【摘要】：[目的]探究核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NuclearFactor-kappaB,NF-κB)的抑制劑——吡咯烷二硫代氨基甲酸(Pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)對骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone marrow mesenchymal stromal cells,BMSC)治療多器官功能障礙綜合征(Multiple organ dysfunction syndrome,MODS)大鼠中高遷移率族蛋白B1(High mobility group protein B1,HMGB1)的表達及其所介導的炎癥信號通路的調(diào)控作用,為臨床治療MODS提供新的理論及實驗依據(jù)。[方法]體外提取并培養(yǎng)SD(Sprague Dawley,SD)大鼠的BMSC,取第4代BMSC用于實驗;將雌性SD大鼠按照隨機數(shù)字表法分成5組,每組20只:假手術組(Sham)組、MODS 組、BMSC 組、MODS+PDTC(M+P)組,MODS+BMSC+PDTC(M+B+P)組。經(jīng)外周靜脈注射脂多糖(LPS)1mg/kg建立MODS模型,Sham組注射等量磷酸鹽緩沖液,BMSC組在造模后2h將BMSC(106個/只,用生理鹽水稀釋至0.5ml)經(jīng)尾靜脈輸注到動物體內(nèi),M+P組在造模后2h給予PDTC(120mg/kg,腹腔注射,一天一次),M+B+P組在BMSC治療MODS后2h給予PDTC,劑量及方法同上。觀察各組動物的一般情況及存活率;抽取各組動物在1d、3d的血液,檢測血常規(guī)(白細胞WBC、中性粒細胞百分比NEU%)、腎功能指標(尿素氮BUN、血肌酐Scr)、心肌酶學指標(肌酸激酶同工酶CK-MB、乳酸脫氫酶LDH);然后取術后3d各組動物的腎臟、心臟進行蘇木素-伊紅染色(HE),觀察各器官的形態(tài)學變化;并采用實時熒光定量PCR(Q-PCR)技術及蛋白印跡法(Western Blot)檢測1d及3d時p-p65(NF-κB的活化成分)、HMGB1 及其 TOLL 樣受體-4(Toll-like Receptor-4,TLR4)在腎臟及心臟器官中的表達變化。[結果](1)各組動物的一般情況及存活率:Sham組動物的一般情況變化不大;MODS組動物的活動減弱,精神萎靡;經(jīng)BMSC或/和PDTC治療后,動物一般情況較MODS組好轉(zhuǎn);在術后1d,這五組動物的存活率依次是100%、60%、70%、70%、80%,后續(xù)時間點無新發(fā)死亡。(2)與Sham組比較,MODS組中血常規(guī)、腎功能及心肌酶學指標的水平明顯異常(P0.05),HE染色顯示組織中大量炎癥細胞浸潤,充血、淤血、水腫,損傷明顯;經(jīng)BMSC或PDTC治療后各器官功能指標明顯改善,組織損傷不同程度減輕;而且經(jīng)BMSC聯(lián)合PDTC治療后,組織結構修復情況比單獨使用BMSC或PDTC更加顯著。(3)Q-PCR及Western Blot的檢測結果顯示:經(jīng)LPS刺激后,在腎臟及心臟中HMGB1、TLR4及p-p65的表達水平較Sham組均明顯上調(diào)(P0.05);經(jīng)BMSC或PDTC治療后,這三個因子的表達水平較MODS組明顯降低(P0.05),而且這兩組比較,大部分因子的表達水平無明顯變化(P0.05);M+B+P組,這三個因子的表達較MODS組明顯下降(P0.05)。此外,與單獨使用BMSC或PDTC比較,部分因子的表達明顯下調(diào)(P0.05)。[結論](1)LPS誘導的MODS可導致HMGB1及其受體TLR4的過表達,激活NF-κB。(2)BMSC的移植治療能抑制HMGB1介導的炎癥信號通路,減弱LPS引起的器官功能損害,減輕組織損傷,提高存活率。(3)PDTC能夠抑制NF-κB的活化,保護各臟器功能,下調(diào)HMGB1-TLR4的表達,降低死亡率,這些作用與BMSC一致,而且兩者聯(lián)合其治療效應增強。(4)BMSC調(diào)節(jié)炎癥反應的機制之一可能是抑制HMGB1-TLR4-NF-κB信號通路的激活。
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R459.7
【圖文】：

