本文關(guān)鍵詞：基于可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列的痰液結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)方法建立及初步應(yīng)用

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【摘要】：目的:傳統(tǒng)的核酸擴(kuò)增(nucleic acid amplification,NAA)技術(shù)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterial tuberculosis,MTB),因其簡單快捷、靈敏度高被臨床上大量使用,但該技術(shù)檢測(cè)結(jié)果假陽性率高的缺陷,是其應(yīng)用于結(jié)核病臨床檢驗(yàn)診斷的重大挑戰(zhàn)。本研究首次利用結(jié)核分枝桿菌散在分布單元——數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)基因序列(mycobacterial interspersed repetitive unit variable number of tandem repeat,MIRU-VNTR)的分布特點(diǎn),采用PCR技術(shù)直接對(duì)痰液樣本進(jìn)行基因擴(kuò)增,以檢測(cè)痰液標(biāo)本MTB并進(jìn)行相關(guān)質(zhì)量控制,通過特異度、靈敏度等指標(biāo)的臨床性能評(píng)價(jià),為該方法在臨床的進(jìn)一步推廣應(yīng)用奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:根據(jù)擴(kuò)增條件及臨床檢測(cè)實(shí)際需要,優(yōu)化選擇VNTR位點(diǎn)MTUB21,MTUB04,QUB-18,QUB-26,QUB-11b,MIRU31,MIRU10和MIRU26作為檢測(cè)靶標(biāo),建立可直接用于臨床痰液標(biāo)本檢測(cè)的方法,收集130例肺MTB患者和200例非結(jié)核患者(其它肺部疾病)的臨床痰液樣本,分別用MIRU-VNTR法和熒光定量PCR(FQ-PCR)法對(duì)上述樣本進(jìn)行檢測(cè),兩種檢測(cè)方法結(jié)果與羅氏培養(yǎng)法、臨床診斷進(jìn)行比較分析。結(jié)果:以羅氏培養(yǎng)法為金標(biāo)準(zhǔn)時(shí),MIRU-VNTR法的靈敏度為93.1%(108/116),特異度為97.7%(209/214),FQ-PCR法的靈敏度為94.0%(109/116),特異度為96.7%(207/214),MIRU-VNTR法和FQ-PCR法檢測(cè)結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=0.352,P=0.569㧐0.05)。以臨床診斷為金標(biāo)準(zhǔn)時(shí),MIRU-VNTR法的靈敏度為86.9%(113/130),特異度為100%(200/200),FQ-PCR法的靈敏度為87.7%(114/130),特異度為99.0%(198/200),MIRU-VNTR法和FQ-PCR法檢測(cè)結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=0.030,P=0.862㧐0.05),但MIRU-VNTR法未發(fā)現(xiàn)假陽性結(jié)果。在MIRU-VNTR法檢測(cè)為陽性的結(jié)果中,98.2%(111/113)的樣本分子編碼互不相同,只有1.8%(2/113)分子編碼一致(皆為5-4-6-8-5-5-3-8),對(duì)此2例編碼一致的樣本,經(jīng)過重復(fù)檢測(cè),結(jié)果表明此2例病人的確攜帶MTB,并非由于交叉污染所致。結(jié)論:與傳統(tǒng)FQ-PCR方法比較,MIRU-VNTR檢測(cè)方法靈敏度、特異度均無顯著差異,MIRU-VNTR法的優(yōu)勢(shì)在于,通過賦予每例樣本特定的指紋信息,使不同樣本的陽性結(jié)果能區(qū)分開來,很好控制檢測(cè)結(jié)果的假陽性率。本研究表明MIRU-VNTR可用于臨床MTB的診斷,初步顯示有較好的臨床診斷價(jià)值。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)核 肺 數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)序列
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R440;R52
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對(duì)照4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-11
• 1 材料與方法11-18
• 2 結(jié)果18-27
• 3 討論27-30
• 全文總結(jié)30-31
• 參考文獻(xiàn)31-35
• 文獻(xiàn)綜述35-45
• 參考文獻(xiàn)40-45
• 致謝45-46
• 攻讀碩士學(xué)位期間文章發(fā)表及發(fā)明專利46-47

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