本文關(guān)鍵詞：二甲雙胍激活A(yù)MPK通路減輕內(nèi)毒素誘導(dǎo)的膿毒癥心肌炎癥損傷的機(jī)制研究　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：第一部分:二甲雙胍對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的膿毒癥心肌中炎癥損傷的保護(hù)作用目的:探討二甲雙胍是否能夠?qū)?nèi)毒素誘導(dǎo)的膿毒癥心肌炎癥損傷起到保護(hù)作用以及是否與二甲雙胍的劑量具有相關(guān)性。方法:雄性BALB/c小鼠48只,隨機(jī)分為A(對(duì)照組)、B(二甲雙胍組)組、C(膿毒癥組)、D(膿毒癥+二甲雙胍100mg/kg組)、E(膿毒癥+二甲雙胍200mg/kg組)、F(膿毒癥+二甲雙胍400mg/kg組)六組,每組8只,A組、B組和C組分別予生理鹽水、二甲雙胍400mg/kg和LPS10mg/kg腹腔注射,D、E、F組在腹腔注射LPS10mg/kg的基礎(chǔ)上,提前0.5小時(shí)分別予二甲雙胍100mg/kg、200mg/kg和400mg/kg腹腔注射,建模18小時(shí)后處死小鼠。ELISA法檢測(cè)血漿CK-MB和BNP濃度,取心肌組織提取蛋白,檢測(cè)心肌組織MPO活性,TNF-α、IL-6、IL-1β等炎癥因子濃度,多聚甲醛固定小鼠心肌組織,石蠟包埋切片,HE染色鏡下觀察小鼠心肌組織病理變化。結(jié)果:1.LPS腹腔注射后小鼠血漿BNP和CK-MB較對(duì)照組顯著升高,予二甲雙胍100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg分別腹腔注射干預(yù)后,各組小鼠血漿BNP和CK-MB均有明顯下降,與LPS組相比較p0.05,其中400mg/kg組下降最為明顯。2.HE染色鏡下觀察發(fā)現(xiàn)對(duì)照組心肌組織清晰均勻,排列整齊,無(wú)明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);腹腔注射LPS后,心肌組織出現(xiàn)明顯的形態(tài)學(xué)改變,心肌纖維排列紊亂,心肌細(xì)胞水腫、變性,心肌細(xì)胞間隙明顯增寬,組織間有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn);二甲雙胍預(yù)處理組上述組織病理學(xué)異常有明顯減輕,心肌內(nèi)浸潤(rùn)炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù)和心肌纖維變性數(shù)明顯下降,較LPS組有顯著性差異p0.05。3.LPS腹腔注射后小鼠心肌組織MPO活性較對(duì)照組顯著升高,予二甲雙胍400mg/kg腹腔注射干預(yù)后,小鼠心肌組織MPO活性有明顯下降,與LPS組相比較p0.05。4.LPS腹腔注射后小鼠心肌組織炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β濃度均較對(duì)照組顯著升高,予二甲雙胍400mg/kg腹腔注射干預(yù)后,小鼠心肌組織炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β濃度有明顯下降,與LPS組相比較p0.05。結(jié)論:1.二甲雙胍可以顯著降低膿毒癥小鼠血漿CK-MB及BNP濃度,并且明顯減輕心肌纖維排列紊亂,心肌細(xì)胞水腫、變性,心肌細(xì)胞間隙明顯增寬等病理改變,心肌內(nèi)浸潤(rùn)炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù)和心肌纖維變性數(shù)明顯下降。提示二甲雙胍可以減輕膿毒癥小鼠心肌功能損傷,并且與劑量呈相關(guān)性。2.二甲雙胍可以顯著降低膿毒癥小鼠血漿心肌組織MPO活性和TNF-α、IL-6、IL-1β等炎癥因子的濃度,提示二甲雙胍可以明顯減輕膿毒癥小鼠心肌炎癥反應(yīng),是其減輕膿毒癥心肌功能損傷的重要機(jī)制。第二部分:二甲雙胍減輕膿毒癥心肌炎癥損傷的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制目的:探討二甲雙胍是否是通過(guò)AMPK通路的調(diào)控實(shí)現(xiàn)其減輕膿毒癥小鼠心肌炎癥損傷的功能。方法:雄性BALB/c小鼠56只,隨機(jī)分為A(對(duì)照組)、B(二甲雙胍組)、C(AICAR組)組、D(膿毒癥組)、E(膿毒癥+AICAR組)、F(膿毒癥+二甲雙胍組)、G(膿毒癥+二甲雙胍+CC組)六組,每組8只。A組給與腹腔注射等量生理鹽水,B組給與二甲雙胍400mg/kg腹腔注射,C組給予二甲雙胍激活劑AICAR30mg/kg腹腔注射,D、E、F、G組均給與LPS 10mg/kg腹腔注射建立膿毒癥模型,并且E、F、G組在注射LPS半小時(shí)前分別給與AICAR30mg/kg、二甲雙胍400mg/kg和(CC15mg/kg+二甲雙胍400mg/kg)腹腔注射,建模18小時(shí)后處死小鼠。ELISA法檢測(cè)血漿CK-MB和BNP濃度,取心肌組織提取蛋白,檢測(cè)心肌組織MPO活性,TNF-α、IL-6、IL-1β等炎癥因子濃度。