本文選題：指數(shù)富集配基的系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)　切入點：核酸適配體　出處：《中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報》2017年08期

【摘要】：人中性粒細(xì)胞FcγRI(即CD64),Ig G Fc高親和力受體之一,是早期診斷膿毒血癥和系統(tǒng)性細(xì)菌感染的一個靈敏和特異的新標(biāo)志物;目前,采用流式細(xì)胞計量術(shù)測定,難以在一般實驗室開展。本研究旨在應(yīng)用新型的體外篩選技術(shù)——指數(shù)富集配基的系統(tǒng)進(jìn)化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技術(shù)——從體外合成的隨機寡核苷酸文庫中篩選人FcγRI的高親和力和高特異性的核酸適配體(aptamer)。本文以人FcγRI為靶標(biāo),將其固定在羧基活化磁珠上,進(jìn)行SELEX篩選。經(jīng)過8輪篩選,共獲得3個重點研究的單克隆適配體。生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示,人FcγRI適配體的模擬二級結(jié)構(gòu)以莖-環(huán)和G-四聚體為主,可能是FcγRI與適配體的作用位點,G-T錯配常見。流式細(xì)胞計量術(shù)和熒光顯微鏡分析顯示,篩選出的典型單克隆適配體解離常數(shù)(the dissociation constant,Kd)均達(dá)到納摩爾水平,而且適配體只與膿毒血癥中性粒細(xì)胞結(jié)合,具有良好的親和力和特異性。本研究表明,通過SELEX技術(shù),成功獲取了人FcγRI特異性核酸適配體,為以此適配體為分子探針,進(jìn)一步建立用于膿毒血癥早期診斷的新方法奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Human neutrophil FC 緯 RI, one of the high affinity receptors of Ig G FC, is a sensitive and specific new marker for early diagnosis of sepsis and systemic bacterial infection. The aim of this study was to apply a new in vitro screening technique, the systematic evolution of ligands by exponential oligonucleotide Selex, to screen the high level of human FC 緯 RI from a random oligonucleotide library synthesized in vitro. Affinity and high specificity of aptamer.Human FC 緯 RI was used as the target. It was immobilized on carboxyl activated magnetic beads for SELEX screening. After 8 rounds of screening, three major monoclonal aptamers were obtained. Bioinformatics analysis showed that, The simulated secondary structures of human FC 緯 RI aptamers are mainly stem-ring and G-tetramer, which may be the common G-T mismatch between FC 緯 RI and aptamer. The typical monoclonal aptamer dissociation constant of the dissociation constantKd) has reached the nanomolor level, and the aptamer only binds to septic neutrophils with good affinity and specificity. The specific aptamer of human FC 緯 RI nucleic acid was successfully obtained, which laid a foundation for the further establishment of a new method for the early diagnosis of sepsis by using the aptamer as a molecular probe.
【作者單位】： 福州總醫(yī)院檢驗科;
【基金】：福建省科技計劃項目(No.2012D026) 福建省社會發(fā)展重點項目(No.2010Y0044)資助~~
【分類號】：R446.6;R459.7

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 甘龍杰;蘭小鵬;;適配體芯片技術(shù)及其應(yīng)用[J];臨床檢驗雜志;2009年06期

2 蘭小鵬;;適配體技術(shù)及其在醫(yī)學(xué)檢驗研究中的作用[J];臨床檢驗雜志;2012年10期

3 滿燕;呂雪飛;彭廣;宋達(dá);慶宏;;雙適配體夾心微陣列芯片在凝血酶檢測中的應(yīng)用[J];生命科學(xué)儀器;2014年Z1期

4 蘭小鵬;;適配體技術(shù)在分子影像學(xué)中的應(yīng)用現(xiàn)狀及展望[J];功能與分子醫(yī)學(xué)影像學(xué)(電子版);2014年01期

5 江麗;蘭小鵬;曾燕麗;甘龍杰;;用SELEX技術(shù)篩選葡萄球菌腸毒素B特異性適配體[J];臨床檢驗雜志;2009年06期

相關(guān)會議論文 前1條

1 唐吉軍;郭磊;申睿;余濤;徐華;劉合珠;馬小溪;謝劍煒;;基于適配體的實時定量PCR檢測尿液中的人促紅細(xì)胞生成素[A];中國化學(xué)會第27屆學(xué)術(shù)年會第09分會場摘要集[C];2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 林雪霞;微流控芯片與可控適配體技術(shù)用于細(xì)胞代謝物分析及其相互作用的研究[D];北京化工大學(xué);2015年

2 鄧?yán)?非標(biāo)記型電化學(xué)適配體傳感器的構(gòu)建及其在蛋白質(zhì)檢測中的應(yīng)用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

3 張學(xué)洋;基于適配體和抗體功能化納米材料的疾病標(biāo)記蛋白質(zhì)分離分析新方法研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 朱文慧;基于適配體的信號放大技術(shù)快速檢測志賀氏菌[D];湖南師范大學(xué);2015年

2 何敏瑜;超聲介導(dǎo)適配體門控空心介孔二氧化硅納米粒的藥物釋放研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

3 古樂;基于多適配體和熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)的蛋白質(zhì)檢測方法研究[D];北京理工大學(xué);2016年

4 蔣燦;基于適配體熒光傳感器檢測IgE的方法研究[D];天津科技大學(xué);2015年

5 朱玲;基于多巴胺適配體標(biāo)記的碳點和納米石墨的熒光生物傳感平臺的構(gòu)建及其應(yīng)用[D];南京醫(yī)科大學(xué);2016年

6 劉亞楠;凝血酶的新型適配體—懸浮芯片檢測技術(shù)及作用機制研究[D];天津大學(xué);2015年

7 李一林;基于適配體探針技術(shù)的高靈敏度檢測蛋白質(zhì)方法研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2008年

8 王曉芳;基于核酸適配體的凝血酶檢測新方法研究[D];山西大學(xué);2012年

9 張寧;HIV-P24核酸適配體的篩選[D];蘭州理工大學(xué);2012年

10 王曉清;HBsAg特異性核酸適配體的篩選[D];蘭州大學(xué);2012年

，

本文編號：1688914