３器官功能的變化逡逑３．１邋ＭＯＤＳ模型中各器官功能變化逡逑各項指標檢測結果提示（表１及圖１）：與Ｓｈａｍ組比較，造模后２４ｈ：白逡逑細胞（ＷＢＣ）的水平明顯降低，小于２倍Ｓｈａｍ組（Ｐ＜０．０５）；中性粒細胞的百逡逑分數(shù)（ＮＥＵ％）大于邋２邋倍邋Ｓｈａｍ邋組（Ｐ＜０．０５）。逡逑肝腎功能指標：ＴＢ的水平大于２倍Ｓｈａｍ組，ＡＬＴ水平雖然升高，但無統(tǒng)逡逑計學意義（Ｐ＞0．0５），谷草轉(zhuǎn)氨酶（ＡＳＴ）的水平明顯升高，接近Ｓｈａｍ組的２逡逑２９逡逑

注：＊表示與Ｓｈａｍ組比較，＃表示與ＭＯＤＳ組比較，ａ表示與ＢＭＳＣ組比較，ｂ逡逑表示與Ｍ＋Ｐ組比較，＆表示組內(nèi)與Ｉｄ組比較Ｐ＜０．０５，差異有統(tǒng)計學意義。逡逑３．２．２腎功能指標變化（圖３）逡逑尿素氮（ＢＵＮ）檢測結果（表４）：組間比較，與Ｓｈａｍ組比較，ＭＯＤＳ組逡逑的ＢＵＮ水平在Ｉｄ及３ｄ雖然升高，但Ｐ＞０．０５，無統(tǒng)計學意義，其他三組在Ｉｄ逡逑及３ｄ時其水平均無明顯變化（Ｐ＞０．０５）。與ＭＯＤＳ組比較，ＢＭＳＣ組在Ｉｄ及逡逑３ｄ時其水平均下降，但在３ｄ時明顯下降（Ｐ＜０．０５）邋；邋Ｍ＋Ｐ組、Ｍ＋Ｂ＋Ｐ組的變逡逑化情況與ＢＭＳＣ組一致，在Ｉｄ時下降不明顯（Ｐ＞０．０５），在３ｄ時明顯下降逡逑（Ｐ＜０．０５）。ＢＭＳＣ組、Ｍ＋Ｐ組以及Ｍ＋Ｂ＋Ｐ組這三組在同一時間點間兩兩比較逡逑均無明顯變化（Ｐ＞０．０５）。逡逑組內(nèi)不同時間點比較，僅Ｍ＋Ｐ組在３ｄ時比Ｉｄ明顯降低（Ｐ＜０．０５）。其他四逡逑組在Ｉｄ與３ｄ之間比較，ＢＵＮ水平無明顯變化，Ｐ＞０．０５，無統(tǒng)計學意義。逡逑４邋８１＾在各組不同間點的（無±１？，位＿0１幾）逡逑

注：＊表示與Ｓｈａｍ組比較，＃表示與ＭＯＤＳ組比較，ａ表示與ＢＭＳＣ組比較，ｂ逡逑表示與Ｍ＋Ｐ組比較，＆表示組內(nèi)與Ｉｄ組比較Ｐ＜０．０５，差異有統(tǒng)計學意義。逡逑３．２．２腎功能指標變化（圖３）逡逑尿素氮（ＢＵＮ）檢測結果（表４）：組間比較，與Ｓｈａｍ組比較，ＭＯＤＳ組逡逑的ＢＵＮ水平在Ｉｄ及３ｄ雖然升高，但Ｐ＞０．０５，無統(tǒng)計學意義，其他三組在Ｉｄ逡逑及３ｄ時其水平均無明顯變化（Ｐ＞０．０５）。與ＭＯＤＳ組比較，ＢＭＳＣ組在Ｉｄ及逡逑３ｄ時其水平均下降，但在３ｄ時明顯下降（Ｐ＜０．０５）邋；邋Ｍ＋Ｐ組、Ｍ＋Ｂ＋Ｐ組的變逡逑化情況與ＢＭＳＣ組一致，在Ｉｄ時下降不明顯（Ｐ＞０．０５），在３ｄ時明顯下降逡逑（Ｐ＜０．０５）。ＢＭＳＣ組、Ｍ＋Ｐ組以及Ｍ＋Ｂ＋Ｐ組這三組在同一時間點間兩兩比較逡逑均無明顯變化（Ｐ＞０．０５）。逡逑組內(nèi)不同時間點比較，僅Ｍ＋Ｐ組在３ｄ時比Ｉｄ明顯降低（Ｐ＜０．０５）。其他四逡逑組在Ｉｄ與３ｄ之間比較，ＢＵＮ水平無明顯變化，Ｐ＞０．０５，無統(tǒng)計學意義。逡逑表４邋８１＾在各組不同時間點的變化（無±１？

【參考文獻】

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本文編號：2782148