本文關(guān)鍵詞：基于多組份DNA酶介導(dǎo)滾環(huán)擴增對microRNA的超靈敏電化學(xué)檢測　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：Micro RNAs(miRNAs)是一類調(diào)節(jié)基因表達的短RNA序列,通過連續(xù)內(nèi)切酶剪切過程從長的前體RNA釋放出來。Mi RNA異常表達與人類腫瘤,神經(jīng)性疾病以及病毒感染等有關(guān)。定性定量分析miRNA對疾病早期診斷和治療起到十分重要的作用。因此,發(fā)展靈敏、特異的檢測方法已成為miRNA檢測分析的迫切需求。然而,miRNA序列高度同源、尺寸小和自然豐度低。現(xiàn)應(yīng)用最多的技術(shù),例如聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、微陣列和Northern印跡法不能靈敏和特異地檢測miRNA。所以發(fā)展高靈敏和有效的方法對miRNA檢測尤為重要。本研究基于多組份DNA酶(MNAzyme)放大和滾環(huán)擴增(RCA),構(gòu)建了一個電化學(xué)策略來超靈敏和特異地檢測miRNA。在靶miRNAs存在的情況下,A部分酶(partzyme A)和B部分酶(partzyme B)組裝形成有酶活性的多組份DNA酶。多組份DNA酶形成之后開始剪切發(fā)夾狀底物而釋放出生物素標記的片段,該片段與金電極上的捕獲探針互補結(jié)合。然后在電極上觸發(fā)滾環(huán)擴增形成重復(fù)串聯(lián)的擴增產(chǎn)物并結(jié)合大量的檢測探針。最后,通過親和素化的堿性磷酸酶進行酶促反應(yīng)得到電流信號。該生物傳感器檢測線可達到1.66 f M,線性范圍為10 f M到1 n M。同時具有很好的重現(xiàn)性和特異性,可區(qū)分單個堿基錯配。而且可對人乳腺癌MCF-7細胞總RNA提取樣本中的miRNA進行檢測。
[Abstract]:Micro RNAsmiRNAs) is a kind of short RNA sequence that regulates gene expression. The abnormal expression of Mi RNA was released from the long precursor RNA by continuous endonuclease shearing process. Qualitative and quantitative analysis of miRNA plays a very important role in the early diagnosis and treatment of the disease. Therefore, the development of sensitivity. Specific detection methods have become an urgent need for miRNA detection and analysis. However, miRNA sequences are highly homologous, small in size and low in natural abundance. For example, polymerase chain reaction (PCR). Microarrays and Northern blotting can not detect miRNAs sensitively and specifically. Therefore, it is very important to develop highly sensitive and effective methods for miRNA detection. MNAzyme) amplification and rolling loop amplification (RCA). An electrochemical strategy was constructed for the detection of miRNA in a hypersensitive and specific manner in the presence of target miRNAs. Partzyme A (A) and partzyme B (B). Assemble to form a multicomponent DNA enzyme with enzyme activity. After the formation of a multicomponent DNA enzyme, the hairpin substrate is cut and biotin labeled fragments are released. The fragment is complementary to the capture probe on the gold electrode. Then the rolling loop amplification is triggered on the electrode to form a repeated tandem amplification product and a large number of detection probes are combined. Finally. The current signal was obtained by enzymatic reaction of affinity alkaline phosphatase. The detection line of the biosensor can reach 1.66 FM. The linear range is from 10 FM to 1 n M. at the same time, it has good reproducibility and specificity. Single base mismatch can be distinguished and miRNA in total RNA samples of human breast cancer MCF-7 cells can be detected.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R440;TP212.3

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本文編號：1433305