【摘要】：慢性疼痛是危害人類(lèi)健康的嚴(yán)重問(wèn)題。數(shù)據(jù)顯示,全球成人慢性疼痛的平均發(fā)病率約為30%,由于其病因復(fù)雜,發(fā)病機(jī)制尚不明確,治療非常困難。長(zhǎng)期遭受慢性疼痛的患者,極易伴隨著焦慮、失眠、憂(yōu)郁、抑郁等癥狀,不僅耗費(fèi)大量醫(yī)療資源,患者自身的生活質(zhì)量也嚴(yán)重下降。因此,如何有效的治療慢性疼痛已經(jīng)成為臨床急待解決的挑戰(zhàn)性問(wèn)題。慢性疼痛的類(lèi)型主要有以下幾種,包括組織損傷(例如關(guān)節(jié)炎)后的炎性疼痛,癌癥疼痛和神經(jīng)損傷、脊髓損傷和腦損傷后的神經(jīng)性疼痛(例如中風(fēng)和創(chuàng)傷)。慢性疼痛的特征通常在于痛覺(jué)過(guò)敏,其是對(duì)有害的熱和機(jī)械刺激以及異常性疼痛的增加的反應(yīng),其中傷害性反應(yīng)發(fā)生于正常無(wú)害的刺激,例如輕微接觸(稱(chēng)為機(jī)械性異常性疼痛)。神經(jīng)性疼痛的特征還在于灼燒疼痛,感覺(jué)異常(刺痛感,瘙癢)和感覺(jué)遲鈍(不愉快的,異常的觸覺(jué))。緩解慢性疼痛的常規(guī)藥物治療如非留體類(lèi)抗炎藥、阿片類(lèi)藥物等并不能很好的控制疾病,而目前有一種新型的治療手段在臨床上使用很廣泛,且很多臨床報(bào)道證實(shí)其效果顯著,即臭氧治療。臭氧在疼痛方面的應(yīng)用已經(jīng)有一百多年的歷史,1988年,意大利醫(yī)生Verga將臭氧注入腰大肌及椎旁間隙治療腰腿痛。1998年,Muto等報(bào)道將臭氧注入椎間盤(pán)及椎旁間隙治療腰椎間盤(pán)突出癥,有效率為78%。1994～2000年,Albertini報(bào)告6665例多中心治療腰椎間盤(pán)突出癥的研究結(jié)果,有效率為80.9%。亞洲和東歐某些地區(qū),如羅馬、意大利、俄羅斯等都廣泛的將臭氧應(yīng)用于臨床。在中國(guó),醫(yī)用臭氧作為一個(gè)非常重要的治療神經(jīng)病理性疼痛的替代療法,被廣泛用于椎間盤(pán)突出癥、關(guān)節(jié)疾病、肩周炎、偏頭痛、周?chē)苋毖约膊〖皫畎捳詈筮z疼痛等。雖然如今臭氧在疼痛類(lèi)疾病的應(yīng)用中十分廣泛,但很少有學(xué)者研究臭氧治療疼痛的機(jī)理,而臭氧對(duì)疼痛有確切療效的實(shí)驗(yàn)學(xué)證據(jù)更是空白。這對(duì)臭氧的規(guī)范使用缺少了很多的指導(dǎo)證據(jù)。本實(shí)驗(yàn)室的前期研究結(jié)果與神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域的前沿研究均提示:磷酸腺苷激活的蛋白激酶(adenosine mono-phosphate-activated protein kinase,AMPK),在痛覺(jué)調(diào)制中發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。AMPK是一個(gè)位于真核細(xì)胞中的絲氨酸-蘇氨酸激酶,是細(xì)胞中感受能量應(yīng)激并調(diào)節(jié)物質(zhì)代謝的關(guān)鍵分子。AMPK由催化性的α亞基和調(diào)控性的β,γ亞基組成,在不同的組織和細(xì)胞中組成多種異三聚體發(fā)揮蛋白質(zhì)激酶活性。是真核細(xì)胞中極為關(guān)鍵的能量平衡感受器和調(diào)控者。AMPK最經(jīng)典的激活通路是能量應(yīng)激使ATP迅速消耗導(dǎo)致的AMP/ATP比值增加。AMPK經(jīng)典的激動(dòng)劑包括白藜蘆醇、二甲雙胍等。白藜蘆醇(芪三酚)作為一種天然多酚類(lèi)物質(zhì),是天然的抗氧化劑。白藜蘆醇不僅可抑制血小板凝結(jié)、降低血液的粘稠度、舒張血管,從而保持血液暢通,還可以預(yù)防癌癥的產(chǎn)生及發(fā)展。再者它還具有抗動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病及治療缺血性心臟病和高血脂的作用。最近的研究表明,AMPK不僅是一個(gè)能量響應(yīng)性酶,它也檢測(cè)氧化還原信號(hào)。臭氧具有強(qiáng)氧化性,所以臭氧起效的分子機(jī)制可能與AMPK密切相關(guān)。但是,臭氧是否是通過(guò)激活A(yù)MPK從而通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)神經(jīng)炎癥來(lái)治療疼痛,尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。