本文關(guān)鍵詞：靶向相變型載HCPT液態(tài)氟碳脂質(zhì)納米造影劑多模態(tài)顯像與治療研究　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：第一部分靶向相變型載HCPT液態(tài)氟碳脂質(zhì)納米造影劑FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid的制備及性能檢測(cè)目的 制備一種葉酸修飾的靶向相變型載HCPT液態(tài)氟碳脂質(zhì)納米粒(FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid),檢測(cè)其粒徑電位、穩(wěn)定性、相變特性、藥物含量、藥物釋放及體內(nèi)外靶向性等。方法 采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)-超聲法制備靶向相變型載HCPT液態(tài)氟碳脂質(zhì)納米粒FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid,對(duì)其形態(tài)大小特征、粒徑電位、鐵含量進(jìn)行檢測(cè)。并于制備后不同時(shí)間點(diǎn)(0.5 h,1 h,2 h,6 h,12 h,24 h,36 h,48 h,60h,72 h,96 h)測(cè)量納米粒粒徑,光鏡下觀察不同溫度下(40°C、45°C、50°C和55°C)納米粒的相變情況,用高效液相色譜法檢測(cè)FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid內(nèi)的藥物含量、體外藥物釋放及低強(qiáng)度聚焦超聲LIFU促進(jìn)藥物釋放。使用細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證納米粒FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid的靶向性能。結(jié)果 制備的FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid納米乳呈棕褐色,光鏡及熒光顯微鏡下納米粒呈球形或點(diǎn)狀,透射電鏡顯示細(xì)點(diǎn)狀Fe3O4顆粒均勻分布在殼層內(nèi)。Malvern激光粒徑儀檢測(cè)出FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid粒徑321±67nm,Zeta電位為-50m V。原子吸收光譜法測(cè)得不同濃度的FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid納米乳(5μg m L-1,10μg m L-1,20μg m L-1,40μg m L-1,80μg m L-1,160μg m L-1,320μg m L-1,640μg m L-1,1280μg m L-1和2560μg m L-1)中的Fe濃度分別為(0.43±0.08μg m L-1,0.71±0.09μg m L-1,1.63±0.31μg m L-1,3.52±1.21μg m L-1,7.60±1.35μg m L-1,15.05±3.16μg m L-1,29.12±4.05μg m L-1,53.32±5.25μg m L-1,117.65±6.36μg m L-1和236.37±11.97μg m L-1)。在4°C條件下,納米粒粒徑在48小時(shí)內(nèi)無(wú)明顯增大,48小時(shí)后粒徑緩慢增大。40°C時(shí)納米�；颈３址�(wěn)定,45°C時(shí)部分納米粒發(fā)生液氣相變,體積增大,50°C時(shí)相變納米粒數(shù)量明顯增多,體積增大明顯,55°C時(shí)僅存少量相變納米粒。FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid乳液藥物包封率為60.51%±2.33%,載藥量為8.33%±0.57%。體外藥物釋放試驗(yàn)顯示,FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid乳液內(nèi)的藥物HCPT呈緩慢釋放,24小時(shí)釋放約25%,48小時(shí)釋放約60%,60小時(shí)后藥物釋放趨平緩。隨著LIFU強(qiáng)度的增加,藥物釋放量亦隨著增加。結(jié)論 本實(shí)驗(yàn)成功的制備了造影劑FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid,形態(tài)規(guī)則,大小較均勻,性質(zhì)穩(wěn)定,具有較好的液氣相變的能力,能夠在LIFU作用下釋放藥物。第二部分FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid造影劑增強(qiáng)超聲、光聲及磁共振顯像研究目的 觀察FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid造影劑體外增強(qiáng)超聲、光聲和磁共振顯像的效果,研究其作為多模態(tài)造影劑的可行性;體內(nèi)實(shí)驗(yàn)了解FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid造影劑增強(qiáng)超聲、光聲和磁共振顯像的能力。方法 本部分實(shí)驗(yàn)分為三節(jié)分別進(jìn)行。在第一節(jié)中首先使用加熱的方法,了解在不同溫度條件下納米乳增強(qiáng)超聲顯影的效果,并于顯微鏡下觀察加熱后納米粒相變情況。體外及體內(nèi)聲致相變實(shí)驗(yàn)中,LFIU儀使用不同聲強(qiáng)度(0.8W/cm2、1.6W/cm2、2.4 W/cm2、3.2 W/cm2)及不同時(shí)間(1min、2min、3min、4min),觀察LIFU輻照后納米乳于體外及體內(nèi)增強(qiáng)超聲顯影的效果,了解導(dǎo)致納米粒相變的最佳LIFU輻照強(qiáng)度及時(shí)間。在第二節(jié)里,將Fe3O4溶液、FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid乳液及FA/PFP/HCPT@Lipid乳液分別行光聲顯影實(shí)驗(yàn),了解Fe3O4增強(qiáng)光聲信號(hào)的效果。并用不同濃度FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid行光聲顯影,了解光聲信號(hào)強(qiáng)度的變化。在細(xì)胞光聲實(shí)驗(yàn)中,SKOV3細(xì)胞與FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid納米粒孵育不同時(shí)間后觀察細(xì)胞光聲信號(hào)強(qiáng)度。體內(nèi)光聲實(shí)驗(yàn)中,經(jīng)裸鼠尾靜脈分別注射FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid乳液、Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid乳液和不含F(xiàn)e3O4的造影劑FA/PFP/HCPT@Lipid乳液,于注射之后0.5 h、1 h、6h分別行光聲顯像。在第三節(jié)里,將FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid納米乳配置成不同的濃度,觀察磁共振顯影的差異。體內(nèi)磁共振實(shí)驗(yàn)中,經(jīng)裸鼠尾靜脈分別注射FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid乳液、Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid乳液和不含F(xiàn)e3O4的造影劑FA/PFP/HCPT@Lipid乳液,于注射之后0.5 h、1 h、6 h分別行磁共振顯像。