【摘要】：采用納米金(15 nm)標(biāo)記神經(jīng)元特異性烯醇化酶抗體(anti-NSE)獲得金標(biāo)記anti-NSE。在適宜的條件下,金標(biāo)記anti-NSE可與神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)發(fā)生免疫反應(yīng)生成NSE的免疫金復(fù)合物,使納米金發(fā)生凝集,該液相體系在620 nm處共振光散射信號顯著增強。實驗表明,NSE質(zhì)量濃度在0.05~20 ng/m L范圍內(nèi)與共振光散射增強值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,檢出限為0.01 ng/m L,方法已用于人血清中NSE的定量分析。
【圖文】：

的光散射信號改變可建立一種均相免疫檢測NSE的新方法。2.1吸收光譜分別考察了體系的吸收光譜和共振光散射光譜特性。在金標(biāo)記anti-NSE溶液中加入不同質(zhì)量濃度的NSE獲得了NSE的免疫金復(fù)合物。當(dāng)NSE質(zhì)量濃度分別為0，5，10，20ng/mL時，其體系的最大吸收峰分別為521，524，530，537nm，NSE免疫金體系的最大吸收波長隨NSE質(zhì)量濃度的增加出現(xiàn)了紅移(圖1)。據(jù)研究表明，納米金的吸收峰隨其納米顆粒粒徑的增大紅移［14］，由此可知，在NSE與金標(biāo)記anti-NSE發(fā)生免疫反應(yīng)后，納米金發(fā)生了凝集形成了粒徑更大的微粒。圖1NSE免疫金復(fù)合物的吸收光譜圖Fig.1AbsorptionspectraofimmunogoldcompoundsforNSE2.2共振光散射光譜膠體金、金標(biāo)記anti-NSE溶液在620nm處具有共振光散射峰，但散射光信號值很校當(dāng)anti-NSE和NSE發(fā)生免疫反應(yīng)后，當(dāng)未加入PEG時，NSE的免疫金復(fù)合物散射光信號僅發(fā)生微弱的增強。當(dāng)加入高濃度PEG溶液后，NSE的免疫金復(fù)合物體系在470nm，620nm處出現(xiàn)了明顯的共振光散射峰，620nm處的散射強度值顯著增強·1199·

逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄分析試驗室第36卷(圖2)。據(jù)文獻報道，納米金具有表面等離子共振耦合效應(yīng)，聚集態(tài)的納米金顆粒相比分散態(tài)的納米金會產(chǎn)生較強的散射光信號［15］。由此可知，在高濃度的PEG作用下，NSE免疫金復(fù)合物進一步凝集形成了粒徑更大的微粒。若將聚集納米金顆粒的散射光信號用于NSE檢測，可顯著提高方法的靈敏度，，該體系選擇了在620nm處測定共振光散射強度。圖2NSE免疫金復(fù)合物的共振光散射光譜圖Fig.2ＲesonancelightscatteringspectraofimmunogoldcompoundsforNSE2.3實驗條件優(yōu)化2.3.1金標(biāo)記anti-NSE制備條件優(yōu)化如實驗步驟所述，加入0.1mol/LHCl或0.1mol/LK2CO3溶液調(diào)節(jié)膠體金的pH為6.0～10.0。當(dāng)膠體金的pH在6.0～7.5時，膠體金呈現(xiàn)紫色，納米金發(fā)生了較為明顯的聚集且I620nm較大。當(dāng)膠體金的pH在8.0～10.0時，金標(biāo)記anti-NSE能夠在10%KCl溶液的作用下維持酒紅色，且I620nm趨于穩(wěn)定。實驗選擇pH9.0。移取0.50mL膠體金并采用0.1mol/LK2CO3溶液調(diào)節(jié)至pH9.0，再分別加入0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，9.0μgNSE抗體制備金標(biāo)記anti-NSE。當(dāng)anti-NSE用量為4.0～9.0μg時，金標(biāo)記anti-NSE在10%KCl溶液的作用下仍為酒紅色，未發(fā)生明顯的聚集而呈現(xiàn)紫色，且I620nm趨于穩(wěn)定。故選擇在0.50mL膠體金中加入5.0μganti-NSE制備金標(biāo)記anti-NSE光譜探針，即1.00mL膠體金的NSE抗體用量為10.0μg。2.3.2NSE免疫金復(fù)合物生成條件的優(yōu)化考察了檸檬酸-Na2HPO4和KH2PO4-Na2HPO4緩沖溶液對NSE免疫金體系的影響，NSE免疫金反應(yīng)體系在以上兩種緩沖溶液中均反應(yīng)較好，但與KH2PO
【作者單位】： 菏澤醫(yī)學(xué)專科學(xué)校中心實驗室;山東菏澤市立醫(yī)院檢驗科;
【基金】：山東省高等學(xué)�？萍加媱濏椖�(J11LB01)資助
【分類號】：O657.3;R446.6

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本文編號：2538460