本文關(guān)鍵詞：烏司他丁對(duì)膿毒癥患者的治療作用及其機(jī)制的研究

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【摘要】：研究背景膿毒癥是有多種感染因素引發(fā)的,以全身性炎癥反應(yīng)為主的一類(lèi)嚴(yán)重綜合征。膿毒癥、膿毒癥休克是導(dǎo)致危重癥病人死亡的一個(gè)重要因素。近幾年對(duì)膿毒癥的生理病理機(jī)制,以及臨床的診斷治療都有很多相關(guān)的探討。然而膿毒癥的患病率和病死率仍然是非常高。大量文獻(xiàn)報(bào)道氧化應(yīng)激對(duì)膿毒癥的發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程存在重大影響。烏司他丁(UTI)是一類(lèi)蛋白酶抑制劑(尿液中提取),可以抑制多種蛋白和水解酶的活性,具有抗氧化、抗炎、抗凋亡及信號(hào)調(diào)節(jié)作用。前期臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)這些藥物能改善膿毒癥病人的治療效果,但其作用尚不明確。目的評(píng)估UTI對(duì)膿毒癥病患的治療效果,并通過(guò)檢測(cè)受試者血清中氧化物質(zhì)的濃度的改變來(lái)研究其中的作用機(jī)制,在細(xì)胞水平進(jìn)一步探究UTI對(duì)脂多糖內(nèi)毒素(LPS)誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)的保護(hù)作用及其分子作用原理。研究方法(1)將40例符合膿毒癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)的納入者,嚴(yán)格按照隨機(jī)化分配原則歸為對(duì)照組(n=20),烏司他丁組(n=20)。并選取10名正常體檢者,為本次實(shí)驗(yàn)的正常組的納入者。對(duì)照組給予的治療嚴(yán)格按照膿毒癥的診療規(guī)范,烏司他丁組除了采用對(duì)照組的基礎(chǔ)治療外另給予靜脈注射烏司他丁10萬(wàn)U q8h,連用7天。在治療前和治療后的第4、8天抽取靜脈血,用來(lái)檢測(cè)血清中的氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA),以及用來(lái)檢測(cè)超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)等抗氧化物質(zhì)的變化。正常組在體檢時(shí)抽得靜脈血,檢測(cè)結(jié)果作為本實(shí)驗(yàn)的正常組。常規(guī)監(jiān)測(cè)患者的T(體溫)、RR(心率)、PR(呼吸頻率)、WBC(白細(xì)胞計(jì)數(shù)),并統(tǒng)計(jì)患者機(jī)械通氣的時(shí)間,在ICU的住院時(shí)間,以及患者的28d生存率。(2)在臨床研究的基礎(chǔ)上,利用脂多糖誘導(dǎo)體外人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human Umbilical VeinEndothlial Cells, HUVECs),構(gòu)建氧化應(yīng)激損傷模型,根據(jù)脂多糖的濃度梯度實(shí)驗(yàn)和時(shí)間梯度實(shí)驗(yàn),分別選擇10μg/ml的藥物濃度,24h的處理時(shí)間定為制作HUVEC氧化應(yīng)激模型的實(shí)驗(yàn)濃度和實(shí)驗(yàn)時(shí)間,針對(duì)烏司他丁保護(hù)作用的濃度梯度實(shí)驗(yàn)選取100U/ml的濃度當(dāng)作實(shí)驗(yàn)的有效作用濃度。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組、UTI組、LPS組、UTI+LPS組、SP600125+LPS組,UTI+Y60025+LPS組。細(xì)胞的存活率的檢測(cè)選擇一種常用的方法(MTT方法), MDA、GSH-Px試劑盒檢測(cè)MDA、GSH-Px的產(chǎn)生,用Western blot的方法檢測(cè)SOD、JNK、p-JNK、 c-Jun、p-c-Jun等蛋白的表達(dá),進(jìn)一步探討UTI對(duì)LPS誘導(dǎo)的HUVECs損傷是否存在有效的保護(hù)作用。應(yīng)用LPS誘發(fā)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷,探討UTI通過(guò)JNK/c-Jun信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路來(lái)對(duì)抗氧化應(yīng)激。結(jié)果(1)烏司他丁組患者的RR(心率)、PR(呼吸頻率)、T(體溫)、WBC(白細(xì)胞計(jì)數(shù))、PCT(降鈣素原)、CRP(C反應(yīng)蛋白)、Lac(乳酸水平)治療后改善情況均優(yōu)于對(duì)照組。兩組患者治療前血清中的MDA的含量與正常組相比較明顯升高,而血清中的SOD、GSH-Px與正常組相比較明顯降低。UTI組患者治療后較治療前血清中的MDA有所降低,治療后第8天與治療前差異存在顯著性(p0.05)。SOD較治療前有所升高的,治療后第8天與治療前差異存在顯著性(p0.05)。GSH-Px較治療前有所升高的,治療后第4天和第8天與治療前差異存在顯著性(p0.05)。而對(duì)照組治療后各過(guò)氧化物指標(biāo)水平無(wú)明顯變化,治療前后差異無(wú)顯著性。治療前,烏司他丁組和對(duì)照組各指標(biāo)差異無(wú)顯著性(p0.05)。開(kāi)始治療以后第4天,烏司他丁組和對(duì)照組各指標(biāo)有差異,但不存在統(tǒng)計(jì)意義(p0.05)。治療開(kāi)始后第8天兩組病人的各指標(biāo)之間差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。UTI組機(jī)械通氣時(shí)間、ICU住院天數(shù)少于對(duì)照組,而28 d生存率出現(xiàn)相反趨勢(shì)。(2)在細(xì)胞水平,我們發(fā)現(xiàn)LPS刺激后,細(xì)胞內(nèi)的MDA濃度升高,而(GSH Px活力降低,SOD蛋白表達(dá)的水平降低,細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生明顯增多。UTI處理后可以明顯逆轉(zhuǎn)LPS誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的這種效應(yīng)。UTI可以抑制LPS對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞刺激引起的JNK/c-Jun的磷酸化。用JNK通路抑制劑SP600125以后,LPS的氧化應(yīng)激作用明顯減弱,JNK、c-Jun的蛋白的磷酸化水平減弱,蛋白的表達(dá)降低。結(jié)論(1)UTI能夠改善膿毒癥患者的病情,降低患者機(jī)械通氣的時(shí)間,縮短病患在ICU的住院天數(shù),還能夠提高患者28d生存率。作用機(jī)制與降低氧化應(yīng)激損傷有關(guān)。(2) 我們的研究結(jié)果還顯示,烏司他丁可以明顯抑制脂多糖對(duì)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷通過(guò)抑制JNK/c-Jun通路的磷酸化。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R459.7

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