本文關鍵詞：奇異變形桿菌聚磷酸鹽激酶多克隆抗體的制備和鑒定

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【摘要】：目的表達、純化奇異變形桿菌聚磷酸鹽激酶(PPK)蛋白,制備PPK多克隆抗體。方法利用分子生物學軟件分析奇異變形桿菌PPK的抗原性、疏水性等參數(shù),選取N端較保守的309個氨基酸,并對其基因序列進行密碼子優(yōu)化以利于原核表達。合成新的基因序列后插入pET28b(+)質粒,轉化入轉化宿主菌BL21(DE3),誘導、表達融合蛋白。通過鎳瓊脂糖親和層析技術,將獲得的融合蛋白進行純化。以純化的蛋白作為免疫原并結合使用佐劑,背部多點注射新西蘭大白兔,ELISA檢測兔血清效價,Western Blotting驗證抗體特異性。結果成功構建了奇異變形桿菌PPK的原核表達重組質粒,可在0.5 mmol/L IPTG、37℃條件下獲得較好的誘導、表達;利用鎳柱純化后的PPK蛋白與免疫佐劑一起,采用背部多點接種新西蘭大白兔,制備了效價高的兔抗血清。ELISA檢測血清效價達到1∶512 000,Western Blotting對ppk基因缺失株及其野生株進行驗證顯示抗體特異性良好。結論利用pET28b(+)載體可構建奇異變形桿菌PPK的原核表達重組質粒,表達、純化后的蛋白與佐劑共同免疫新西蘭大白兔,可獲得效價高、特異性良好的兔多克隆抗體血清,為奇異變形桿菌聚磷酸鹽激酶的檢測以及深入研究PPK在奇異變形桿菌致病中的作用奠定了基礎。
【作者單位】： 廣州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院檢驗科;廣州醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院血液科;南方醫(yī)科大學公共衛(wèi)生學院//廣東省熱帶病研究重點實驗室 微生物學系;
【基金】：國家自然科學基金(81670637) 廣州市屬高�？萍柬椖�(1201430488) 廣州醫(yī)科大學青年項目(2014A06)~~
【分類號】：R446.6
【正文快照】： 奇異變形桿菌為條件致病菌,可引起尿路感染、食物中毒、肺炎等多種疾病。其中以泌尿系統(tǒng)感染最常見,并可導致結石的出現(xiàn)。最近有調查表明,奇異變形桿菌檢出率在尿路感染患者分離的革蘭陰性桿菌中排在第4位[1]。我們課題組則發(fā)現(xiàn),奇異變形桿菌臨床分離株超廣譜β-內酰胺酶陽性

【相似文獻】

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本文編號：1237075