發(fā)布時(shí)間：2017-03-16 06:00

  本文關(guān)鍵詞：缺氧條件下核呼吸因子-1對(duì)大鼠心肌細(xì)胞線粒體功能的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:為了研究NRF-1基因?qū)Υ笫笮募〖?xì)胞(H9c2)線粒體功能代謝的影響,我們建立1%O2+5%CO2的物理缺氧模型,觀察NRF-1基因能否改善大鼠心肌細(xì)胞在缺氧條件下的生長狀態(tài)及能量代謝水平,旨在為心力衰竭的基因治療提供一種新的途徑。方法:1.利用第三代慢病毒質(zhì)粒系統(tǒng)構(gòu)建NRF-1過表達(dá)細(xì)胞株(pCDH-NRF)、干擾細(xì)胞株(sh-NRF)和空病毒細(xì)胞株(pCDH-vector)。Western blot法及熒光定量PCR法鑒定NRF-1的表達(dá)水平。2.分別在5%CO2+95%空氣及1%O2+5%CO2條件下培養(yǎng)三組細(xì)胞24h及48h,使用CCK-8法測定三組細(xì)胞在缺氧狀態(tài)下細(xì)胞活力的變化。3.分別在5%CO2+95%空氣及1%O2+5%CO2條件下培養(yǎng)三組細(xì)胞48h,使用流式細(xì)胞術(shù)測定線粒體膜電位的變化。4.使用細(xì)胞線粒體能量代謝儀檢測各組細(xì)胞在正常和缺氧條件下線粒體的耗氧水平。結(jié)果:1.成功構(gòu)建出NRF-1基因過表達(dá)慢病毒載體,并且熒光定量PCR結(jié)果顯示,過表達(dá)細(xì)胞株中NRF-1基因表達(dá)水平(4.08±0.3)高于空病毒組細(xì)胞株(1.00±0.15),而干擾組細(xì)胞株中NRF-1基因表達(dá)水平(0.35±0.14)低于空病毒組細(xì)胞株(1.00±0.15);Western Blot結(jié)果顯示,過表達(dá)細(xì)胞株中NRF-1蛋白表達(dá)水平(5.07±0.63)高于空病毒組細(xì)胞株(3.15±0.59)與干擾組細(xì)胞株(1.66±0.22)。2.在正常條件下培養(yǎng)細(xì)胞24h后,NRF-1過表達(dá)細(xì)胞株、干擾組細(xì)胞株及空病毒組細(xì)胞株OD值分別為1.4365±0.0223、1.5125±0.0543、1.4087±0.0263;而在1%O2+5%CO2條件下培養(yǎng)細(xì)胞24h后,三組細(xì)胞株細(xì)胞OD值分別為1.4605±0.0413、1.4833±0.1092、1.4365±0.0926,差異變化不明顯。3.在正常條件下培養(yǎng)細(xì)胞48h后,NRF-1過表達(dá)細(xì)胞株、干擾組細(xì)胞株及空病毒組細(xì)胞株OD值分別為1.8649±0.0132、1.8176±.03964、1.7872±0.0062;而在1%O2+5CO2條件下培養(yǎng)細(xì)胞48h后,三組細(xì)胞株細(xì)胞OD值分別為1.5706±0.0251、1.0781±0.0717、1.4038±0.0375,差異變化顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。4.正常條件下NRF-1過表達(dá)組細(xì)胞,NRF-1干擾組細(xì)胞和空病毒組細(xì)胞的線粒體膜電位去極化水平分別為3.1%、5.1%、1.2%,而在1%O2+5%CO2缺氧培養(yǎng)細(xì)胞后,NRF-1過表達(dá)組細(xì)胞,NRF-1干擾組細(xì)胞和空病毒組細(xì)胞線粒體膜電位去極化水平分別為52.7%、28.1%、48.1%,提示NRF-1基因過表達(dá)可以降低缺氧對(duì)線粒體膜電位的損傷。5.細(xì)胞在氯化鈷及缺氧處理后,與空病毒組細(xì)胞株相比,NRF-1過表達(dá)組細(xì)胞株的基礎(chǔ)氧耗水平較高,NRF-1干擾組細(xì)胞株的基礎(chǔ)氧耗水平較低。結(jié)論:NRF-1基因的過表達(dá)可以降低細(xì)胞在缺氧條件下的進(jìn)一步損傷,其可能機(jī)制為過表達(dá)NRF-1基因可以通過減少細(xì)胞在缺氧條件下線粒體膜電位的降低,增強(qiáng)細(xì)胞氧耗,從而達(dá)到保護(hù)細(xì)胞免受缺氧的影響。初步證實(shí)NRF-1基因可以作為治療心力衰竭的候選分子。
【關(guān)鍵詞】：核呼吸因子-1 缺氧 大鼠心肌細(xì)胞H9c2 氧耗
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R541.6;R450
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 中英文縮略詞9-12
• 前言12-15
• 實(shí)驗(yàn)材料及方法15-30
• 結(jié)果30-42
• 討論42-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-54
• 綜述54-63
• 參考文獻(xiàn)59-63
• 致謝63-64
• 讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文64-65
• 個(gè)人簡歷65

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2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;

本文編號(hào)：251362