本文關鍵詞： 甲基苯丙胺 條件性位置偏好 硫氧還蛋白-1　出處：《昆明理工大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：藥物成癮(Drug addiction)是指反復的使用某種精神類藥物以后,從而引發(fā)的一種慢性復發(fā)性的腦疾病。長期使用這些藥物會出現(xiàn)強迫性覓藥行為、對藥物不可控制的渴求、以及復吸等主要表現(xiàn),其相關分子機制尚未闡述清楚。甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)是屬于新型毒品苯丙胺類興奮劑(amphetamine type stimulants,ATS),俗稱冰毒,純的 METH 為白色結晶體。具有作用時間持久,起效快等特點。所以近幾年來,METH已經(jīng)逐漸成為了繼大麻后第二大廣泛濫用的藥物。長期濫用METH會產(chǎn)出依賴藥物的現(xiàn)象和神經(jīng)毒性,導致軀體疾病和精神病障礙。甲基苯丙胺被公認為中樞興奮劑,并且作用于產(chǎn)生獎賞效應的中腦邊緣多巴胺系統(tǒng)(mesolimbic dopamine system,MLDS),主要有中腦腹側被蓋區(qū)(ventral tegmental area of the midbrain,VTA)、伏隔核(the nucleus accumbens,NAc)、前額葉皮層(prefrontal cortex,PFC)等腦區(qū)。所以,VTA-NAc-PFC神經(jīng)環(huán)路可能與成癮藥物引起獎賞相關的。VTA到NAc和其他前腦區(qū)域中多巴胺(dopamine,DA)神經(jīng)元活性與成癮藥物作用密切相關。當成癮藥物用于機體后使得VTA區(qū)中的DA水平升高。NAc作為VTA的投射區(qū),NAc區(qū)中的DA的水平也增高,DA增高導致DA受體以及下游的分子改變。cAMP反應元件結合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB),△ FosB 蛋白和細胞周期依賴蛋白激酶 5(Cyclin-depdent kinase 5,CDK5)等都與藥物產(chǎn)生的獎賞效應有聯(lián)系。硫氧還蛋白-1(Thioredoxin-1,Trx-1)是一種氧化還原調節(jié)蛋白,普遍存在于所有類型的細胞組織中,是從原核生物到哺乳動物的保守進化的。Trx-1系統(tǒng)是由Trx-1、硫氧還蛋白還原酶(thioredoxin reductase-1,Trx-1R),和一個電子供體煙酸胺腺嘌呤二核苷磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)組成的。Trx-1生物學功能很多:調節(jié)轉錄因子活性、細胞生長、胚胎生長發(fā)育生存等。此外,Trx-1在神經(jīng)系統(tǒng)中的具有重要作用,包括類神經(jīng)生長因子作用。METH成癮能夠產(chǎn)生氧化應激,使得氧化還原平衡狀態(tài)受到破壞。Trx-1是體內重要的抗氧化蛋白,能夠調節(jié)機體的氧化還原平衡,對于METH引起的氧化應激可以起到抵抗的作用,使機體內環(huán)境達到穩(wěn)定狀態(tài)。研究發(fā)現(xiàn),過表達Trx-1以后能夠調節(jié)增加抗炎細胞因子和減少促炎細胞因子,從而抑制甲基苯丙胺誘導脾中的炎癥反應。此外,低表達Trx-1能夠降低METH誘導增加的p-CREB表達水平,這些研究結果都說明Trx-1是與METH成癮相關的。我們前期研究表明:在METH誘導小鼠條件性位置偏好(conditioned place preference,CPP)的模型中,高表達Trx-1能夠對成癮具有改善作用,Trx-1能夠抵抗METH慢性作用以后引發(fā)的CPP的形成。為了進一步研究Trx-1在特定腦區(qū)中對METH成癮的調節(jié)分子機制,通過構建METH所致CPP模型,利用核團定位注射技術,在小鼠VTA區(qū)雙邊注射Trx-1特異性干擾RNA,構建VTA區(qū)低表達Trx-1小鼠,并比較野生型/陰性對照組和低表達組,METH所致條件位置偏好差異。最后利用蛋白免疫印跡技術(western blotting,WB)檢測VTA、NAc腦區(qū)中與METH成癮相關分子Trx-1、多巴胺D1受體(D1 dopamine receptor,D1R)、CREB、△FosB 以及 CDK5 的表達。結果:本課題證實了 VTA區(qū)低表達Trx-1后,與野生型/陰性對照組相比,METH誘導的小鼠CPP的作用增強。蛋白質免疫印跡技術表明低表達Trx-1小鼠的VTA區(qū)和NAc區(qū)結果相同:METH導致Trx-1明顯降低,METH作用后D1R、CREB、△FosB以及CDK5的表達增加,而Trx-1低表達進一步增加D1R、CREB、△FosB以及CDK5的表達。總結:VTA區(qū)低表達Trx-1增強了 METH引起的CPP相關的信號通路,因此,增強METH誘導的小鼠CPP的作用,Trx-1可能為METH成癮的治療新的靶點,本研究為進一步明確METH成癮機制提供了理論依據(jù)。
[Abstract]:Drug addiction is a kind of chronic recurrent brain disease after repeated use of certain psychotropic drugs . Trx - 1 ( Trx - 1 , Trx - 1 , Trx - 1 ) is an important antioxidant protein in mice . The results showed that the low expression of Trx - 1 in the VTA region increased the expression of D1R , CREB , 鈻，

本文編號：1462064