本文關(guān)鍵詞：包蟲病診斷抗原分子Eg-00512的篩選、重組表達(dá)及抗原性鑒定　出處：《中國病原生物學(xué)雜志》2017年01期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 細(xì)粒棘球絳蟲 生物信息學(xué) 重組蛋白rEg- 免疫原性

【摘要】：目的篩選細(xì)粒棘球絳蟲原頭蚴抗原分子Eg-00512,并進(jìn)行重組表達(dá)、純化及免疫特性鑒定,以期作為棘球蚴病特異性診斷抗原。方法對國家人類基因組南方研究中心(CHGCS)發(fā)表的細(xì)粒棘球絳蟲4個不同發(fā)育階段的表達(dá)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行差異比較分析,篩選僅在原頭蚴階段特異表達(dá)的基因Eg-00512;利用DNAStar軟件包對其編碼蛋白Eg-00512進(jìn)行抗原表位分析;選取合適的序列片段作為目的片段,構(gòu)建基因工程菌株Eg-00512/pET-24a/BL-21,經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)、純化獲得重組蛋白rEg-00512。將BALB/c小鼠隨機(jī)分為免疫組、佐劑對照組、PBS對照組,分別經(jīng)皮下多點注射重組蛋白、PBS+弗氏佐劑和PBS,2周后加強免疫一次。分別于免疫前,第一次免疫后2、4周每組小鼠尾靜脈采血,免疫后5周摘眼球法采血,采用ELISA檢測各時間點血清中特異性IgG抗體水平變化;以該血清為一抗,采用Western blot分析重組蛋白的免疫反應(yīng)性。結(jié)果篩選出僅在細(xì)粒棘球蚴原頭蚴階段高表達(dá)的Eg-00512基因。該基因編碼203個氨基酸,分子質(zhì)量單位為23ku,其抗原表位主要位于1-15、55-93、111-119、126-149、166-194和199-202氨基酸殘基及其附近。成功構(gòu)建基因工程菌株Eg-00512/pET-24a/BL-21,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白rEg-00512。重組蛋白rEg-00512純化后免疫小鼠誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性IgG抗體,其中免疫5周時抗體達(dá)最高水平A450值為1.807±0.767,與佐劑對照組0.111±0.014和PBS對照組0.132±0.0246比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。Western blot顯示,該重組抗原可被免疫鼠抗血清及細(xì)粒棘球蚴原頭蚴感染鼠血清識別,而不與正常小鼠血清反應(yīng)。結(jié)論成功篩選并獲得重組蛋白rEg-00512,該蛋白具有較好的抗原性,可作為棘球蚴病免疫診斷候選抗原。
[Abstract]:The purpose of screening of Echinococcus granulosus antigen Eg-00512 and recombinant expression, purification and immunological characterization, in order for hydatid disease diagnostic antigen. Methods the National Human Genome Research Center (CHGCS) released from Echinococcus granulosus 4 expression with developmental stages of the spectral data are compared analysis of Eg-00512 gene screening was expressed only in protoscolex stage specific; package for the encoding protein Eg-00512 antigen epitope analysis by using DNAStar software; selecting appropriate sequence fragments as target fragment, gene engineering strain Eg-00512/pET-24a/BL-21 induced by expression of recombinant protein rEg-00512. BALB/c mice were randomly divided into group of immune adjuvant purification. The control group, PBS control group, were treated with subcutaneous injection of recombinant protein PBS+, Freund's adjuvant and PBS, 2 weeks after the booster immunization respectively before immunization. After the first immunization, 2,4 weeks of mice tail vein blood, blood eye method pick 5 weeks after immunization, the levels of specific IgG antibody in the serum of each time point ELISA detection; the anti serum, immune response by Western blot analysis of the recombinant protein. Results showed that Eg-00512 gene was highly expressed in protoscolex stage. The gene encoding 203 amino acids, the molecular weight of 23ku, the epitope is located in 1-15,55-93111-119126-149166-194 and 199-202 amino acid residues and its vicinity. The successful construction of the genetic engineering strain Eg-00512/pET-24a/BL-21, the expression of recombinant protein rEg-00512. recombinant protein after purification of rEg-00512 mice induced by specific IgG antibody induced by IPTG. The immune antibody reached the highest level at 5 weeks, the value of A450 was 1.807 + 0.767, 0.111 + 0.014 and adjuvant control group and PBS control group 0.132 + 0. There are significant differences between the 0246 (P0.01).Western blot showed that the recombinant antigen can be immune mouse antiserum and protoscolex infected mice sera, but not with the reaction of normal mouse serum. Conclusion successfully screened and recombinant protein rEg-00512, the protein has good antigenicity, can be used as a candidate for immunological diagnosis of hydatid disease antigen.

【作者單位】： 寧夏醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院檢驗系;寧夏醫(yī)科大學(xué)包蟲病實驗室;寧夏醫(yī)科大學(xué)科技中心;寧夏醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;寧夏醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原與免疫教研室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(No.81360249)
【分類號】：R532.32;R446.6
【正文快照】： ***taneously injected with PBS.The adjuvant control group and the PBS control group were given a booster after 2weeks.Blood was obtained via the caudal vein before immunization and 2and 4weeks after the first immunization.Blood was alsoobtained through t

【參考文獻(xiàn)】

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【二級參考文獻(xiàn)】

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4 高s，

本文編號：1371142