【摘要】：背景:口腔慢性移植物抗宿主病(Oral chronic graft versus host disease,cGVHD)是一種異基因造血干細胞移植(allogenetic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)后的常見并發(fā)癥,是影響患者移植后長期生存質(zhì)量的因素之一。但目前口腔cGVHD病因尚不明確。非編碼微小RNA(micro RNA,mi RNA)可通過調(diào)節(jié)相關(guān)靶基因的表達,從而調(diào)控各種免疫細胞的產(chǎn)生、增殖、發(fā)育以及免疫應(yīng)答。目前mi RNA已被發(fā)現(xiàn)可作為多種疾病發(fā)生發(fā)展及預(yù)后的生物學標志。目的:通過分析口腔cGVHD與無口腔cGVHD患者外周循環(huán)血mi RNA的表達差異,通過生物信息學分析與驗證,初步分析mi RNA在口腔cGVHD發(fā)生發(fā)展中可能的調(diào)控作用。方法:1.回顧分析94例HLA全相合的異基因干細胞移植患者病史資料,探討口腔cGVHD的臨床特點及其發(fā)生與患者性別、預(yù)處理方案ATG使用情況等患者性別、女供男移植、移植物來源、回輸單個核細胞數(shù)等臨床指標的相關(guān)性。2.口腔cGVHD、無口腔cGVHD、健康對照各8例取外周靜脈血,構(gòu)建mi RNAs文庫,采用Illumina Hiseq 2500平臺進行測序,分析mi RNAs差異表達,通過Go term和KEGG等生物信息學技術(shù)分析探索與口腔cGVHD發(fā)生有關(guān)的信號通路。3.采用定量實時熒光定量PCR(quantitative real time PCR,q RT-PCR)檢測15例口腔cGVHD、15例無口腔cGVHD、15例健康對照外周靜脈血mi RNA-505-5p、mi RNA-769-5p表達情況,通過Go term和KEGG等生物信息學分析其靶基因及作用信號通路。4.采用q RT-PCR檢測口腔cGVHD和無口腔cGVHD各15例外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中Smad2(Drosophila mothers against decapentaplegic protein 2)表達水平,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測各組血漿中Smad2蛋白含量。結(jié)果:1.在94例HLA全相合的異基因干細胞移植患者中,46.8%出現(xiàn)口腔cGVHD。移植后300天內(nèi)未發(fā)生口腔cGVHD的患者在其后發(fā)生口腔cGVHD的可能性較低。口腔cGVHD表征多樣,除了特征性的網(wǎng)狀白色條紋樣病損,口干、潰瘍/糜爛是最常見的口腔表征,出現(xiàn)比例分別為63.63%與50%。這些病損可單獨伴隨網(wǎng)狀白色條紋樣病出現(xiàn)或多種同時出現(xiàn)�？谇籧GVHD組患者口腔表征評分為3.81±2.06,VAS評分為3.31±2.13,兩者呈正相關(guān)。未發(fā)現(xiàn)患者性別、預(yù)處理方案ATG使用情況、女供男移植、移植物來源、回輸單個核細胞數(shù)等臨床指標與口腔cGVHD的發(fā)生存在相關(guān)性。2.口腔cGVHD與無口腔cGVHD組比較發(fā)現(xiàn),在兩組中均有表達mi RNA為549個,具有顯著性差異為72個,包括上調(diào)表達32個,下調(diào)表達40個;口腔cGVHD組與健康對照組比較發(fā)現(xiàn),在兩組中均有表達mi RNA為547個,具有顯著性差異為327個,包括上調(diào)表達164個,下調(diào)表達163;無口腔cGVHD組與健康對照組比較發(fā)現(xiàn),在兩組中均有表達mi RNA為546個,具有顯著性差異為245個,包括上調(diào)表達160個,下調(diào)表達85個;三組比較發(fā)現(xiàn)三組中均有表達mi RNA為518個,顯著差異191個。mi RNAs靶基因主要集中在生化過程中的轉(zhuǎn)錄環(huán)節(jié)、細胞組分中的膜蛋白及分子功能中的蛋白結(jié)合。差異基因主要集中在癌相關(guān)通路、調(diào)節(jié)磷脂酰肌醇3—激酶/蛋白激酶B(Phosphatidylinositol 3-Protein kinase B,PI3K-Akt)等信號通路。3.非口腔cGVHD患者外周血循環(huán)mi RNA-769-5p、mi RNA-505-5p表達最高,口腔cGVHD患者次之,健康對照最低。通過ROC分析mi RNA-769-5p、mi RNA-505-5p在口腔cGVHD診斷上具有一定價值,通過生物信息學方法分析得知口腔cGVHD發(fā)生可能與PI3K-Akt信號通路,TGF-β/Smad信號通路相關(guān)。4.口腔cGVHD組患者血漿中Smad2蛋白及PBMC中Smad2 m RNA表達較無口腔cGVHD組增高。外周血Smad2 m RNA表達與mi RNA-769-5p呈負相關(guān)。結(jié)論:1、口腔cGVHD是allo-HSCT后的常見并發(fā)癥,常發(fā)生于移植后300天內(nèi)�？谇籧GVHD表征多樣,除了特征性的網(wǎng)狀白色條紋樣病損,口干、潰瘍/糜爛是最常見的口腔cGVHD表征。尚未發(fā)現(xiàn)患者性別、預(yù)處理方案ATG使用情況等患者性別、女供男移植、移植物來源、回輸單個核細胞數(shù)等臨床指標與口腔cGVHD的發(fā)生存在相關(guān)性。2、口腔cGVHD、非口腔cGVHD、健康對照之間外周血循環(huán)mi RNA存在差異性表達。mi RNA可能通過影響PI3K-Akt、TGF-β/Smad等信號通路參與口腔cGVHD的發(fā)生,mi RNA-769-5p、mi RNA-505-5p在口腔cGVHD診斷上具有一定價值。3、外周循環(huán)血內(nèi)的高表達的Smad2可能與口腔cGVHD發(fā)生有關(guān)。
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R457.7;R781.5
【圖文】：

