本文關(guān)鍵詞：胍丁胺對膿毒癥小鼠血管內(nèi)皮的保護(hù)作用及機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的建立盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(cecal ligation and puncture,CLP)模型,探究胍丁胺對膿毒癥小鼠血管內(nèi)皮相關(guān)因子及肝、肺組織血管通透性影響,在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步探究胍丁胺對脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激的人臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)分泌功能及通透性的影響,初步探索胍丁胺對內(nèi)皮細(xì)胞相關(guān)信號通路的影響,揭示胍丁胺對膿毒癥血管內(nèi)皮的保護(hù)作用和相關(guān)機(jī)制,為臨床治療膿毒癥提供新的治療方案。方法1.動物實驗動物實驗采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)構(gòu)建膿毒癥小鼠模型。將72只8周成年雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(24只),采用盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(CLP)構(gòu)建膿毒癥小鼠模型;假手術(shù)組只開腹不進(jìn)行盲腸結(jié)扎穿孔術(shù),術(shù)后腹腔注射磷酸鹽緩沖液。CLP模型組(24只)、胍丁胺(Agmatine,AGM)治療組(24只),胍丁胺組術(shù)后腹腔注射400mg/kg胍丁胺;其余兩組術(shù)后腹腔注射等量磷酸鹽緩沖液,于建模后24h處死小鼠并收集血樣,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent Assay,ELISA)檢測血清中細(xì)胞間粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1),血管間粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1),血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),血友病凝血因子(von Willebrand factor,vWF),血管緊張素-2(angiopoietin-2,Ang-2),單核細(xì)胞趨化因子(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1),腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-a,TNF-α),白細(xì)胞介素-6(interleukin 6,IL-6),白細(xì)胞介素-10(interleukin-10,IL-10)的含量。通過異硫氰酸熒光素-葡聚糖(fluorescein isothiocyanate-dextran,FITC-dextran)熒光示蹤的方法檢測肝、肺組織血管通透性,蘇木素-伊紅染色(hematoxylin and eosin,HE)觀察肝組織病理學(xué)改變。2.細(xì)胞實驗培養(yǎng)人臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,實驗分為三個組分別為對照組、lps組、agm干預(yù)組。通過四甲基偶氮唑溴鹽(methylthiazolytetrazolium,mtt)法檢測不同濃度lps和agm刺激huvecs后的半數(shù)抑制濃度;采用elisa試劑盒檢測agm對內(nèi)皮細(xì)胞分泌相關(guān)因子的表達(dá)作用;在24孔transwell小室(直徑6.5mm,孔徑0.4μm)內(nèi)接種1×105個細(xì)胞/孔,當(dāng)細(xì)胞成單層細(xì)胞層后加脂多糖刺激huvecs,藥物作用24h后,加入fitc-葡聚糖,1h后采用熒光酶標(biāo)儀檢測transwell小室上層及下層熒光強(qiáng)度;lps組和agm治療組分別作用huvecs24h后,提取總蛋白,通過蛋白印跡(westernbolt,wb)實驗檢測icam-1,內(nèi)皮素-1(endothelin-1,et-1)的表達(dá);胍丁胺預(yù)處理人臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞1h,再用lps刺激內(nèi)皮細(xì)胞15、30、45、60min,提取胞漿、胞核蛋白通過westernbolt檢測胍丁胺對內(nèi)皮細(xì)胞核因子-kappab(nuclearfactor-kappab,nf-κb)相關(guān)信號通路的影響。結(jié)果1.胍丁胺對血清或血漿血管內(nèi)皮相關(guān)因子的作用與假手術(shù)組相比,模型組血清和血漿中血管內(nèi)皮相關(guān)生物標(biāo)志物的含量顯著升高icam-1、vcam-1、vegf、vwf、ang-2、mcp-1(p0.01),胍丁胺治療能明顯抑制其含量(p0.01)。同時,與假手術(shù)相比,模型組血清炎癥因子水平顯著升高il-6、il-10、tnf-α(p0.01),而胍丁胺治療后炎癥因子的表達(dá)均明顯降低(p0.01)。2.胍丁胺對膿毒癥小鼠肝、肺組織血管通透性及肝組織病理變化的影響模型組中肝、肺組織熒光強(qiáng)度較假手術(shù)組明顯增強(qiáng),而胍丁胺能顯著降低肝、肺組織熒光強(qiáng)度(p0.01)。clp建模后24h肝組織有明顯病理學(xué)改變,細(xì)胞充血和炎性細(xì)胞浸潤,而胍丁胺治療后明顯緩解肝組織的損傷。3.胍丁胺對脂多糖誘導(dǎo)的人臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的作用lps刺激huvecs后內(nèi)皮細(xì)胞分泌的icam-1、il-6的含量明顯增加,胍丁胺作用后內(nèi)皮細(xì)胞分泌的icam-1、il-6顯著降低;同時lps作用后transwell小室下室熒光強(qiáng)度明顯高于對照組,agm作用后下室熒光強(qiáng)度顯著降低(p㩳0.05)4.胍丁胺對LPS刺激后HUVECs蛋白及信號分子的影響LPS組內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1、ET-1蛋白的表達(dá)明顯高于對照組,胍丁胺組ICAM-1和ET-1蛋白的表達(dá)顯著低于LPS組。LPS15、30min組內(nèi)皮細(xì)胞核蛋白p65、p50的含量明顯高于對照組,胍丁胺15、30min組核蛋白p65、p50含量顯著低于LPS組。結(jié)論胍丁胺可通過抑制內(nèi)皮黏附分子、血管內(nèi)皮生長因子及血友病凝血因子等內(nèi)皮相關(guān)生物標(biāo)記物和炎癥因子的分泌,降低肝、肺組織血管通透性,從而緩解膿毒癥小鼠的血管內(nèi)皮損傷。胍丁胺可改善人臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分泌功能及通透性,其作用可能是通過介導(dǎo)NF-κB相關(guān)信號通路發(fā)揮作用。
【關(guān)鍵詞】：胍丁胺 膿毒癥 盲腸結(jié)扎穿刺 內(nèi)毒素 人臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：成都醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R459.7
【目錄】：

