本文關鍵詞：基于可變數目串聯重復序列的痰液結核分枝桿菌檢測方法建立及初步應用

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【摘要】：目的:傳統的核酸擴增(nucleic acid amplification,NAA)技術檢測結核分枝桿菌(Mycobacterial tuberculosis,MTB),因其簡單快捷、靈敏度高被臨床上大量使用,但該技術檢測結果假陽性率高的缺陷,是其應用于結核病臨床檢驗診斷的重大挑戰(zhàn)。本研究首次利用結核分枝桿菌散在分布單元——數目可變串聯重復基因序列(mycobacterial interspersed repetitive unit variable number of tandem repeat,MIRU-VNTR)的分布特點,采用PCR技術直接對痰液樣本進行基因擴增,以檢測痰液標本MTB并進行相關質量控制,通過特異度、靈敏度等指標的臨床性能評價,為該方法在臨床的進一步推廣應用奠定實驗基礎。方法:根據擴增條件及臨床檢測實際需要,優(yōu)化選擇VNTR位點MTUB21,MTUB04,QUB-18,QUB-26,QUB-11b,MIRU31,MIRU10和MIRU26作為檢測靶標,建立可直接用于臨床痰液標本檢測的方法,收集130例肺MTB患者和200例非結核患者(其它肺部疾病)的臨床痰液樣本,分別用MIRU-VNTR法和熒光定量PCR(FQ-PCR)法對上述樣本進行檢測,兩種檢測方法結果與羅氏培養(yǎng)法、臨床診斷進行比較分析。結果:以羅氏培養(yǎng)法為金標準時,MIRU-VNTR法的靈敏度為93.1%(108/116),特異度為97.7%(209/214),FQ-PCR法的靈敏度為94.0%(109/116),特異度為96.7%(207/214),MIRU-VNTR法和FQ-PCR法檢測結果無統計學差異(χ2=0.352,P=0.569㧐0.05)。以臨床診斷為金標準時,MIRU-VNTR法的靈敏度為86.9%(113/130),特異度為100%(200/200),FQ-PCR法的靈敏度為87.7%(114/130),特異度為99.0%(198/200),MIRU-VNTR法和FQ-PCR法檢測結果無統計學差異(χ2=0.030,P=0.862㧐0.05),但MIRU-VNTR法未發(fā)現假陽性結果。在MIRU-VNTR法檢測為陽性的結果中,98.2%(111/113)的樣本分子編碼互不相同,只有1.8%(2/113)分子編碼一致(皆為5-4-6-8-5-5-3-8),對此2例編碼一致的樣本,經過重復檢測,結果表明此2例病人的確攜帶MTB,并非由于交叉污染所致。結論:與傳統FQ-PCR方法比較,MIRU-VNTR檢測方法靈敏度、特異度均無顯著差異,MIRU-VNTR法的優(yōu)勢在于,通過賦予每例樣本特定的指紋信息,使不同樣本的陽性結果能區(qū)分開來,很好控制檢測結果的假陽性率。本研究表明MIRU-VNTR可用于臨床MTB的診斷,初步顯示有較好的臨床診斷價值。
【關鍵詞】：結核 肺 數目可變串聯重復序列
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R440;R52
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-11
• 1 材料與方法11-18
• 2 結果18-27
• 3 討論27-30
• 全文總結30-31
• 參考文獻31-35
• 文獻綜述35-45
• 參考文獻40-45
• 致謝45-46
• 攻讀碩士學位期間文章發(fā)表及發(fā)明專利46-47

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本文編號：1049997