本文選題：膿毒癥　切入點：急性肺損傷　出處：《天津醫(yī)科大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:膿毒癥是重癥監(jiān)護病房的危重病,病情進展迅速,錯過最佳治療時機容易導致抗炎反應和促炎反應失控,大量炎癥反應因子產生,即“炎癥瀑布”,嚴重威脅患者的生命安全,該病死亡率較高,我國重癥監(jiān)護病房(intensive care unit,ICU)嚴重膿毒癥的病死率高達48.7%。膿毒癥最常見的并發(fā)癥是急性肺損傷,參與肺損傷的信號通路較多且各個通路之間存在錯綜復雜的交叉點,目前急性肺損傷治療效果欠佳,醫(yī)療負擔也大幅度增加。因此在臨床工作中對膿毒癥所致的急性肺損傷,早期診斷顯得尤為重要。血管內皮細胞損傷在急性肺損傷發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用,血管內皮細胞表面覆蓋著一層多糖包被,其核心成分是多配體蛋白聚糖-1(Syndecan-1),在嚴重感染時極易從內皮細胞表面脫落,導致肺臟血管滲透性增加,在機體保持顯性液體正平衡時更容易導致肺水腫甚至出現(xiàn)急性呼吸窘迫綜合征(Acute respiratory distress syndrome,ARDS)。Wnt5a是(wingless-related integration site-5a)Wnt非經典信號通路的代表蛋白之一,它作為巨噬細胞的效應因子可通過結合不同的Frizzled5受體觸發(fā)不同的通路,可以通過激活GSK3β后調控NF-κB下游的通路,產生相應的炎癥因子。本研究課題擬建立膿毒癥致急性肺損傷的動物實驗模型,通過研究肺臟的病理改變、肺血管滲透性變化、肺血管內皮細胞病理改變及內毒素處理后小鼠血清標志物Wnt5a、Syndecan-1隨刺激時間延長的變化趨勢,探討Wnt5a及Syndecan-1這兩種蛋白在膿毒癥致急性肺損傷(Acute lung injury,ALI)動物模型中的表達水平。方法:全部實驗過程分為兩部分,第一部分:制備膿毒癥致ALI小鼠模型,將120只試驗小鼠按照隨機數字表法分為損傷組和對照組,損傷組予腹腔注射10mg/kg大腸桿菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS,血清型:O55:B5),對照組注射等量生理鹽水。按肺損傷時間不同分為1h,3h,5h,8h,12h,24h等6個時間點,每組10只,用于研究肺組織病理改變、Wnt5a及Syndecan-1在各組小鼠血清中的表達水平,在不同時間點取全血后保留上清備用;將小鼠麻醉過量致死,開胸后迅速取左肺組織保存待行(hematoxylin-eosin staining,HE)染色,在光鏡下觀察小鼠肺組織病理改變;在透射電鏡下觀察右肺中葉肺血管內皮細胞結構的改變;提取右肺上葉組織蛋白,應用Western blotting檢測Wnt5a蛋白的表達水平;取右肺下葉提取組織m RNA,Real-time PCR測定Syndecan-1基因的表達水平;通過ELISA法測定各組小鼠血清Wnt5a、Syndecan-1的濃度變化,觀察不同時間點的血清濃度。第二部分:將100只小鼠隨機分為損傷組和對照組,應用同樣的方法制備動物模型;按肺損傷時間不同分為1h,3h,5h,8h,12h等5個時間點,每組10只,用于研究肺血管滲透性變化,通過尾靜脈注射伊文思藍染液觀察肺血管滲透性變化。結果:1.正常組肺組織肺泡壁較薄,肺泡腔內無紅細胞及炎性細胞等滲出;隨著注射大腸桿菌脂多糖(LPS)時間的延長,肺組織損傷程度逐漸加重。損傷組的肺組織肺泡壁顯著增厚,肺泡壁間靜脈瘀滯,肺泡腔內大量紅細胞及炎性細胞滲出,部分肺泡腔可觀察到透明膜形成。2.透射電鏡下觀察到損傷組血管內皮細胞之間的間距增寬、線粒體出現(xiàn)不同程度水腫、血管基膜與內皮細胞呈不同程度分離,基質出現(xiàn)較多脂質空泡。3.與同時間點對照組相比,損傷組小鼠血清Wnt5a濃度在3h逐漸升高,在5h-8h達峰值,損傷12h后逐漸呈下降趨勢,至24h與對照組的差別不明顯。4.損傷組小鼠血清Syndecan-1在注射大腸桿菌脂多糖(LPS)3h內維持較高濃度,之后逐漸下降,在8h后稍微回升,與對照組相比較,在24h內均維持較高濃度。5.Western blotting檢測Wnt5a蛋白水平,在5h-8h表達量較高。6.Syndecan-1基因在3h表達水平最高。7.伊文思藍染液在甲酰胺溶液中的濃度隨肺損傷程度加重呈升高趨勢,在肺損傷5h-8h損傷達峰值。結論:本論文首次探討了Wnt5a在急性肺損傷動物模型中的表達及濃度變化趨勢,通過研究血管內皮細胞多糖包被的核心成分Syndecan-1的濃度變化及伊文思藍染液滲出濃度來評估在急性肺損傷中肺血管內皮細胞的損傷,通過Wnt5a、Syndecan-1這兩項標志物的濃度變化來評估臨床急性肺損傷的進程。本研究發(fā)現(xiàn)在膿毒癥致急性肺損傷早期即可出現(xiàn)血管內皮細胞的損傷,血管滲透功能發(fā)生改變,具有一定的臨床診斷意義;二者濃度變化與光鏡下肺組織的病理改變程度相一致;二者作為膿毒癥致急性肺損傷(Sepsis induced-ALI)的早期生物學標志物為臨床膿毒癥液體管理提供一定指導意義。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R459.7

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