏感度和特異度。當(dāng)將cutoff值設(shè)定為-0.45時，尤登指數(shù)（Youden

圖 2：32 株 CRE 和 32 株 CSE 模擬血培養(yǎng)標(biāo)本水解試驗 logRQ 值分布Figure 2 LogRQ values of blood cultures simulated by 32 CRE and 32 CSE

圖 3 模擬血培養(yǎng)標(biāo)本 logRQ 值的統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果igure 3 Statistical analys is with the logRQ values of the blood culture simulat：A.利用 logRQ 值檢測菌株碳青霉烯酶的方法的受試者工作曲線（ROCB.不同 cutoff 值對應(yīng)的敏感度、特異度和尤登指數(shù)。14

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 賀吉童;倪文濤;王睿;吳春福;;多黏菌素聯(lián)合用藥治療產(chǎn)肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌體外研究進展[J];中國臨床藥理學(xué)雜志;2016年24期

2 王鵬鯤;陳定強;俞輝;;多重耐藥肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶的檢測和分析[J];國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志;2016年24期

3 黃秋艷;邵世和;周海健;茆海豐;金丹婷;陳開勇;;耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌基因檢測及其同源性分析[J];中國抗生素雜志;2017年01期

4 牛翠;楊靖;時東彥;;應(yīng)用碳青霉烯酶失活法檢測產(chǎn)碳青霉烯酶鮑曼不動桿菌[J];中國感染與化療雜志;2017年01期

5 徐建民;陳水平;陳建魁;;耐藥性細(xì)菌碳青霉烯酶檢測方法研究進展[J];標(biāo)記免疫分析與臨床;2017年03期

6 吳海燕;譚斌;張志軍;姜梅杰;;某院院內(nèi)耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌分子流行病學(xué)研究[J];中華實驗和臨床感染病雜志(電子版);2017年02期

7 黃小榮;梁昌盛;曹開源;;耐亞胺培南鮑曼不動桿菌碳青霉烯酶基因研究[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2017年08期

8 朱敏;邵彪;龐峰;趙岐剛;;碳青霉烯酶檢測方法的研究進展[J];中國實驗診斷學(xué);2016年08期

9 張琪;程訓(xùn)民;沈繼龍;;碳青霉烯類抗生素耐藥鮑曼不動桿菌碳青霉烯酶和整合子的檢測[J];中國抗生素雜志;2015年05期

10 魯艷芝;;微生物關(guān)于碳青霉烯酶耐藥機制的研究[J];赤峰學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版);2015年22期

相關(guān)會議論文 前10條

1 茆海豐;黃秋艷;周海健;金丹婷;陳開勇;;肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因檢測及其同源性分析[A];第七屆中國臨床微生物學(xué)大會暨微生物學(xué)與免疫學(xué)論壇論文匯編[C];2016年

2 許春燕;郭鋒;王靜;魏劍鋒;錢嬌;彭敏飛;厲世笑;余素飛;;產(chǎn)碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌感染的危險因素探討[A];2014年浙江省檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2014年

3 何京;馮軍花;李燕;張金艷;;碳青霉烯酶檢測研究進展[A];第十一屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會摘要匯編[C];2016年

4 胡麗慶;史煜波;孫定河;史穎嬌;黃志剛;;寧波地區(qū)腸桿菌科細(xì)菌碳青霉烯酶基因的檢測研究[A];2011年浙江省檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2011年

5 王勇;李慧玲;張曉麗;范學(xué)才;;重癥監(jiān)護病房患者感染泛耐藥鮑曼不動桿菌碳青霉烯酶基因的研究[A];第七屆中國臨床微生物學(xué)大會暨微生物學(xué)與免疫學(xué)論壇論文匯編[C];2016年

6 吳丹丹;劉進;;39例碳青霉烯耐藥的肺炎克雷伯桿菌感染的臨床分析[A];2009香港-北京-杭州內(nèi)科論壇暨2009年浙江省內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

7 童照威;邱佳;沈斌;李曉峰;王偉洪;;2007~2014年耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌流行病學(xué)調(diào)查與耐藥分析[A];2015年杭嘉湖感染性疾病學(xué)術(shù)年會暨國家級繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育培訓(xùn)班論文匯編[C];2015年