結(jié)果:1.單獨(dú)予二甲雙胍腹腔注射可以顯著提高小鼠心肌組織p-AMPK/AMPK比值,并且使用AMPK抑制劑CC后明顯下降,p0.05,提示二甲雙胍可以提高小鼠心肌組織AMPK活性,并且可以被AMPK抑制劑CC所阻斷。2.腹腔注射LPS可以顯著升高小鼠心肌組織p-AMPK/AMPK比值,p0.05。予二甲雙胍400mg/kg預(yù)干預(yù)后小鼠心肌組織p-AMPK/AMPK比值進(jìn)一步升高,相比LPS組有顯著差異,p0.05。加用AMPK抑制劑CC后膿毒癥+二甲雙胍+CC組小鼠p-AMPK/AMPK比值較膿毒癥+二甲雙胍組有所下降,p0.05。提示膿毒癥時(shí)小鼠心肌AMPK通路被激活,二甲雙胍可以進(jìn)一步激活A(yù)MPK通路,提高p-AMPK/AMPK比值,CC可以抑制這一效應(yīng)。3.二甲雙胍400mg/kg腹腔注射干預(yù)后,膿毒癥+二甲雙胍組小鼠血漿BNP和CK-MB均有明顯下降,與膿毒癥組相比較p0.05。而膿毒癥+二甲雙胍+CC組小鼠血漿BNP和CK-MB較膿毒癥+二甲雙胍組明顯升高,p0.05;并且與膿毒癥組小鼠比較無(wú)明顯差異性。4.二甲雙胍400mg/kg腹腔注射干預(yù)后,膿毒癥+二甲雙胍組小鼠心肌MPO活性和TNF-α濃度均有明顯下降,與膿毒癥組相比較p0.05。而膿毒癥+二甲雙胍+CC組小鼠心肌MPO活性和TNF-α濃度較膿毒癥+二甲雙胍組明顯升高,p0.05;并且與膿毒癥組小鼠比較無(wú)明顯差異性。5.Western blot顯示AICAR組小鼠心肌組織p-AMPK/AMPK比值較對(duì)照組明顯升高,p0.05,提示AMPK激活劑AICAR可以激活小鼠心肌組織AMPK通路。LPS+AICAR組小鼠心肌組織p-AMPK/AMPK比值較LPS組小鼠明顯升高,p0.05,提示AMPK激活劑AICAR可以進(jìn)一步激活膿毒癥小鼠心肌組織AMPK通路。6.LPS+AICAR組小鼠較LPS組小鼠心肌組織MPO活性、血漿CK-MB和BNP濃度均明顯下降,p0.05,提示AMPK激活劑AICAR顯著降低膿毒癥小鼠心肌炎癥功能損傷。結(jié)論:1.二甲雙胍可以激活小鼠心肌組織AMPK通路,提高p-AMPK/AMPK比值。膿毒癥時(shí)小鼠心肌AMPK通路被激活,二甲雙胍可以進(jìn)一步激活A(yù)MPK通路,提高p-AMPK/AMPK比值,CC可以抑制這一效應(yīng)。2.二甲雙胍腹腔注射可以顯著降低膿毒癥小鼠血漿CK-MB和BNP濃度,顯著降低小鼠心肌組織MPO活性和炎癥因子濃度,這一效應(yīng)可以被AMPK抑制劑CC所抑制。3.AMPK激活劑AICAR腹腔注射可以顯著提升小鼠心肌組織p-AMPK/AMPK比值,并且可以進(jìn)一步提高膿毒癥小鼠心肌組織p-AMPK/AMPK比值,并相應(yīng)的可以減輕膿毒癥小鼠心肌組織MPO活性、血漿CK-MB和BNP濃度,說(shuō)明激活A(yù)MPK通路可以有效的減輕膿毒癥小鼠心肌炎癥損傷。4.綜上實(shí)驗(yàn)結(jié)果,證實(shí)二甲雙胍是通過(guò)AMPK通路實(shí)現(xiàn)減輕膿毒癥小鼠心肌炎癥損傷的效應(yīng)的。
[Abstract]:In the first part , the protective effect of metformin on endotoxin - induced inflammatory injury in myocardium was studied . The results showed that the levels of plasma BNP and CK - MB were significantly increased in group A , group B and group C . Compared with the control group , the levels of inflammatory cytokines TNF - 偽 , IL - 6 and IL - 1尾 in the myocardium of mice were significantly lower than those in the control group . The levels of p - AMPK / AMPK in myocardium of mice were significantly higher than those in the septic group and the levels of TNF - 偽 , IL - 6 , IL - 1尾 and so on were significantly higher than those in the septic group . The results showed that metformin was an effective way to reduce the myocardial inflammatory injury in septic mice .

【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R459.7

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本文編號(hào)：1368400