本文關(guān)鍵詞： 慢性炎性痛 表觀遺傳機制 TRPM2陽離子通道 脊髓　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的探討M型瞬時受體電位通道2(TRPM2)介導(dǎo)的小鼠慢性炎性痛及其表觀遺傳學(xué)調(diào)控機制。方法第一階段:考察AGK2對小鼠慢性炎性痛的影響,野生型小鼠和TRPM2~(-/-)小鼠,根據(jù)AGK2的劑量(0.2μg/kg、1μg/kg、5μg/kg、25μg/kg)隨機分為6大組(n=6),即:C57 CON組、C57-CFA組、C57-CFA-AGK2組;TRPM2~(-/-)CON組、TRPM2~(-/-)CFA組、TRPM2~(-/-)-CFA-AGK2組;每組再據(jù)性別不同,進一步分成2個亞組(a.雄性,b.雌性)。手術(shù)前1日測定每組小鼠的基礎(chǔ)機械縮足閾值(MWT)、冷縮足潛伏期(CPWL)、熱縮足潛伏期(PWL)、足爪腫脹度,手術(shù)后3~9日連續(xù)鞘內(nèi)注射相應(yīng)劑量的AGK2,每日2次,注射時間為早晚八點,同時在手術(shù)后1,3,5,7,9日測定各組小鼠的行為學(xué)。第二階段:考察SAHA對小鼠慢性炎性痛的影響,將野生型(C57)小鼠和TRPM2~(-/-)小鼠,按隨機對照原則分為6組:C57對照組(C57 CON組)、C57炎性痛組(C57 CFA組)、C57炎性痛+辛二酰苯胺異羥肟酸組(C57 SAHA組)、TRPM2~(-/-)對照組(TRPM2~(-/-)CON組)、TRPM2~(-/-)炎性痛組(TRPM2~(-/-)CFA組)、TRPM2~(-/-)炎性痛+辛二酰苯胺異羥肟酸組(TRPM2~(-/-)SAHA組),每組6只。采用完全弗氏佐劑(CFA)40μl于小鼠左后肢足底皮下注射建立慢性炎性痛模型,SAHA處理組于造模后3~9 d行為學(xué)測試后鞘內(nèi)注射50 mg/kg的SAHA,其它4組注射等量生理鹽水。分別測定小鼠的機械刺激傷害感受閾、輻射熱刺激傷害感受閾、冷痛閾及足爪腫脹度。第三階段:熒光定量PCR分析SIRTs基因的差異性表達,免疫熒光雙標(biāo)和激光共聚焦法檢測SIRT2/TRPM2蛋白的共表達情況,蛋白印跡法(western bloting)分析各組小鼠SIRT2下游信號途徑CREB蛋白的表達。結(jié)果第一階段實驗結(jié)果:疼痛行為學(xué):CFA誘導(dǎo)的慢性炎性痛C57小鼠造模后,與對照組比較,PWL、CPWL、MWT及足爪腫脹度均呈顯著下降(P0.001),給予AGK2治療后,小鼠疼痛行為的改善與AGK2的給藥濃度呈顯著的正相關(guān);TRPM2~(-/-)小鼠在未造模前表現(xiàn)出正常的疼痛行為學(xué)反應(yīng),與C57小鼠沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),造模后3 d,其PWL、CPWL、MWT及足爪腫脹度略低于TRPM2~(-/-)CON組,但仍顯著高于C57 CFA組(P0.001),給予AGK2注射后,小鼠的疼痛行為學(xué)也有明顯改善。第二階段實驗結(jié)果:C57 CFA組的機械刺激傷害感受閾值和熱刺激傷害感受閾值均明顯低C57 CON組(P0.001),C57 SAHA組在給予SAHA干預(yù)后,各種疼痛閾值顯著升高,與C57 CFA組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.001);TRPM2~(-/-)CFA組機械刺激傷害感受閾值和熱刺激傷害感受閾值均明顯高于C57 CFA組,與TRPM2~(-/-)SAHA組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。C57 CFA組足爪腫脹度造模后明顯升高,與C57 CON組、C57 SAHA組比較均有顯著差異(P0.001);TRPM2~(-/-)CFA組足爪腫脹度明顯低于C57 CFA組(P0.001),與TRPM2~(-/-)SAHA相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。第三階段實驗結(jié)果:造模后,C57小鼠SIRT1,2,4,6,7 mRNA的表達均明顯上升,而SIRT3和SIRT5的mRNA的表達是下降的;在免疫熒光定位分析中,C57 CFA組與TRPM2~(-/-)CFA組的SIRT2的蛋白表達沒有顯著差異,但是TRPM2~(-/-)CFA組TRPM2與C57 CFA組比較幾乎沒有表達。結(jié)論TRPM2參與小鼠慢性炎性痛的調(diào)節(jié),組蛋白去乙�；敢种苿┛梢酝ㄟ^對TRPM2的表觀遺傳調(diào)控改善小鼠的痛行為。
[Abstract]:鐩殑鎺㈣M鍨嬬灛鏃跺彈浣撶數(shù)浣嶉，

本文編號：1500628