結(jié)果 在第一節(jié)中,諧波超聲模式下,水浴鍋溫度為40°C時(shí),水囊內(nèi)無(wú)增強(qiáng)。45°C和50°C時(shí),水囊內(nèi)顯影明顯增強(qiáng)。至55°C時(shí),水囊內(nèi)回聲增強(qiáng)又相對(duì)減弱。于45°C和50°C水囊吸出的乳液在光鏡下可見到較多氣泡產(chǎn)生。體外LIFU聲致相變實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,2.4W/cm2、2分鐘有最佳的聲致相變效果,此時(shí)顯微鏡下相變氣泡較多。體內(nèi)相變實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,3.2W/cm2、2分鐘的LIFU條件具有最佳的體內(nèi)相變效果。在第二節(jié)里,Fe3O4和FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid乳液顯示較強(qiáng)的光聲信號(hào),而FA/PFP/HCPT@Lipid乳液幾乎不顯示光聲增強(qiáng)信號(hào)。FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid的光聲信號(hào)隨著Fe3O4濃度的升高而逐漸增強(qiáng)。細(xì)胞光聲實(shí)驗(yàn)中,隨著納米粒與SKOV3細(xì)胞孵育時(shí)間的延長(zhǎng),光聲信號(hào)明顯增加。體內(nèi)光聲實(shí)驗(yàn)中,注射FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid乳液的裸鼠其腫瘤于注射后1小時(shí)顯示明顯光聲信號(hào),腫瘤局部光聲信號(hào)強(qiáng)度值明顯高于另外兩組(P0.05)。在第三節(jié)的體外實(shí)驗(yàn)中,FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid呈現(xiàn)磁共振負(fù)性顯影,且隨著裝載的Fe3O4濃度的增加,MR信號(hào)強(qiáng)度逐漸下降。體內(nèi)磁共振實(shí)驗(yàn)中,注射FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid的裸鼠其腫瘤于注射后1小時(shí)顯示明顯磁共振負(fù)性顯影信號(hào),腫瘤局部磁共振信號(hào)強(qiáng)度值明顯低于另外兩組(P0.05)。結(jié)論 FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid造影劑能夠于體內(nèi)外增強(qiáng)超聲、光聲和磁共振顯像,具備成為多模態(tài)造影劑的潛能。第三部分FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid造影劑靶向治療卵巢癌實(shí)驗(yàn)研究目的 了解FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid造影劑及藥物HCPT在裸鼠體內(nèi)的分布情況,以及FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid造影劑對(duì)SKOV3卵巢癌的靶向治療效果。方法 造影劑及藥物體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn):將30只荷瘤裸鼠隨機(jī)分為兩組,分別經(jīng)尾靜脈注射攜熒光Di I的造影劑FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid乳液和Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid乳液,于注射后0.5h,1h,6h,12h,24h脫頸處死裸鼠,瘤塊行超薄切片,顯微鏡下觀察切片內(nèi)造影劑分布情況。取50只荷瘤裸鼠隨機(jī)分為兩組,分別經(jīng)尾靜脈注射HCPT注射液和FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid納米乳,于注射后0.5h,1h,6h,12h,24h眼球取血處死裸鼠,檢測(cè)血清內(nèi)藥物濃度分布,同時(shí)取裸鼠重要臟器及腫瘤組織勻漿后行高效液相色譜法檢測(cè)各組織內(nèi)藥物濃度。另外檢測(cè)LIFU作用后腫瘤局部藥物濃度分布。靶向治療實(shí)驗(yàn):將30只裸鼠隨機(jī)分為6組,分別給予不同的處理:FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid+LIFU組;FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid注射液組;HCPT組;FA/Fe3O4/PFP@Lipid+LIFU組;Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid注射組;生理鹽水組。治療后測(cè)量腫瘤大小,計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)曲線及抑瘤率。行免疫組織化學(xué)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡。結(jié)果 造影劑及藥物體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn):靶向組腫瘤超薄切片各時(shí)間點(diǎn)均可見熒光,1小時(shí)熒光最明顯。而非靶向組未見熒光顯示。在每一個(gè)檢測(cè)時(shí)間點(diǎn),FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid納米乳組裸鼠的血藥濃度均高于HCPT注射液組。FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid注射液組的腫瘤組織藥物濃度顯著高于HCPT注射組(P0.05),而FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid+LIFU組的腫瘤組織藥物濃度顯著高于FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid納米乳注射液組(P0.05)。靶向治療實(shí)驗(yàn):FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid+LIFU組裸鼠腫瘤生長(zhǎng)指數(shù)最低,抑瘤率最高。免疫組化結(jié)果顯示,FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid+LIFU組的增殖指數(shù)最低(p0.05),凋亡指數(shù)最高(p0.05)。結(jié)論 納米粒FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid可以延緩藥物HCPT在體內(nèi)的存留時(shí)間,靶向結(jié)合于腫瘤細(xì)胞的納米粒,在低強(qiáng)度聚焦超聲LIFU的作用下,對(duì)裸鼠卵巢癌有良好的治療效果,有望對(duì)腫瘤的治療開辟新的途徑。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R445

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本文編號(hào)：1354427