本文選題：BRCA亞細胞定位 + 同源重組修復��； 參考：《臨床與實驗病理學雜志》2017年03期

【摘要】：目的 探討腫瘤BRCA1細胞內(nèi)定位對放射線和PARP抑制劑敏感性的影響。方法 采用siRNA干擾抑制乳腺癌細胞株MCF7內(nèi)源性BRCA1表達,轉(zhuǎn)染BRCA1細胞內(nèi)定位不同的載體:p CMV-3x Flag-WT-BRCA1、p CMV-3x Flag-NES-BRCA1、p CMV-3x Flag-NLS-BRCA1。采用免疫熒光法檢測BRCA1的細胞定位及細胞核γ-H2AX和Rad51核焦點形成,應(yīng)用流式細胞技術(shù)檢測細胞凋亡,克隆形成實驗檢測體外細胞存活。結(jié)果 轉(zhuǎn)染W(wǎng)T-BRCA1有47%細胞核表達,23%細胞質(zhì)表達,30%細胞質(zhì)和細胞核均表達,NES-BRCA1 mutant表達主要定位于細胞核(87%);NLS-BRCA1 mutant定位于細胞質(zhì)(82%)。WTBRCA1、NES-BRCA1 mutant和NLS-BRCA1 mutant三種載體轉(zhuǎn)染的細胞4 Gy放射處理后2 h,Rad51核焦點陽性細胞數(shù)分別為87%、84%及13%;放射后24 h,γ-H2AX核焦點陽性細胞分別為22%、25%及59%。NLS-BRCA1 mutant轉(zhuǎn)染細胞較WTBRCA1和NES-BRCA1 mutant轉(zhuǎn)染細胞ABT-888和放射處理后誘導的凋亡細胞增加,克隆存活減少。結(jié)論 BRCA1的細胞內(nèi)定位影響DNA雙鏈斷裂同源重組修復,并可預測腫瘤對放射和PARP抑制劑的敏感性。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of tumor BRCA1 cell localization on radiosensitivity and PARP inhibitor sensitivity. Methods siRNA interference was used to inhibit the expression of endogenous BRCA1 in breast cancer cell line MCF7, and transfected into BRCA1 cells with different vectors: P CMV-3x Flag-WT-BRCA1P CMV-3x Flag-NES-BRCA1P CMV-3x Flag-NLS-BRCA1. The cellular localization of BRCA1 and nuclear focus formation of 緯 -H2AX and Rad51 were detected by immunofluorescence assay, apoptosis was detected by flow cytometry, and cell survival in vitro was detected by clone formation assay. Results 47% of the cells transfected with WT-BRCA1 expressed 30% of the cytoplasm and 30% of the cytoplasm. The expression of NES-BRCA1 mutant was mainly located in the NLS-BRCA1 mutant of the cells transfected with NLS-BRCA1. WTBRCA1, NES-BRCA1, NES-BRCA1 mutant and NLS-BRCA1 mutant were transfected with 4 Gy radiation treatment. The number of focal point positive cells was 87% and 13% in the latter 2 h, 22% and 25% in 緯 -H2AX cells at 24 h after irradiation, respectively, and the number of 59%.NLS-BRCA1 mutant transfected cells was higher than that of ABT-888 cells transfected with WTBRCA1 and NES-BRCA1 mutant cells and apoptosis cells induced by radiation treatment. Clone survival reduced. Conclusion intracellular localization of BRCA1 affects the repair of DNA double strand break homologous recombination and can predict the sensitivity of tumor to radiation and PARP inhibitors.
【作者單位】： 廣州醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院呼吸疾病國家重點實驗室/廣州呼吸疾病研究所;中山大學附屬第一醫(yī)院病理科;
【分類號】：R737.9

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本文編號：1836389