因此,我們利用臭氧、白藜蘆醇通過(guò)不同的慢性疼痛模型,對(duì)AMPK在慢性疼痛中的作用機(jī)制進(jìn)行研究。第一部分臭氧激活A(yù)MPK治療神經(jīng)病理性疼痛的機(jī)制研究目的:研究臭氧對(duì)AMPK的作用,以及抑制神經(jīng)病理性疼痛的分子機(jī)制方法:利用免疫印跡法檢測(cè)臭氧對(duì)AMPK的影響;測(cè)定經(jīng)典的疼痛行為學(xué)指標(biāo)——大鼠縮足反射閾值,考察臭氧對(duì)神經(jīng)病理性疼痛行為學(xué)的影響;利用免疫印跡法檢測(cè)臭氧對(duì)于神經(jīng)病理性疼痛標(biāo)志性分子指標(biāo)NR1、NR2B、PKCγ、ERK的影響;利用免疫印記和免疫熒光法檢測(cè)臭氧對(duì)于脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞活化程度的影響。利用免疫印記和免疫熒光法檢測(cè)臭氧對(duì)于體外培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞中的AMPK和NF-κB的影響。結(jié)果:臭氧可以減輕CCI導(dǎo)致的大鼠神經(jīng)病理性疼痛所致的機(jī)械學(xué)超敏,能降低與中樞敏化密切相關(guān)的NR1、NR2B、PKCγ和ERK的磷酸化水平。同時(shí),臭氧能夠在體內(nèi)外顯著激活A(yù)MPK。AMPK的激動(dòng)劑AICAR和A769662可以很好的模擬臭氧的作用,減輕疼痛,同時(shí)臭氧的鎮(zhèn)痛作用能夠被AMPK抑制劑Compound C劑量依賴(lài)性的取消。在體外培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞中臭氧能夠抑制NF-κB p65的核轉(zhuǎn)位。結(jié)論:臭氧能夠通過(guò)激活A(yù)MPK,進(jìn)而抑制神經(jīng)病理性疼痛誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng),使得其能夠治療神經(jīng)病理性疼痛。AMPK可能成為治療神經(jīng)病理性疼痛的潛在臨床靶點(diǎn),促進(jìn)臭氧的臨床應(yīng)用。第二部分白藜蘆醇激動(dòng)AMPK治療骨癌痛的機(jī)制研究目的:研究白藜蘆醇對(duì)骨癌痛的影響及其作用機(jī)制方法:測(cè)定經(jīng)典的疼痛行為學(xué)指標(biāo)——大鼠縮足反射閾值,考察白藜蘆醇對(duì)骨癌痛行為學(xué)的影響;利用免疫印跡法檢測(cè)骨癌痛模型中AMPK的磷酸化水平,以及白藜蘆醇對(duì)其的影響;利用免疫熒光法檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)于A(yíng)MPK、脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞活化程度、MAPK家族的影響。利用免疫印跡法檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)AKT、mTOR磷酸化水平的影響;利用體外培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞,檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)AMPK及MAPK家族的影響。結(jié)果:白藜蘆醇可以減輕TCI導(dǎo)致的大鼠機(jī)械學(xué)超敏。白藜蘆醇可以顯著增加神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞上的AMPK的磷酸化水平,能降低TCI引起的異常升高的MAPK家族、AKT和mTOR的磷酸化水平。同時(shí),白藜蘆醇能夠抑制體外培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞及小膠質(zhì)細(xì)胞上的MAPK家族的磷酸化水平,及神經(jīng)元上的AKT和mTOR的磷酸化水平。結(jié)論:白藜蘆醇能通過(guò)激活A(yù)MPK抑制MAPK信號(hào)通路,進(jìn)而抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的異�；罨�,以及神經(jīng)元上AKT和mTOR的磷酸化水平,從而緩解骨癌痛。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R402

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本文編號(hào)：2414344