圖 1-1 VAS 疼痛評分標準Fig 1-1 Scoring criteria of VASVAS：即視覺模擬評分法。在紙上畫一條長約 10 cm 的橫線，橫線的一端為 0，表示無痛；另一端為 10，表示重度疼痛；中間部分表示不同程度的疼痛。唾液量記錄：囑患者靜坐，頭前傾略低，5 分鐘內(nèi)向 5ml 無菌離心管內(nèi)緩緩?fù)氯敕谴碳ば匀�，記錄患者唾液量�?.2.4 統(tǒng)計學處理采用 SPSS16.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。采用卡方檢驗分析供受者情況（患者性別、預(yù)處理方案 ATG 使用情況等患者性別、女供男移植、移植物來源、回輸單個核細胞數(shù)等）對口腔 cGVHD 的影響，患者年齡、回輸單個核細胞數(shù)與口腔表征及疼痛評分計分采用 Spearman 等級相關(guān)法，多因素分

口腔表征為口干、潰瘍糜爛，其它常見病損類型為紅斑樣病損及黏膜萎縮。各種口腔表征可單獨存在或合并存在。典型口腔表征如圖（1-3）：圖1-3A 某口腔cGVHD患者口腔表征情況Figure 1-3A Oral manifestation of an oral cGVHD patient口腔 cGVHD 患者口腔內(nèi)黏膜組織出現(xiàn)網(wǎng)狀白色條紋樣病損，可波及唇、舌、頰、上腭、牙齦，同時部分部位（雙頰、后牙區(qū)前庭溝等）出現(xiàn)可合并出現(xiàn)黏膜潰瘍糜爛。圖1-3B口腔cGVHD常見口腔表征Figure 1-3B Oral manifestations among oral cGVHD patientsB-1 舌背粘膜同時出現(xiàn)網(wǎng)狀白色條紋樣病損、黏膜萎縮、潰瘍、假膜。 B-2 右頰部黏膜出現(xiàn)網(wǎng)狀白色條紋樣病損、潰瘍、假膜。B-3 牙齦出現(xiàn)紅斑樣病損。B-4 舌背粘膜出現(xiàn)黏膜萎縮。

腔表征可單獨存在或合并存在。典型口腔表征如圖（1-3）：圖1-3A 某口腔cGVHD患者口腔表征情況Figure 1-3A Oral manifestation of an oral cGVHD patient腔 cGVHD 患者口腔內(nèi)黏膜組織出現(xiàn)網(wǎng)狀白色條紋樣病損，可波及唇、舌、頰、齦，同時部分部位（雙頰、后牙區(qū)前庭溝等）出現(xiàn)可合并出現(xiàn)黏膜潰瘍糜爛。

【參考文獻】

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本文編號：2766008