8 楊婧;張彭;褚美玲;馬均;任微;于靜波;薛文成;;自動細(xì)菌鑒定藥敏系統(tǒng)對肺炎克雷伯菌產(chǎn)碳青霉烯酶菌株檢測評價[A];第四屆中國臨床微生物學(xué)大會暨微生物學(xué)與免疫學(xué)論壇論文匯編[C];2013年

9 白永鳳;祝進;陸軍;程穎;余旭良;;耐碳青霉烯酶腸桿菌耐藥基因及同源性分析[A];2015浙江省檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2015年

10 吳丹丹;劉進;;39例碳青霉烯耐藥肺炎克雷伯桿菌感染臨床分析[A];第二屆傳染病診治高峰論壇暨2009年浙江省感染病、肝病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

相關(guān)重要報紙文章 前5條

1 北京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院檢驗科 陶慶春　李亞娜;美國發(fā)布急救護理設(shè)施上碳青霉烯類耐藥或產(chǎn)碳青霉烯酶的腸桿菌科細(xì)菌感染控制指南[N];科學(xué)時報;2011年

2 Helio S.Sader 等 呂文 編譯;抗感染新藥：新碳青霉烯和Trinem[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報;2001年

3 本報記者 胡彬;感染控制須多方攜手并進[N];健康報;2019年

4 郭文;美日主導(dǎo)下的“培南”市場[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2006年

5 嚴(yán)冰;市場有需求 老樹冒新枝[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2002年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李小燕;產(chǎn)NDM-5碳青霉烯酶腸桿菌科細(xì)菌的分子特征研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2017年

2 劉彩霞;耐碳青霉烯腸桿菌科細(xì)菌的耐藥機制及MALDI-TOF在碳青霉烯酶快速檢測中的應(yīng)用研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2018年

3 楊啟文;中國碳青霉烯耐藥腸桿菌科菌流行病學(xué)及耐藥機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

4 胡燕燕;耐碳青霉烯革蘭陰性桿菌分子流行病學(xué)及MALDI-TOF MS在碳青霉烯耐藥決定子快速檢測中的應(yīng)用研究[D];浙江大學(xué);2014年

5 毛梧宇;β-內(nèi)酰胺酶熒光探針及其在耐藥致病菌檢測中的應(yīng)用[D];華東理工大學(xué);2017年

6 胡付品;碳青霉烯類耐藥腸桿菌科細(xì)菌的耐藥機制及其所致醫(yī)院感染控制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

7 田雪;多利培南及其聯(lián)合用藥對不同碳青霉烯酶基因鮑曼不動桿菌體外和體內(nèi)抗菌作用研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

8 馬廣才;幾類含鐵酶和糖相關(guān)酶催化反應(yīng)機理的理論研究[D];山東大學(xué);2016年

9 郝瑩瑩;山東地區(qū)產(chǎn)NDM大腸埃希菌分子特征和傳播機制研究[D];山東大學(xué);2017年

10 劉麗琳;不動桿菌屬OXA-23及OXA-24/40型碳青霉烯酶傳播機制研究[D];浙江大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李小菊;耐碳青霉烯類銅綠假單胞菌感染危險因素、耐藥分析及分子流行病學(xué)研究[D];南昌大學(xué);2019年

2 王粟;上海地區(qū)血流感染腸桿菌科細(xì)菌流行病學(xué)及IMP型碳青霉烯酶播散機制研究[D];上海交通大學(xué);2018年

3 余佳佳;MALDI-TOF質(zhì)譜技術(shù)在腸桿菌科細(xì)菌的碳青霉烯酶快速篩查和分子流行病學(xué)中的應(yīng)用研究[D];上海交通大學(xué);2018年

4 陳婭;CRKP的碳青霉烯酶基因檢測和同源性分析[D];遵義醫(yī)科大學(xué);2019年

5 錢夏娜;基于碳青霉烯探針的β-內(nèi)酰胺酶抑制劑篩選和化學(xué)標(biāo)簽研究[D];華東理工大學(xué);2019年

6 董大光;肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因型研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2019年

7 王娟;呼吸道CRE耐藥機制及分子流行病學(xué)研究[D];湖南師范大學(xué);2018年

8 劉香花;產(chǎn)碳青霉烯酶同時耐多粘菌素的腸桿菌科細(xì)菌的分子流行特點分析[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2018年

9 閆金榮;碳青霉烯耐藥肺炎克雷伯菌耐藥機制及分子流行病學(xué)初步研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2018年

10 何京;多方法檢測碳青霉烯酶對比研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2017年

本文編號：2792956