本文關(guān)鍵詞：基于熒光免疫層析技術(shù)的肺炎支原體快速檢測方法的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:肺炎支原體(Mycoplasma pneumoniae,MP)是一種常見引起原發(fā)性非典型肺炎的呼吸道病原體,20%左右的社區(qū)獲得性肺炎即由MP感染的,對人類,尤其是兒童和老人來說,其越來越高的發(fā)病率已經(jīng)引起了人們的擔心。感染的早期診斷對于病人的及時治療和診斷結(jié)果非常重要。但是,仍然缺少快速、簡便的MP血清學檢測方法。常見的酶聯(lián)免疫吸附試驗方法費時費力,操作繁瑣;膠體金法靈敏度和特異性不高,存在不能定量的缺陷。本研究采用熒光素Alexa Fluor?647作為標記分子,建立了在血清中檢測MP的免疫層析技術(shù)方法,使MP的臨床檢測更加準確、快速、靈敏。方法:建立肺炎支原體特異性Ig M抗體的免疫層析檢測方法,并對其性能進行評價。將小鼠抗人Ig Mμ鏈特異性抗體以及羊抗兔Ig G標記上熒光素Alexa Fluor?647,MP天然抗原和重組抗原P1混合包被于硝酸纖維素膜的檢測線T(test line)位置,兔Ig G包被于硝酸纖維素膜的質(zhì)控線C(control line)。MP天然抗原和重組抗原P1在T線結(jié)合Ig M-anti-Ig M-AF647復合物,兔Ig G在C線結(jié)合anti-Ig G-AF647。通過熒光儀檢測儀檢測C、T位置的熒光值并計算其峰面積。采用本方法制備試紙條,對34份MP陽性血清和166份MP陰性血清進行檢測,通過統(tǒng)計學軟件SPSS 16.0中受試者工作曲線分析得到本方法的臨界值,臨界值以上判定為陽性,臨界值以下判定為陰性。在此基礎(chǔ)上考察了本方法的靈敏度,特異性,精確度以及穩(wěn)定性。通過386份血清樣本的檢測,比對本方法與市售歐盟試劑盒的符合率和kappa系數(shù)等。結(jié)果:本研究建立基于熒光素免疫層析技術(shù)的肺炎支原體特異性Ig M抗體的檢測方法。本方法的最佳檢測時間確定為10min,選擇賽多利斯的CN140作為本方法的硝酸纖維素膜,確定了海藻糖和聚乙烯吡咯烷酮在保證試紙條穩(wěn)定性方面的主要作用。通過檢測34份陽性血清和166份陰性血清,ROC曲線分析結(jié)果得出Cutoff值為0.3830。ROC曲線下面積AUC為0.986(p0.001)。本方法與其他幾種引起呼吸道感染的常見細菌和病毒病原體沒有交叉反應(yīng)。本方法的批間批內(nèi)差異分別在3.28%到10.14%之間。本方法制備的試劑條保存時間能夠達到2年以上。本方法與歐盟試劑盒檢測方法比對結(jié)果顯示,總體符合率達到了96.37%(Kappa=0.842,p0.001)。綜上所述,本研究提供了一種快速便捷的早期診斷肺炎支原體特異性Ig M抗體的檢測方法。
【關(guān)鍵詞】：Alexa Fluor 647 人IgM 免疫層析技術(shù) 肺炎支原體
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R375.2;R446.6
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 英漢縮略詞表9-10
• 1 引言10-14
• 1.1 免疫分析技術(shù)概況10-13
• 1.1.1 免疫標記技術(shù)的發(fā)展概況10-12
• 1.1.2 免疫層析技術(shù)概述12
• 1.1.3 熒光免疫層析技術(shù)的發(fā)展以及趨勢12-13
• 1.2 肺炎支原體的介紹13-14
• 1.3 本文的主要研究內(nèi)容14
• 2 材料與方法14-22
• 2.1 原理14-15
• 2.2 試劑與儀器15-17
• 2.2.1 試劑和耗材15-16
• 2.2.2 儀器16
• 2.2.3 主要溶液配制16-17
• 2.3 熒光免疫層析試劑的制備和優(yōu)化17-22
• 2.3.1 熒光免疫層析試劑的制備17-20
• 2.3.2 熒光免疫層析方法的優(yōu)化20-21
• 2.3.3 ROC曲線確定Cutoff值21
• 2.3.4 性能評價21-22
• 3 結(jié)果22-34
• 3.1 熒光免疫層析方法的優(yōu)化22-29
• 3.1.1 最佳抗原包被比例的確定22-23
• 3.1.2 最佳NC膜的選擇23-24
• 3.1.3 最佳檢測時間的確定24-25
• 3.1.4 最佳表面活性劑的選擇25
• 3.1.5 熒光抗體復合物保存液的選擇25-28
• 3.1.6 ROC曲線確定Cutoff值28-29
• 3.2 性能評價29-34
• 3.2.1 特異性考察29
• 3.2.2 靈敏度考察29-31
• 3.2.3 精密度考察31-32
• 3.2.4 穩(wěn)定性考察32-33
• 3.2.5 與歐盟試劑盒的比對33-34
• 4 討論34-35
• 5 結(jié)論35-36
• 參考文獻36-39
• 附錄39-41
• 本人簡歷39-40
• 在學期間的研究成果目錄40-41
• 致謝41-42
• 文獻綜述42-47
• 參考文獻46-47

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1 劉R，

本文編號：259620