【摘要】：失血性休克后,持續(xù)缺血以及不恰當(dāng)?shù)囊后w復(fù)蘇均可引起過度的炎癥反應(yīng)、血管低反應(yīng)性、血管高通透性、血液流變性異常、心肌收縮功能障礙,甚至引起器官損傷,發(fā)生多器官功能障礙綜合征或多器官衰竭。其中,微血管對(duì)血管活性物質(zhì)的反應(yīng)性低下是引起頑固性低血壓、休克難治的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。研究發(fā)現(xiàn),雌激素可提高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物失血性休克的耐受性,其作用機(jī)制涉及增強(qiáng)心肌收縮性、減輕線粒體損傷從而增加ATP生成、改善細(xì)胞能量代謝障礙、抑制氧化應(yīng)激、減輕炎癥反應(yīng)、改善免疫功能,最終減輕失血性休克導(dǎo)致的器官損傷。但是,雌激素干預(yù)失血性休克的作用是否與改善血管反應(yīng)性有關(guān)?研究較少。有研究表明,小G蛋白R(shí)ho A低表達(dá)與失血性休克后血管低反應(yīng)性的發(fā)生密切相關(guān)。那么,雌激素改善失血性休克血管反應(yīng)性的作用機(jī)制是否與Rho A有關(guān)?有待進(jìn)一步研究。為此,本研究應(yīng)用17β-雌二醇(E2)作為干預(yù)因素,觀察E2對(duì)失血性休克小鼠活體腸粘膜血流量變化以及離體微血管反應(yīng)性的作用,進(jìn)一步應(yīng)用相關(guān)工具藥,觀察Rho A-Rho激酶(ROCK)-肌球蛋白輕鏈激酶磷酸酶(MLCP)信號(hào)通路在E2提高休克小鼠血管反應(yīng)性中的作用,探討雌激素對(duì)失血性休克小鼠血管反應(yīng)性的作用與機(jī)制。將36只SPF級(jí)C57BL/6健康雌鼠隨機(jī)均分為卵巢去勢(shì)組(OVX組,24只,進(jìn)行卵巢結(jié)扎切除手術(shù))、假去勢(shì)組(OVI組,12只,不進(jìn)行卵巢結(jié)扎切除手術(shù),只切除卵巢周圍少量脂肪組織)。一周后,OVX組12只接受E2處理(每晚8:00頸背部皮下給藥,140μg·kg-1),余12只給予等量溶媒(Vehicle);OVI組給予等量Vehicle;持續(xù)1周。然后,分別將OVX+Vehicle組、OVX+E2組、OVI組分為休克組(Shock組,建立失血性休克模型:40±2 mm Hg維持1 h,液體復(fù)蘇)、假手術(shù)組(Sham組)。這樣,實(shí)驗(yàn)的總體分組情況為:Sham+OVX+Vehicle組、Shock+OVX+Vehicle組、Sham+OVX+E2組、Shock+OVX+E2組、Sham+OVI+Vehicle組、Shock+OVI+Vehicle組。各組動(dòng)物在補(bǔ)液結(jié)束后4 h或相應(yīng)時(shí)間點(diǎn),行腹部手術(shù),觀察固定位置腸袢血流量變化。隨后,留取血清,用于檢測(cè)雌激素水平。留取固定位置的腸袢,手術(shù)顯微鏡下,分離二級(jí)微動(dòng)脈,制備微血管環(huán),掛于注有PSS液的四腔線性肌動(dòng)儀灌流槽的浴槽中,持續(xù)沖入95%O2和5%CO2混合氣體,待溫度升至37℃,調(diào)零、標(biāo)準(zhǔn)化;觀察微血管對(duì)梯度濃度去甲腎上腺素(NE)的反應(yīng)性;然后,將來自各組小鼠的微血管環(huán)分別與Rho A-ROCK-MLCP信號(hào)通路的工具藥U-46619、Y-27632、C3轉(zhuǎn)移酶、崗田酸(OA)孵育或聯(lián)合孵育,觀察對(duì)梯度濃度NE的反應(yīng)性。研究結(jié)果首先發(fā)現(xiàn):小鼠去勢(shì)后,血漿雌激素水平顯著下降;雌激素治療后,血漿雌激素水平顯著升高。微血管反應(yīng)性觀察發(fā)現(xiàn),Sham+OVX+E2組微血管對(duì)多個(gè)濃度NE的反應(yīng)性顯著高于Sham+OVI+Vehicle組、Sham+OVX+Vehicle組;Shock+OVI+Vehicle組、Shock+OVX+Vehicle組、Shock+OVX+E2組微血管對(duì)多個(gè)濃度NE的反應(yīng)性分別顯著低于Sham+OVI+Vehicle組、Sham+OVX+Vehicle組、Sham+OVX+E2組;Shock+OVI+Vehicle組微血管反應(yīng)性顯著高于Shock+OVX+Vehicle組(NE為1×10-7mol·L-1),Shock+OVX+E2組微血管對(duì)多個(gè)濃度NE的反應(yīng)性顯著高于Shock+OVI+Vehicle組、Shock+OVX+Vehicle組。Rho A激動(dòng)劑U-46619顯著提高了Sham+OVI+Vehicle組、Sham+OVX+Vehicle組、Sham+OVX+E2組小鼠微血管對(duì)多個(gè)濃度NE的反應(yīng)性,MLCP抑制劑OA僅抑制了Sham+OVI+Vehicle組和Sham+OVX+Vehicle組微血管對(duì)3×10-5 mol·L-1NE的反應(yīng)性,Rho A抑制劑C3轉(zhuǎn)移酶以及ROCK抑制劑Y-27632降低了Sham+OVI+Vehicle組、Sham+OVX+Vehicle組微血管對(duì)多個(gè)濃度NE的反應(yīng)性。U-46619顯著提高了Shock+OVI+Vehicle組和Shock+OVX+Vehicle組小鼠微血管對(duì)多個(gè)濃度梯度NE的反應(yīng)性,該作用被Y-27632廢除;OA對(duì)Shock+OVI+Vehicle組、Shock+OVX+Vehicle組小鼠微血管對(duì)梯度NE的反應(yīng)性無明顯作用,OA與Y-27632聯(lián)合用藥顯著降低了Shock+OVI+Vehicle組和Shock+OVX+Vehicle組微血管對(duì)多個(gè)濃度NE的反應(yīng)性。Y-27632顯著抑制了Shock+OVX+E2組小鼠微血管對(duì)各個(gè)濃度NE的反應(yīng)性,該作用被U-46619顯著抑制;C3轉(zhuǎn)移酶對(duì)Shock+OVX+E2組小鼠微血管反應(yīng)性無明顯作用,與U-46619聯(lián)合用藥顯著提高了Shock+OVX+E2組微血管對(duì)多個(gè)濃度NE的反應(yīng)性。最后,研究結(jié)果顯示,Shock+OVX+Vehicle組小鼠腸袢血流量顯著低于Sham+OVX+Vehicle組,E2治療(Shock+OVX+E2組)顯著提高了腸袢血流量,顯著高于Shock+OVX+Vehicle組。研究結(jié)果表明:失血性休克雌鼠的微血管反應(yīng)性下降,卵巢去勢(shì)進(jìn)一步降低了失血性休克雌鼠的微血管反應(yīng)性,雌激素治療顯著提高了小鼠微血管反應(yīng)性,其機(jī)制與Rho A-ROCK-MLCP信號(hào)通路有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北北方學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R459.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2396308