• 摘要5-8
• Abstract8-11
• 前言11-14
• 第一部分 胍丁胺對膿毒癥小鼠血管內(nèi)皮功能的作用14-27
• 1 引言14
• 2 實驗材料與方法14-19
• 2.1 實驗材料14-15
• 2.2 方法15-19
• 2.3 統(tǒng)計學(xué)分析19
• 3 結(jié)果19-23
• 3.1 胍丁胺對膿毒癥小鼠血清炎癥因子IL-6、IL-10、TNF-α水平的影響19-20
• 3.2 胍丁胺對膿毒癥小鼠血清黏附分子ICAM-1、VCAM-1 及MCP-1 水平的影響20
• 3.3 胍丁胺對膿毒癥小鼠血漿血管內(nèi)皮相關(guān)因子的影響20-21
• 3.4 胍丁胺對膿毒癥小鼠肝血管通透性的影響21
• 3.5 胍丁胺膿毒癥肺血管通透性的影響21-22
• 3.6 胍丁胺對膿毒癥小鼠肝組織病理學(xué)變化的影響22-23
• 4 討論23-27
• 第二部分 胍丁胺對LPS誘導(dǎo)的人臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞作用及機(jī)制研究27-41
• 1 引言27
• 2 實驗材料與方法27-33
• 2.1 實驗材料27-29
• 2.2 方法29-33
• 2.3 統(tǒng)計學(xué)分析33
• 3 結(jié)果33-37
• 3.1 LPS、AGM對HUVECs半數(shù)抑制濃度33-34
• 3.2 胍丁胺對LPS刺激的HUVECs表達(dá)的炎癥因子與黏附分子水平的影響34-36
• 3.3 胍丁胺對LPS刺激的HUVECs通透性的作用36
• 3.4 胍丁胺對LPS誘導(dǎo)的HUVECs ICAM-1,ET-1 及，NF-κB蛋白表達(dá)的影響36-37
• 4 討論37-41
• 全文總結(jié)41-42
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 綜述 膿毒癥血管內(nèi)皮損傷及調(diào)節(jié)策略的研究進(jìn)展45-57
• 參考文獻(xiàn)52-57
• 縮略語索引57-59
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果59-60
• 致謝60-61

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王靜;戴琳;于魯欣;孫藝鑄;;過氧化物酶體增殖物激活受體-γ激動劑對膿毒癥大鼠內(nèi)皮損傷的作用[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2015年15期

2 劉政;侯鳳艷;靳賀;肖雅;范霞;楊雪;嚴(yán)軍;梁華平;;胍丁胺對創(chuàng)傷小鼠過度炎癥反應(yīng)及脾細(xì)胞增殖的影響[J];中國危重病急救醫(yī)學(xué);2015年02期

3 李炫飛;范霞;鄭志華;楊雪;劉政;龔建平;梁華平;;胍丁胺對脂多糖誘導(dǎo)急性肝損傷的保護(hù)作用[J];中華危重病急救醫(yī)學(xué);2013年12期

4 俞兆希;石松菁;沈陽輝;;烏司他丁對膿毒癥大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞功能保護(hù)作用研究[J];中華實用診斷與治療雜志;2013年10期

5 唐麗群;彭娜;潘志國;童華生;蘇磊;;血必凈注射液對嚴(yán)重膿毒癥患者凝血指標(biāo)及預(yù)后的影響[J];中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志;2012年03期

6 陳淼;費愛華;路薇薇;湯璐佳;王飛龍;徐雯;于洋;方邦江;;血必凈治療膿毒癥的療效及對血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1和凝血功能影響的研究[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2012年11期

7 梁華平;姚詠明;王正國;;創(chuàng)傷后膿毒癥的治療現(xiàn)狀不容樂觀——預(yù)警研究值得重視[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2011年21期

8 顧穎;范霞;張醇;楊雪;鮑依稀;梁華平;;胍丁胺對酵母多糖誘導(dǎo)急性肺損傷的器官保護(hù)作用[J];中國危重病急救醫(yī)學(xué);2011年11期

9 章志丹;馬曉春;;膿毒癥血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷與微循環(huán)功能障礙[J];中國危重病急救醫(yī)學(xué);2011年02期

10 梁英健;馬曉春;李鑫;;p38絲裂素活化蛋白激酶/核轉(zhuǎn)錄因子-κB轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在膿毒癥所致內(nèi)皮細(xì)胞凝血功能障礙中的作用[J];中國危重病急救醫(yī)學(xué);2010年09期

  本文關(guān)鍵詞：胍丁胺對膿毒癥小鼠血管內(nèi)皮的保護(hù)作用及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：251166