【摘要】：背景:口腔慢性移植物抗宿主病(Oral chronic graft versus host disease,cGVHD)是一種異基因造血干細(xì)胞移植(allogenetic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)后的常見(jiàn)并發(fā)癥,是影響患者移植后長(zhǎng)期生存質(zhì)量的因素之一。但目前口腔cGVHD病因尚不明確。非編碼微小RNA(micro RNA,mi RNA)可通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)靶基因的表達(dá),從而調(diào)控各種免疫細(xì)胞的產(chǎn)生、增殖、發(fā)育以及免疫應(yīng)答。目前mi RNA已被發(fā)現(xiàn)可作為多種疾病發(fā)生發(fā)展及預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志。目的:通過(guò)分析口腔cGVHD與無(wú)口腔cGVHD患者外周循環(huán)血mi RNA的表達(dá)差異,通過(guò)生物信息學(xué)分析與驗(yàn)證,初步分析mi RNA在口腔cGVHD發(fā)生發(fā)展中可能的調(diào)控作用。方法:1.回顧分析94例HLA全相合的異基因干細(xì)胞移植患者病史資料,探討口腔cGVHD的臨床特點(diǎn)及其發(fā)生與患者性別、預(yù)處理方案ATG使用情況等患者性別、女供男移植、移植物來(lái)源、回輸單個(gè)核細(xì)胞數(shù)等臨床指標(biāo)的相關(guān)性。2.口腔cGVHD、無(wú)口腔cGVHD、健康對(duì)照各8例取外周靜脈血,構(gòu)建mi RNAs文庫(kù),采用Illumina Hiseq 2500平臺(tái)進(jìn)行測(cè)序,分析mi RNAs差異表達(dá),通過(guò)Go term和KEGG等生物信息學(xué)技術(shù)分析探索與口腔cGVHD發(fā)生有關(guān)的信號(hào)通路。3.采用定量實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real time PCR,q RT-PCR)檢測(cè)15例口腔cGVHD、15例無(wú)口腔cGVHD、15例健康對(duì)照外周靜脈血mi RNA-505-5p、mi RNA-769-5p表達(dá)情況,通過(guò)Go term和KEGG等生物信息學(xué)分析其靶基因及作用信號(hào)通路。4.采用q RT-PCR檢測(cè)口腔cGVHD和無(wú)口腔cGVHD各15例外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中Smad2(Drosophila mothers against decapentaplegic protein 2)表達(dá)水平,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測(cè)各組血漿中Smad2蛋白含量。結(jié)果:1.在94例HLA全相合的異基因干細(xì)胞移植患者中,46.8%出現(xiàn)口腔cGVHD。移植后300天內(nèi)未發(fā)生口腔cGVHD的患者在其后發(fā)生口腔cGVHD的可能性較低�？谇籧GVHD表征多樣,除了特征性的網(wǎng)狀白色條紋樣病損,口干、潰瘍/糜爛是最常見(jiàn)的口腔表征,出現(xiàn)比例分別為63.63%與50%。這些病損可單獨(dú)伴隨網(wǎng)狀白色條紋樣病出現(xiàn)或多種同時(shí)出現(xiàn)�？谇籧GVHD組患者口腔表征評(píng)分為3.81±2.06,VAS評(píng)分為3.31±2.13,兩者呈正相關(guān)。未發(fā)現(xiàn)患者性別、預(yù)處理方案ATG使用情況、女供男移植、移植物來(lái)源、回輸單個(gè)核細(xì)胞數(shù)等臨床指標(biāo)與口腔cGVHD的發(fā)生存在相關(guān)性。2.口腔cGVHD與無(wú)口腔cGVHD組比較發(fā)現(xiàn),在兩組中均有表達(dá)mi RNA為549個(gè),具有顯著性差異為72個(gè),包括上調(diào)表達(dá)32個(gè),下調(diào)表達(dá)40個(gè);口腔cGVHD組與健康對(duì)照組比較發(fā)現(xiàn),在兩組中均有表達(dá)mi RNA為547個(gè),具有顯著性差異為327個(gè),包括上調(diào)表達(dá)164個(gè),下調(diào)表達(dá)163;無(wú)口腔cGVHD組與健康對(duì)照組比較發(fā)現(xiàn),在兩組中均有表達(dá)mi RNA為546個(gè),具有顯著性差異為245個(gè),包括上調(diào)表達(dá)160個(gè),下調(diào)表達(dá)85個(gè);三組比較發(fā)現(xiàn)三組中均有表達(dá)mi RNA為518個(gè),顯著差異191個(gè)。mi RNAs靶基因主要集中在生化過(guò)程中的轉(zhuǎn)錄環(huán)節(jié)、細(xì)胞組分中的膜蛋白及分子功能中的蛋白結(jié)合。差異基因主要集中在癌相關(guān)通路、調(diào)節(jié)磷脂酰肌醇3—激酶/蛋白激酶B(Phosphatidylinositol 3-Protein kinase B,PI3K-Akt)等信號(hào)通路。3.非口腔cGVHD患者外周血循環(huán)mi RNA-769-5p、mi RNA-505-5p表達(dá)最高,口腔cGVHD患者次之,健康對(duì)照最低。通過(guò)ROC分析mi RNA-769-5p、mi RNA-505-5p在口腔cGVHD診斷上具有一定價(jià)值,通過(guò)生物信息學(xué)方法分析得知口腔cGVHD發(fā)生可能與PI3K-Akt信號(hào)通路,TGF-β/Smad信號(hào)通路相關(guān)。4.口腔cGVHD組患者血漿中Smad2蛋白及PBMC中Smad2 m RNA表達(dá)較無(wú)口腔cGVHD組增高。外周血Smad2 m RNA表達(dá)與mi RNA-769-5p呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論:1、口腔cGVHD是allo-HSCT后的常見(jiàn)并發(fā)癥,常發(fā)生于移植后300天內(nèi)�？谇籧GVHD表征多樣,除了特征性的網(wǎng)狀白色條紋樣病損,口干、潰瘍/糜爛是最常見(jiàn)的口腔cGVHD表征。尚未發(fā)現(xiàn)患者性別、預(yù)處理方案ATG使用情況等患者性別、女供男移植、移植物來(lái)源、回輸單個(gè)核細(xì)胞數(shù)等臨床指標(biāo)與口腔cGVHD的發(fā)生存在相關(guān)性。2、口腔cGVHD、非口腔cGVHD、健康對(duì)照之間外周血循環(huán)mi RNA存在差異性表達(dá)。mi RNA可能通過(guò)影響PI3K-Akt、TGF-β/Smad等信號(hào)通路參與口腔cGVHD的發(fā)生,mi RNA-769-5p、mi RNA-505-5p在口腔cGVHD診斷上具有一定價(jià)值。3、外周循環(huán)血內(nèi)的高表達(dá)的Smad2可能與口腔cGVHD發(fā)生有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R457.7;R781.5
【圖文】：

