本文關(guān)鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源exosomes的安全性評(píng)價(jià)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景目的:臨床Ⅰ期和Ⅱ期實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)可以對(duì)急性心肌梗死(AMI)進(jìn)行損傷修復(fù),但是由于MSCs存在移植存活率低、加重狹窄及致瘤性安全隱患等不足使得其在臨床上的應(yīng)用受到限制。越來(lái)越多的證據(jù)表明,以MSCs旁分泌來(lái)源的exosomes(MSC-exosomes)為基礎(chǔ)的移植比MSCs本身更具有潛在的保護(hù)作用和修復(fù)效果。但是,MSC-exosomes的應(yīng)用是否安全可靠還尚不清楚。在本實(shí)驗(yàn)中,我們采用了多種動(dòng)物模型,比較全面地評(píng)估了人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的exosomes(hucMSC-exosomes)的安全性。方法:取來(lái)自健康家兔的心臟血液,去除纖維蛋白原后,取沉淀的紅細(xì)胞(RBC)用生理鹽水配制成2%的RBC懸液,與hucMSC-exosomes 37℃共溫浴,在3h內(nèi)觀察其溶血和RBC沉降情況;分別將hucMSC-exosomes沿耳緣靜脈和股四頭肌注入家兔體內(nèi),觀察血管充血是否正常,周?chē)M織有無(wú)腫脹,注射點(diǎn)肌纖維橫紋是否清晰,肌間有無(wú)出血,有無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等病理變化,并取注射點(diǎn)部位血管、肌肉及周?chē)M織做組織學(xué)切片,采用蘇木精-伊紅(HE)染色的方法,綜合評(píng)價(jià)hucMSC-exosomes是否具有刺激性;對(duì)豚鼠腹腔注射hucMSC-exosomes,每隔一天致敏1次,第3次致敏14天后進(jìn)行末次致敏,觀察并記錄豚鼠的過(guò)敏癥狀以及癥狀所出現(xiàn)的時(shí)間,綜合評(píng)價(jià)hucMSC-exosomes是否含有過(guò)敏原;將hucMSC-exosomes沿耳緣靜脈輸注入家兔體內(nèi),每隔一小時(shí)測(cè)定1次肛溫,總共3次,根據(jù)溫度的變化程度來(lái)分析其是否含有致熱源;取健康Sprague-Dawley(SD)大鼠,尾靜脈注射hucMSC-exosomes,定期采血并測(cè)定hucMSC-exosomes對(duì)血常規(guī)指標(biāo)的影響;為了評(píng)價(jià)hucMSC-exosomes在體內(nèi)的安全性,我們建立了SD大鼠的AMI模型,分別選取400μg和800μg劑量的hucMSC-exosomes沿尾靜脈注射入大鼠體內(nèi),每天1次,連續(xù)7天,之后密切觀察SD大鼠的生長(zhǎng)情況,并定期對(duì)其稱重采血,檢測(cè)hucMSC-exosomes對(duì)肝功能及腎功能是否有不良影響。結(jié)果:hucMSC-exosomes不會(huì)引起溶血反應(yīng),對(duì)注射點(diǎn)的血管、肌肉及周?chē)M織都沒(méi)有刺激性,不含有過(guò)敏原和致熱源,對(duì)血常規(guī)指標(biāo)沒(méi)有不良影響,對(duì)AMI模型的大鼠體重的降低有一定的緩解作用并且對(duì)肝功能、腎功能都沒(méi)有副作用,各項(xiàng)結(jié)果都顯示hucMSC-exosomes是安全可靠可以被應(yīng)用的。結(jié)論:hucMSC-exosomes在動(dòng)物模型中耐受并且通過(guò)靜脈輸注的方式安全可靠,這為今后huc MSC-exosomes的臨床應(yīng)用提供了依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：人臍帶 間充質(zhì)干細(xì)胞 exosomes 安全性 急性心肌梗死 靜脈輸注
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R457.7
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-14
• 第一章 緒論14-22
• 1.1 間充質(zhì)干細(xì)胞14-16
• 1.1.1 間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性與功能14-15
• 1.1.2 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性與功能15
