本文關鍵詞：2010-2015年臨床分離艱難梭菌產(chǎn)毒株的分子流行病學、耐藥狀況以及對利福霉素耐藥機制研究

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【摘要】：目的:21世紀以來,加拿大、美國和歐洲等世界多國相繼暴發(fā)醫(yī)院獲得性腹瀉,死亡率及復發(fā)率高,罪魁禍首便是艱難梭菌。有報道稱,15-25%的抗生素相關性腹瀉和超過95%的偽膜性腸炎與艱難梭菌有關。毒素A(TcdA)和毒素B(TcdB)為該菌的兩個主要致病因子。臨床上廣泛應用的頭孢菌素和氟喹諾酮等抗生素可破壞腸道菌群平衡,使得產(chǎn)毒艱難梭菌過度繁殖,與艱難梭菌感染(CDI)最為相關,其他危險因素包括高齡、化療藥物的使用、炎癥性腸病、器官移植、慢性腎臟疾病、免疫低下和其他嚴重的合并疾病等。該菌形成的芽孢可抵抗多種理化因素,包括醫(yī)院常用的酒精類消毒劑,作為傳播媒介,可在社區(qū)及醫(yī)院內(nèi)引起水平傳播。艱難梭菌在石家莊地區(qū)住院腹瀉患者中的流行情況尚需進一步積累資料,本研究通過收集近年來本地區(qū)成人住院腹瀉患者糞便并予以分離艱難梭菌,旨在了解艱難梭菌的流行及耐藥情況,為防控院內(nèi)CDI提供基線資料;另外,本研究將試探討艱難梭菌對利福霉素的耐藥機制。方法:1 2010年7月-2011年12月、2012年8月-2013年12月和2015年1月-9月期間,收集河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院、河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院、河北醫(yī)科大學第一醫(yī)院、河北省人民醫(yī)院成人住院腹瀉患者糞便共1013份。2采用厭氧富集芽孢法針對性培養(yǎng)糞便中的艱難梭菌,根據(jù)其菌落及鏡下形態(tài),特殊氣味和生化反應進行確認。3提取艱難梭菌基因組,多重PCR擴增毒素基因確定其毒素型,擴增16S-23S rDNA基因間隔區(qū)并電泳,根據(jù)條帶位置不同確定其PCR核糖體型別。4對分離得到的產(chǎn)毒艱難梭菌采用CLSI推薦的瓊脂稀釋法進行藥敏試驗,共涉及到14種抗生素:左氧氟沙星、環(huán)丙沙星、頭孢他啶、頭孢曲松、美羅培南、克林霉素、紅霉素、四環(huán)素、氯霉素、利福平、利福昔明、甲硝唑、萬古霉素和非達霉素。5從本實驗室艱難梭菌菌庫中選取101株艱難梭菌,其中利福平耐藥69株,利福平中介4株,利福平敏感28株。提取基因組后進行rpoB部分基因擴增并測序,與艱難梭菌630菌株rpoB基因比對后確定突變位置。結果:1 1013份糞便標本共分離出產(chǎn)毒艱難梭菌172株,陽性率為17.0%,其中168株tcdA+tcdB+cdtA-cdtB-,4株tcdA+tcdB+cdtA+cdtB+,未發(fā)現(xiàn)tcdA-tcdB+株。172株產(chǎn)毒艱難梭菌共分為34個PCR核糖體型別,其中HB6型最多,為43株,其次為HB5型30株,HB1型28株,三者共占58.7%(101/172),為本地區(qū)的優(yōu)勢型別;2本實驗測定了14種抗生素對172株艱難梭菌的最小抑菌濃度(MIC),結果顯示,所有菌株對甲硝唑、萬古霉素和非達霉素均高度敏感,對環(huán)丙沙星、克林霉素、紅霉素、左氧氟沙星和四環(huán)素耐藥率較高,分別為98.8%,94.2%,77.3%,75%和35.5%。同為第三代喹諾酮類抗生素的左氧氟沙星,艱難梭菌對其敏感性稍高于環(huán)丙沙星;同樣,所有菌株對頭孢他啶耐藥,然而對頭孢曲松的耐藥率僅為26.7%。此外,該172株菌對利福平、利福昔明、氯霉素和美羅培南耐藥率較低,分別為14.0%,14.0%,7.0%和2.3%;3將PCR核糖體型別與細菌耐藥譜聯(lián)合在一起分析時發(fā)現(xiàn),主要型別HB5、HB6和HB1型對抗生素的耐藥率較其他非流行型別高,在紅霉素組中,此耐藥率差異有統(tǒng)計學意義。HB5型對除頭孢他啶、甲硝唑、萬古霉素和非達霉素之外的其他十種抗生素的耐藥率均為各型別之首,在頭孢曲松、四環(huán)素、利福平和利福昔明中,該耐藥率差別有統(tǒng)計學意義。而且,對美羅培南耐藥的4株艱難梭菌的PCR核糖體型別均為HB5型;對利福平耐藥的24株菌中,22株為HB5型,僅有2株為其他型別(P0.001);4 101株艱難梭菌rpoB部分基因測序結果顯示,利福平耐藥株有rpoB突變,敏感株無突變。4株中介的艱難梭菌中2株有氨基酸改變,分別為D492Y,H502N。H502NR505K、R505KI548M為本地區(qū)耐藥株最常見的RpoB突變。分別出現(xiàn)在耐藥和中介菌株中的H502DD590V,D492Y為本研究新發(fā)現(xiàn)的與利福霉素耐藥有關的突變。結論:1 172株產(chǎn)毒艱難梭菌以tcdA+tcdB+cdtA-cdtB-為主,占97.7%,tcdA+tcdB+cdtA+cdtB+僅4株。HB6,HB5,HB1型為本地主要流行型別。分離菌株對氟喹諾酮類、頭孢菌素類和克林霉素耐藥率很高,應警惕這三類抗生素應用時誘發(fā)CDI;全部菌株對甲硝唑、萬古霉素和非達霉素敏感,可作為治療用藥;對利福平和利福昔明的耐藥率較低,可作為治療復發(fā)性CDI的備選用藥,但應警惕HB5型別引起的感染,同時謹防耐藥的發(fā)生。HB5為本地區(qū)耐多藥型別,且與利福平耐藥株的流行有關。2艱難梭菌對利福霉素耐藥與rpoB突變有關。3艱難梭菌RpoB D492Y,H502DD590V為本研究新發(fā)現(xiàn)的與利福霉素耐藥相關的突變。
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R446.5

【參考文獻】

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1 黃海輝;吳n\;朱德妹;吳菊芳;王明貴;張嬰元;;臨床分離艱難梭菌188株的耐藥性研究[J];中國感染與化療雜志;2011年01期

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本文編號：1190890