圖 1-1 VAS 疼痛評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Fig 1-1 Scoring criteria of VASVAS：即視覺(jué)模擬評(píng)分法。在紙上畫(huà)一條長(zhǎng)約 10 cm 的橫線，橫線的一端為 0，表示無(wú)痛；另一端為 10，表示重度疼痛；中間部分表示不同程度的疼痛。唾液量記錄：囑患者靜坐，頭前傾略低，5 分鐘內(nèi)向 5ml 無(wú)菌離心管內(nèi)緩緩?fù)氯敕谴碳ば匀�，記錄患者唾液量�?.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用 SPSS16.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。采用卡方檢驗(yàn)分析供受者情況（患者性別、預(yù)處理方案 ATG 使用情況等患者性別、女供男移植、移植物來(lái)源、回輸單個(gè)核細(xì)胞數(shù)等）對(duì)口腔 cGVHD 的影響，患者年齡、回輸單個(gè)核細(xì)胞數(shù)與口腔表征及疼痛評(píng)分計(jì)分采用 Spearman 等級(jí)相關(guān)法，多因素分

口腔表征為口干、潰瘍糜爛，其它常見(jiàn)病損類型為紅斑樣病損及黏膜萎縮。各種口腔表征可單獨(dú)存在或合并存在。典型口腔表征如圖（1-3）：圖1-3A 某口腔cGVHD患者口腔表征情況Figure 1-3A Oral manifestation of an oral cGVHD patient口腔 cGVHD 患者口腔內(nèi)黏膜組織出現(xiàn)網(wǎng)狀白色條紋樣病損，可波及唇、舌、頰、上腭、牙齦，同時(shí)部分部位（雙頰、后牙區(qū)前庭溝等）出現(xiàn)可合并出現(xiàn)黏膜潰瘍糜爛。圖1-3B口腔cGVHD常見(jiàn)口腔表征Figure 1-3B Oral manifestations among oral cGVHD patientsB-1 舌背粘膜同時(shí)出現(xiàn)網(wǎng)狀白色條紋樣病損、黏膜萎縮、潰瘍、假膜。 B-2 右頰部黏膜出現(xiàn)網(wǎng)狀白色條紋樣病損、潰瘍、假膜。B-3 牙齦出現(xiàn)紅斑樣病損。B-4 舌背粘膜出現(xiàn)黏膜萎縮。

腔表征可單獨(dú)存在或合并存在。典型口腔表征如圖（1-3）：圖1-3A 某口腔cGVHD患者口腔表征情況Figure 1-3A Oral manifestation of an oral cGVHD patient腔 cGVHD 患者口腔內(nèi)黏膜組織出現(xiàn)網(wǎng)狀白色條紋樣病損，可波及唇、舌、頰、齦，同時(shí)部分部位（雙頰、后牙區(qū)前庭溝等）出現(xiàn)可合并出現(xiàn)黏膜潰瘍糜爛。

【參考文獻(xiàn)】

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8 楊浚l

本文編號(hào)：2766008