本文關(guān)鍵詞：烏司他丁對膿毒癥大鼠Treg,Th17細胞的調(diào)節(jié)作用及其意義

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【摘要】：膿毒癥(Sepsis)是臨床上多種嚴重疾病的并發(fā)癥以及共同轉(zhuǎn)歸,同時還可以導(dǎo)致更為嚴重,死亡率更高的膿毒癥性休克并最終導(dǎo)致患者死亡。雖然早期液體復(fù)蘇和使用抗生素對于患者的救治起到了令人肯定的作用,但是膿毒癥的生存率仍不理想。究其原因,感染的不斷進展與惡化是膿毒癥患者死亡的主要推動力量,尤其是對那些已經(jīng)針對性的使用抗生素但病情仍進行性進展的患者來說,感染情況下機體免疫狀態(tài)的研究就顯得尤為重要。機體的免疫系統(tǒng)包括B細胞,T細胞等炎癥細胞。輔助性T細胞1(Th1),輔助性T細胞2(Th2)是傳統(tǒng)的T淋巴細胞亞群,它們的平衡狀態(tài)直接影響著機體的免疫功能�，F(xiàn)在,人們發(fā)現(xiàn)了另外兩類新的輔助性T細胞亞群,即輔助性T細胞17(Th17)和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)。Th17和Treg細胞都來源于初始T細胞,兩者的功能和分化過程相互聯(lián)系制約,是對Th1/Th2免疫平衡理論的重要補充。Treg細胞可以影響Th1/Th2/Th17細胞的極化,其特異性轉(zhuǎn)錄因子為叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子3(Foxp3),Th17細胞分泌的特異性細胞因子白介素17(IL-17),其特異性轉(zhuǎn)錄因子為維甲酸孤兒核受體(ROR?t)。烏司他丁做為一種由人體肝臟分泌的蛋白酶抑制劑,是從健康成年男性尿液中提取的一種糖蛋白,對多種酶具有抑制作用。同時,其還可以調(diào)節(jié)多種致炎/抗炎細胞因子表達水平,例如降低腫瘤壞死因子-α(tnf-α)和il-6的分泌水平,并且可以提高b細胞的數(shù)量及功能。但是其對膿毒癥中treg,th17這兩種重要的cd4+t細胞的調(diào)節(jié)作用研究尚少。本研究的目的在于采用clp法復(fù)制膿毒癥模型,用以探討膿毒癥大鼠體內(nèi)th17細胞與treg細胞的動態(tài)變化以及各自對整體免疫狀態(tài)的影響,同時探究烏司他丁對膿毒癥大鼠th17細胞與treg細胞表達的干預(yù)效果及對機體整體免疫狀態(tài)的影響。膿毒癥動物模型的制備選用經(jīng)典的盲腸結(jié)扎穿孔法(clp),選用健康雄性wistar大鼠32只,體重在250-300g之間,隨機分為4組:(1)空白對照組(normalgroup);(2)假手術(shù)組(shamgroup);(3)鹽水組(nsgroup):clp術(shù)后給予生理鹽水10ml/kg腹腔注射;(4)烏司他丁治療組(utigroup):clp術(shù)后給予烏司他丁10萬u/kg腹腔注射,濃度為1萬u/ml。各組術(shù)后在股部皮下注射生理鹽水30ml/kg,補充術(shù)中丟失量和生理需要量。在實驗結(jié)束之前,每只大鼠從腹主動脈取血5ml,然后處死,打開腹腔取出脾臟。利用流式細胞儀檢測觀察脾臟中th17,treg細胞占總淋巴細胞的比例及計算treg/th17的比值;采用rt-pcr檢測th17和treg細胞的特異性轉(zhuǎn)錄因子ror?t和foxp3的mrna的表達情況;利用elisa檢測血漿中il-17的分泌量;免疫組化法觀察脾臟cd4+t細胞和cd8+t細胞的表達。流式細胞術(shù)結(jié)果顯示:ns組treg細胞占全體淋巴細胞比例與normal,sham組相比有明顯升高(p均0.01),ns組th17細胞占全體淋巴細胞比例與normal,sham組相比有明顯升高(p均0.01)。uti組的treg細胞占全體淋巴細胞比例則相比于ns組有著顯著的下降(p0.01),uti組的th17細胞占全體淋巴細胞比例則相比于ns組有著顯著的下降(p0.01)。ns組treg/th17與normal,sham組treg/th17相比無明顯差別(p均0.05),uti組treg/th17則相比于normal,sham組均明顯降低,差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(p均0.05);rt-pcr檢測結(jié)果顯示,ns組foxp3的mrna表達高于normal組、sham組和uti組(p均0.01),而uti組foxp3mrna表達相比于normal,sham組無統(tǒng)計學(xué)意義(p均0.05)。ns組ror?t的mrna表達高于normal組、sham組和uti組(p均0.01),而uti組ror?t的mrna表達相比于normal,sham組無統(tǒng)計學(xué)意義(p均0.05);elisa結(jié)果顯示:ns組大鼠血漿中的il-17表達高于normal組、sham組和uti組(p均0.05),而uti組il-17表達相比于normal,sham組無統(tǒng)計學(xué)意義(p均0.05);免疫組化結(jié)果顯示:在200倍的光鏡下,ns組中代表cd4+t細胞的棕黃色顆粒相比于normal,sham組和uti組的棕黃色顆粒均減少;而normal,sham組和uti組各自的代表cd4+t細胞的棕黃色顆粒數(shù)量則無明顯差異。在200倍的光鏡下,normal,sham,ns組和uti組代表cd8+t細胞棕黃色顆粒數(shù)量均無明顯差異。綜上所述:膿毒癥使機體處于一種免疫紊亂的狀態(tài),不僅存在著以Th17細胞增高為代表的促炎反應(yīng)過程;同時存在著Treg細胞增多所介導(dǎo)的免疫抑制和CD4+T細胞的下降。烏司他丁通過其內(nèi)源性的抗炎作用,緩解過度的炎癥反應(yīng),減輕炎癥性損害,提高CD4+T細胞的數(shù)量,改善免疫紊亂的狀態(tài)。
【關(guān)鍵詞】：膿毒癥 輔助性T細胞17 CD_4~+CD_(25)~+調(diào)節(jié)性T細胞 烏司他丁注射液 免疫調(diào)節(jié)
【學(xué)位授予單位】：河北北方學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R459.7
【目錄】：

• 中文摘要5-9
• 英文摘要9-13
• 英文縮寫13-14
• 前言14-15
• 材料與方法15-27
• 結(jié)果27-29
• 附圖29-32
• 附表32-33
• 討論33-36
• 結(jié)論36
• 參考文獻36-42
• 綜述 調(diào)節(jié)性T細胞功能與膿毒癥免疫抑制的研究進展42-53
• 參考文獻48-53
• 致謝53-54
• 簡歷54

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 Kun Chen;Qiu-xiang Zhou;Hong-wei Shan;Wen-fang Li;Zhao-fen Lin;;Prognostic value of CD4~+CD25~+ Tregs as a valuable biomarker for patients with sepsis in ICU[J];World Journal of Emergency Medicine;2015年01期

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本文編號：1115416