發(fā)布時間：2017-03-28 03:01

  本文關鍵詞：組織切片HE染色失敗原因的查找和補救措施的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的：常規(guī)蘇木素(Hematoxylin)和伊紅(Eosin)染色技術簡稱HE染色技術。臨床患者或動物實驗的組織標本通過固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、攤片、貼片、烤片、染色和封片等一系列操作技術,制成一張組織切片,這是各種病理技術的基礎。HE制片質量在很大程度上影響病理醫(yī)師能否做出正確的病理診斷。優(yōu)質的HE玻片標本：在顯微鏡下觀察時應該達到核質清楚、紅藍分明、對比清晰。而制出大量優(yōu)質的切片并非易事,在常規(guī)病理制片的過程中,經(jīng)常會遇到各種原因引起的組織脫水、透明、浸蠟不足、組織切片染色灰白、組織結構不清等問題,導致染色失敗,特別是胃鏡活檢標本、穿刺等小活檢組織標本,由于組織小,一旦出現(xiàn)上述問題,大多都無法補材。為避免再次發(fā)生此類事件,需及時查明失敗原因,積極補救和調(diào)整。在本研究中,我們通過多次試驗,終于找出切片染色失敗的主要原因,即脫水機處理組織不當。在此基礎上,我們進行了染色失敗標本補救措施的研究：①對染色灰白的原切片退掉蓋玻片以后重新處理,②對組織處理不當?shù)南瀴K重新切片后處理切片后再復染。③是將處理不當?shù)南瀴K組織經(jīng)二甲苯多次脫蠟,入梯度乙醇直至水化,然后將發(fā)軟的組織進行重新脫水處理。研究結果表明：補救措施③基本達到病理診斷的閱片要求,但存在較大風險,稍有不慎就會導致組織變脆變硬,制片困難；而補救措施①和②則能夠顯著提高病理切片的質量,滿足了病理診斷的要求。研究方法：1.HE染色失敗原因的查找收集HE染色失敗的20例病理標本,其中包括胃鏡活檢標本5例、腸鏡活檢標本5例、子宮內(nèi)膜標本5例、肺穿刺標本5例。同時收集近日工作中染色正常的20例標本(胃鏡活檢標本蠟塊5例、腸鏡活檢標本蠟塊5例、子宮內(nèi)膜標本蠟塊5例、肺穿刺標本蠟塊5例),以及當天免疫組織化學染色的20例HE切片進行對比觀察。試驗設計分為7組：HE染色失敗的標本為染色失敗組；染色失敗的蠟塊組織利用4種方法進行處理,為處理組1：切片后經(jīng)調(diào)節(jié)后的染色機程序再染色(延長烤片時間)；處理組2：切片后經(jīng)調(diào)節(jié)后的染色機程序再染色(更換新蘇木素和伊紅)；處理組3：切片后經(jīng)調(diào)節(jié)后的染色機程序再染色(延長染色機中切片脫蠟和脫水時間)；處理組4：切片后經(jīng)正常的染色機程序染色,再調(diào)節(jié)封片用的中性樹膠濃度的玻片；同時,設立兩個對照組,正常HE染色對照組：正常程序處理的石蠟標本切片經(jīng)正常的染色機程序染色：免疫組化對照組：染色失敗的石蠟標本經(jīng)免疫組織化學染色程序后的HE切片。2.染色失敗標本補救措施的研究利用上述染色失敗的20個標本,將20例標本利用3種方法分別進行處理。補救組1：將染色失敗的HE切片放入二甲苯中浸泡30 min,去掉覆在切片組織上的蓋玻片,然后將切片移到100%、95%、85%、70%的乙醇中各3 min,切片水洗3 min。將水洗的切片放入盛300 m1蒸餾水的500 ml燒杯中進行水浴加熱,將燒杯放入盛水的不銹鋼鍋中,用電爐或電磁爐加熱,水沸騰后繼續(xù)煮30 min,將燒杯冷卻至室溫后取出切片,將切片重新染色。補救組2：將蠟塊重新切片,將組織片貼片于防脫載玻片上,65℃烤片30 min,常規(guī)脫蠟至水化,將切片放入盛自來水的不銹鋼鍋中水浴加熱煮30 min,再進行常規(guī)HE染色。補救組3：將蠟塊組織經(jīng)二甲苯多次脫蠟,入梯度乙醇直至水化,然后將發(fā)軟的組織進行重新處理,即對蠟塊組織逆程序處理到原組織水化狀態(tài),更新試劑后再次處理。同時,以染色失敗的原始標本切片作為對照組。研究結果：1.HE染色失敗原因的排查與染色失敗組相比,處理組1、2和4的組織染色灰白,組織結構不清,無法滿足診斷要求。與原始HE切片相比,其病理評分均無明顯差異(p0.05)。處理組3的病理評分盡管與原始切片相比,在統(tǒng)計學上有顯著性差異(p0.05),但仍然不能滿足臨床病理診斷的要求。而正常HE染色對照組染色后鏡下見核質清楚、紅藍分明、對比清晰,由此排除了烤片、染色機染色和封片等步驟的原因。此外,在免疫組化對照組中,染色失敗玻片經(jīng)免疫組織化學染色程序后HE切片染色效果基本等同于正常HE切片染色對照組。通過逐步排除,最終發(fā)現(xiàn)HE染色失敗的原因是自動脫水過程中病理組織脫水處理不當引起的。2.補救措施效果的評價根據(jù)病理切片染色后的評分情況,本研究發(fā)現(xiàn)3種補救方法處理的切片染色效果均較好,鏡下見切片組織結構清晰,色彩鮮艷,紅藍對比適當,透明度好,完全達到了診斷標準。同時,與原始HE切片相比,其病理評分在統(tǒng)計學上均有明顯差異(p0.05)。但由于補救措施③僅適用于組織塊較大的標本,且存在一定風險,有可能造成組織塊的損毀。而補救措施①和②在取得滿意染色效果的同時,對組織標本不造成任何影響,因此我們推薦使用補救措施①和②來處理工作中出現(xiàn)的類似問題。主要結論：影響石蠟切片HE染色的因素貫穿于整個組織處理及染色過程中,從組織離體后的固定、脫水處理及染色過程的每個步驟均會對HE染色產(chǎn)生影響。標本固定及染色過程導致的染色失敗問題的解決,可通過逐一排查導致染色不良的因素,采取相應的解決辦法及補救措施。在本研究中,我們通過逐步篩查,發(fā)現(xiàn)了導致本次染色失敗的根本原因是組織脫水機處理不當引起的。同時,我們利用3種不同措施對原切片和處理不當蠟塊切片進行重新處理,發(fā)現(xiàn)了兩種解決HE染色失敗的補救措施,為今后臨床病理工作者解決此類問題提供了科學依據(jù)。
【關鍵詞】：病理技術 石蠟切片 HE染色 組織處理不當 水浴修復
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R361.2
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-15
• 技術方案15-16
• 材料與方法16-26
• 結果26-31
• 討論31-34
• 小結34-35
• 附圖35-45
• 參考文獻45-48
• 致謝48-49
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文目錄49-50
• 附件50

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本文編號：271531