本文關(guān)鍵詞：8種快速制備細(xì)菌基因組DNA方法的效果評(píng)價(jià)　出處：《現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)》2017年16期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的探索用于革蘭陰/陽(yáng)性細(xì)菌基因組DNA制備的快速、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)方法。方法采用水煮沸法、堿煮沸法、堿-SDS-煮沸法、丙酮-SDS-煮沸法、NP-40-煮沸法、Triton-100-煮沸法、SDS-煮沸法、Triton-100-NP-40-煮沸法制備大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌DNA,觀察不同方法所得DNA的量、分子大小、純度以及用其作為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增反應(yīng)效果。結(jié)果與其他方法比較,堿-SDS-煮沸法、丙酮-SDS-煮沸法和SDS-煮沸法得到的DNA量較多、DNA分子較大、純度較好;堿-SDS-煮沸法上清液DNA含量最大及PCR擴(kuò)增效果最佳,水煮沸法所得DNA含量顯著低于其他方法,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。各方法煮沸5 min與10 min所得DNA量和PCR檢測(cè)DNA的循環(huán)閾值均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),煮沸10 min的DNA液中有機(jī)雜質(zhì)增多。結(jié)論堿-SDS-煮沸法煮沸5min制備細(xì)菌基因組DNA的效果最優(yōu),水煮沸法效果最差。
[Abstract]:Objective to explore for gram negative / positive bacterial genomic DNA prepared by rapid, simple, economic method. Methods using water boiling method, alkali boiling method, -SDS- acetone -SDS- alkali boiling method, boiling method, NP-40- boiling method, Triton-100- boiling method, SDS- boiling method, Triton-100-NP-40- boiling preparation of Escherichia coli and Staphylococcus Staphylococcus DNA, observation of DNA from different methods, molecular size, purity and use it as a template for amplification effect of real-time fluorescence quantitative PCR. Results compared with other methods, -SDS- alkali boiling method, DNA large amount of acetone and SDS- -SDS- obtained by boiling boiling method, DNA large molecules, high purity alkali; -SDS- the supernatant DNA content maximum boiling method and PCR amplification effect is the best, the boiling water method DNA is significantly lower than the other methods, the difference was statistically significant (P0.05). The method of boiling 5 min and 10 min of the DNA and PCR. There was no significant difference in the threshold value of DNA for measuring the P0.05 (P0.05). The organic impurities in the DNA liquid boiled 10 min increased. Conclusion the boiling effect of alkali -SDS- boiling on 5min is the best, and the boiling method is the worst.

【作者單位】： 成都中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院;
【分類號(hào)】：R440
【正文快照】： 隨著核酸快速鑒定時(shí)代的到來,更需要加快和簡(jiǎn)化核酸制備,包括減少有害化學(xué)品使用、減少冷藏、更少制備步驟、更快或更有效的裂解、自動(dòng)化[1]。核酸制備涉及裂解細(xì)胞/生物以釋放核酸、核酸與蛋白分離、去除核酸中抑制物等。常用細(xì)胞裂解方法有物理法(煮沸、反復(fù)凍-融、超聲波)

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