• 1.1.3 間充質(zhì)干細(xì)胞的局限性15-16
• 1.2 Exosomes16-22
• 1.2.1 Exosomes生物學(xué)特性及功能16-18
• 1.2.2 Exosomes與急性心肌梗死18-19
• 1.2.3 Exosomes與腫瘤19-20
• 1.2.4 Exosomes與免疫調(diào)節(jié)20-22
• 第二章 研究目的、方法、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案和意義22-25
• 2.1 研究目的22
• 2.2 研究方法22-23
• 2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案23
• 2.4 研究意義23-25
• 第三章 hucMSC-exosomes的分離及鑒定25-31
• 3.1 材料與儀器25-26
• 3.1.1 主要材料25
• 3.1.2 主要儀器25-26
• 3.2 方法26-28
• 3.2.1 hucMSC的分離與培養(yǎng)26-27
• 3.2.2 hucMSC-CM的制備27
• 3.2.3 hucMSC-exosomes的分離提取27
• 3.2.4 納米顆粒分析儀檢測(cè)hucMSC-exosomes的大小及濃度27
• 3.2.5 Western blot檢測(cè)hucMSC-exosomes相關(guān)蛋白CD9和CD81的表達(dá)27-28
• 3.3 結(jié)果28-30
• 3.3.1 hucMSCs形態(tài)學(xué)特征28
• 3.3.2 納米顆粒分析儀檢測(cè)hucMSC-exosomes的大小及濃度28-29
• 3.3.3 Western blot檢測(cè)hucMSC-exosomes的表面標(biāo)志物29-30
• 3.4 討論30-31
• 第四章 hucMSC-exosomes對(duì)AMI模型的影響31-37
• 4.1 材料與儀器31
• 4.1.1 主要材料31
• 4.1.2 主要儀器31
• 4.2 方法31-33
• 4.2.1 SD大鼠AMI模型的構(gòu)建31-32
• 4.2.2 hucMSC-exosomes對(duì)AMI模型大鼠的影響32-33
• 4.2.3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析33
• 4.3 結(jié)果33-35
• 4.3.1 hucMSC-exosomes對(duì)SD大鼠體重的影響33-34
• 4.3.2 hucMSC-exosomes對(duì)SD大鼠肝功能的影響34
• 4.3.3 hucMSC-exosomes對(duì)SD大鼠腎功能的影響34-35
• 4.4 討論35-37
• 第五章 huc MSC-exosomes自身安全性鑒定37-46
• 5.1 材料與儀器37
• 5.1.1 主要材料37
• 5.1.2 主要儀器37
• 5.2 方法37-41
• 5.2.1 溶血試驗(yàn)37-38
• 5.2.2 血管刺激反應(yīng)38-39
• 5.2.3 肌肉刺激反應(yīng)39
• 5.2.4 全身性過(guò)敏反應(yīng)39-40
• 5.2.5 致熱源檢測(cè)40-41
• 5.2.6 血常規(guī)檢測(cè)41
• 5.2.7 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析41
• 5.3 結(jié)果41-44
• 5.3.1 hucMSC-exosomes不引起溶血反應(yīng)41-42
• 5.3.2 hucMSC-exosomes對(duì)血管無(wú)刺激性42
• 5.3.3 hucMSC-exosomes對(duì)肌肉無(wú)刺激性42-43
• 5.3.4 hucMSC-exosomes過(guò)敏原陰性43
• 5.3.5 hucMSC-exosomes致熱源陰性43
• 5.3.6 hucMSC-exosomes對(duì)血常規(guī)無(wú)不良影響43-44
• 5.4 討論44-46
• 結(jié)論與展望46-47
• 結(jié)論46
• 展望46-47
• 參考文獻(xiàn)47-59
• 致謝59-60
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文60

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  本文關(guān)鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源exosomes的安全性評(píng)價(jià)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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