本文關(guān)鍵詞：透析法結(jié)合超濾法去除冷凍復(fù)溫紅細胞保護劑的方法研究

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【摘要】：為了達到紅細胞長期低溫保存的目的,需要添加低溫保護劑,但在臨床使用時,需要將保護劑去除到人體可接受的范圍內(nèi)方可輸注。目前臨床上去除低溫保護劑的常規(guī)方法是離心法,并且使用的儀器主要是進口儀器(比如美國全自動紅細胞處理儀ACP215型),但是離心過程中的機械應(yīng)力和管部堆積力會對細胞造成損傷。因此,本研究將在前期課題組基礎(chǔ)上應(yīng)用透析法結(jié)合超濾法的原理搭建洗滌體系、優(yōu)化洗滌方案并對洗滌效果進行研究。目的：為了實現(xiàn)透析法結(jié)合超濾法去除冷凍復(fù)溫紅細胞保護劑體系搭建,洗滌條件的優(yōu)化以及最終對冷凍復(fù)溫紅細胞進行洗滌。本論文將從三個方面進行研究,首先在在前期課題組基礎(chǔ)上應(yīng)用透析法結(jié)合超濾法的原理搭建洗滌體系,洗滌過程中,為了簡單快速的了解甘油濃度變化情況,研究了滲透壓法檢測高甘油濃度冰凍紅細胞中甘油濃度的可行性；其次因為滲透壓的急劇變化會造成紅細胞的嚴重損傷,為了優(yōu)化洗滌體系的洗滌條件,研究了不同滲透壓對人紅細胞體積和溶血的影響；最后根據(jù)優(yōu)化的實驗方案洗滌冷凍復(fù)溫的紅細胞,對洗滌效果進行研究,并同ACP215的洗滌效果進行比較。方法：洗滌過程中,為了得到滲透壓和甘油濃度的相關(guān)性,用氯化鈉(NaCl)、甘油(C3H8O3)和全血分別制備成不同甘油濃度的鹽水溶液以及紅細胞溶液,模擬冷凍復(fù)溫紅細胞洗滌過程中的不同狀態(tài),用冰點滲透壓儀測定其總滲透壓值,進行線性回歸處理與相關(guān)系數(shù)的計算,并進行溶血干擾試驗及重復(fù)性試驗;同時為了得到不同滲透壓下人紅細胞體積和溶血的關(guān)系,以梯度濃度的氯化鈉溶液提供不同的滲透壓環(huán)境,加入全血后,離心法測紅細胞壓積(Hct),顯微鏡下記錄紅細胞形態(tài)和直徑,并用冰點滲透壓儀測定上清的總滲透壓,測定上清血紅蛋白(Hb)含量,經(jīng)計算得到不同滲透壓下的紅細胞體積及溶血率差異；最后通過調(diào)整洗滌液流速和血液流速,以優(yōu)化的實驗方案洗滌冷凍復(fù)溫的紅細胞,對洗滌效果進行研究,并同ACP215的洗滌效果進行比較。結(jié)果：1、在低滲環(huán)境下,當(dāng)滲透壓為148、154、158、171、191和236mOsm/kg時,溶血率分別為(87.3±4.3)%、(79.4±6.7)%、(68.5±6.6)%、(30.2±2.8)%、(6.6±1.0)%和(2.5±0.8)%,紅細胞平均體積(MCV)分別為(184.1±32.7)fL、(216.4±62.9)fL、(185.2±27.3)fL、(151.8±6.8)fL、(122.4±3.7)fL和(109.3±2.4)fL；在高滲環(huán)境下,當(dāng)滲透壓為810、1073、2460和3033mOsm/kg時,溶血率分別為(2.1±0.7)%、(2.5±0.6)%、(25.2±8.7)%和(55.8±13.8)%,MCV分別為(58.1±1.9)tL,(60.6±2.8) fL、(74.5±4.8)fL和(80.1±13.9)fL；在等滲環(huán)境,溶血率為(1.9±0.8)%,MCV為(94.9±1.08)fL。儲存一周的血液和儲存五周的血液總體的變化趨勢相同,只是變化程度略有差異。2、當(dāng)溶液中僅存在甘油和NaCl兩種成分時,甘油濃度與總滲透壓之間有良好的線性關(guān)系,R2=0.9965�；厥章试�90%-110%之間。重復(fù)性和穩(wěn)定性的變異系數(shù)小于1%。測定不同甘油濃度的血液樣本時發(fā)現(xiàn),甘油濃度與總滲透壓間的線性關(guān)系良好,y=15.253x+219.93,R2=0.9981,回收率較高。重復(fù)性的變異系數(shù)小于2%。干擾實驗結(jié)果表明在游離血紅蛋白為(1.71～15.16)g/L時,總滲透壓值相差不大。血液混懸液的總滲透壓值與其上清液的總滲透壓值結(jié)果一致,經(jīng)Wilcoxon符號秩檢驗分析p=0.156,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。3、洗滌液和血液流速增加后,滲透壓隨時間變化的曲線斜率增大,溶液滲透壓能更快的下降,洗滌效率更佳。冰凍復(fù)溫紅細胞洗滌后發(fā)現(xiàn)透析法結(jié)合超濾法去除冷凍復(fù)溫的冰凍紅細胞保護劑之后,其中紅細胞計數(shù)回收率為(92.33±5.87)%、血液滲透壓為(291±1.77)Osm/kg,上清游離血紅蛋白為(0.74±0.13)g/L,甘油濃度為(0.24±0.12)g/L,均可達到國家標準。并且同ACP215的方法比較發(fā)現(xiàn),紅細胞計數(shù)回收率、甘油濃度、上清游離血紅蛋白均有統(tǒng)計學(xué)差異,透析法結(jié)合超濾法在甘油濃度和紅細胞計數(shù)回收率上優(yōu)于ACP215,但是上清游離血紅蛋白含量高于ACP215。結(jié)論：1、滲透壓從低滲到高滲變化過程中,紅細胞的體積逐漸減小,溶血率先降低后升高,為了使細胞回收率80%,紅細胞的體積變化需小于1.5倍原體積,大于0.68倍原體積。為了使細胞回收率90%,紅細胞體積變化需小十1.4倍原體積,大于0.68倍原體積。2、在甘油濃度較高的情況下,可以采用測定其總滲透壓的方式了解甘油濃度,這種方法簡單,快捷,樣本用量少,試劑消耗少,少量的血紅蛋白對其干擾作用較小。3、在前期課題組基礎(chǔ)上應(yīng)用透析法結(jié)合超濾法的原理搭建洗滌體系,并對洗滌液和血液流速優(yōu)化調(diào)整后,透析法結(jié)合超濾法是一種可行的洗滌方式,在甘油濃度和紅細胞計數(shù)回收率上優(yōu)于ACP215,但是上清游離血紅蛋白含量高于ACP215。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R457.1

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本文編號：1186797