本文關(guān)鍵詞：基于抗生素親合作用的化學(xué)發(fā)光分析法檢測(cè)致病菌

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【摘要】：致病菌是一種可通過(guò)空氣,食物,水和生物接觸等各種途徑入侵宿主并引起感染的微生物。其中,金黃色葡萄球菌是一種很常見(jiàn)的致病菌,能夠引起諸如腸炎,敗血癥,膿毒癥等嚴(yán)重感染,也是引起群體性食物中毒的第二大因素。變異鏈球菌是一種生長(zhǎng)于口腔的致病菌,具有分泌酸性物質(zhì)腐蝕牙釉質(zhì)的特點(diǎn),為人類(lèi)主要致齲齒菌之一,在口腔醫(yī)學(xué)領(lǐng)域被廣泛研究。因此,建立對(duì)這兩種致病菌快速,簡(jiǎn)單,靈敏檢測(cè)的新方法對(duì)于疾病診斷具有重要的意義�；瘜W(xué)發(fā)光(Chemiluminescence,簡(jiǎn)稱(chēng)為CL)分析法是分子發(fā)光光譜分析法中的一類(lèi),它主要是依據(jù)化學(xué)檢測(cè)體系中待測(cè)物濃度與化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度在一定范圍內(nèi)呈線性定量關(guān)系的原理,利用儀器對(duì)反應(yīng)體系化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的檢測(cè),來(lái)確定待測(cè)物含量的一種痕量分析方法。本文基于化學(xué)發(fā)光分析法,結(jié)合抗生素親合作用和雙位點(diǎn)分子識(shí)別模式構(gòu)建了檢測(cè)致病菌的新方法。1)基于抗生素功能化磁珠的化學(xué)發(fā)光分析法檢測(cè)金黃色葡萄球菌本文基于抗生素功能化的磁珠構(gòu)建了化學(xué)發(fā)光分析檢測(cè)金黃色葡萄球菌的方法。本研究選用萬(wàn)古霉素作為其中一種分子識(shí)別試劑,偶聯(lián)在羧基化磁珠上,實(shí)現(xiàn)對(duì)金黃色葡萄球菌的高效富集和快速分離。同時(shí),利用金黃色葡萄球菌表面的A蛋白可以與兔免疫球蛋白G(Ig G)進(jìn)行特異性結(jié)合作用的特點(diǎn),同時(shí)使用堿性磷酸酶(ALP)標(biāo)記的兔Ig G作為第二種分子識(shí)別試劑和信號(hào)示蹤物,在離心管中進(jìn)行孵育后,通過(guò)磁性分離得到夾心復(fù)合物,即可檢測(cè)復(fù)合物的化學(xué)發(fā)光信號(hào)值。結(jié)果表明,金黃色葡萄球菌的濃度在12-1.2×106 CFU mL-1范圍內(nèi)與化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度呈良好的線性關(guān)系,檢測(cè)限為3.3 CFU mL-1(信噪比為3)。本方法表現(xiàn)出良好的特異性。將該方法應(yīng)用到實(shí)際樣品檢測(cè)中,將湖水、牛奶、人尿液和人血液作為樣品進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn),回收率由70.0%到116.7%不等。因此該方法具有成本低廉,靈敏度高,特異性好,操作簡(jiǎn)單,反應(yīng)時(shí)間快的優(yōu)點(diǎn),具有較好的應(yīng)用前景。2)基于雙位點(diǎn)分子識(shí)別模式的化學(xué)發(fā)光分析法檢測(cè)人口腔中的變異鏈球菌本文基于雙位點(diǎn)分子識(shí)別模式,構(gòu)建了檢測(cè)人體口腔中變異鏈球菌的化學(xué)發(fā)光分析新方法。與金黃色葡萄球菌表面的A蛋白不同的是,變異鏈球菌表面的G蛋白可以與大鼠Ig G2a進(jìn)行特異性結(jié)合,而A蛋白很少結(jié)合或者不結(jié)合。利用變異鏈球菌的這個(gè)特性,將大鼠IgG2a與羧基化磁珠偶聯(lián)得到第一分子識(shí)別試劑。同時(shí),我們選用萬(wàn)古霉素作為第二分子識(shí)別試劑,并標(biāo)記ALP制備高靈敏的化學(xué)發(fā)光探針,進(jìn)一步提高了本方法的特異性和靈敏度。在離心管中完成結(jié)合反應(yīng)后,分離出夾心復(fù)合物并進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測(cè)。結(jié)果表明,變異鏈球菌在24-2.4×105 CFU mL-1范圍內(nèi)可與化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度呈線性關(guān)系,檢測(cè)限為8 CFU m L-1(信噪比為3)。將該方法應(yīng)用于檢測(cè)健康成年人的唾液,回收率由70.8%到108.3%不等。本方法具有快速,高靈敏,高特異的特點(diǎn),在實(shí)際應(yīng)用中有較大應(yīng)用潛力。
【關(guān)鍵詞】：化學(xué)發(fā)光 萬(wàn)古霉素 功能化磁珠 致病菌 免疫球蛋白G
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：O657.3;R446.5
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 主要縮寫(xiě)符號(hào)對(duì)照表10-11
• 第1章 緒論11-29
• 1.1 引言11
• 1.2 化學(xué)發(fā)光反應(yīng)基礎(chǔ)理論11-13
• 1.2.1 化學(xué)發(fā)光反應(yīng)原理11-12
• 1.2.2 化學(xué)發(fā)光分析法基本原理12-13
• 1.3 常用的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)體系13-17
• 1.3.1 魯米諾化學(xué)發(fā)光體系13-14
• 1.3.2 1, 2-二氧雜環(huán)丁烷類(lèi)化學(xué)發(fā)光體系14-15
• 1.3.3 過(guò)氧化草酸酯類(lèi)化學(xué)發(fā)光體系15-16
• 1.3.4 吖啶酯類(lèi)化學(xué)發(fā)光體系16
• 1.3.5 酸性高錳酸鉀化學(xué)發(fā)光體系16-17
• 1.4 化學(xué)發(fā)光分析法的分類(lèi)17-19
• 1.5 化學(xué)發(fā)光分析法致病菌檢測(cè)中的應(yīng)用19-24
• 參考文獻(xiàn)24-29
• 第2章 基于抗生素功能化磁珠的化學(xué)發(fā)光分析法檢測(cè)金黃色葡萄球菌29-45
• 2.1 引言29-30
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分30-33
• 2.2.1 試劑30-31
• 2.2.2 儀器31
• 2.2.3 金黃色葡萄球菌培養(yǎng)，處理及計(jì)數(shù)31
• 2.2.4 MBs-vanc的制備31
• 2.2.5 藻紅熒光蛋白偶聯(lián)萬(wàn)古霉素（PE-vanc）的制備31-32
• 2.2.6 表征32
• 2.2.7 金黃色葡萄球菌的檢測(cè)以及標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立32-33
• 2.3 結(jié)果與討論33-41
• 2.3.1 PE-vanc的分離純化33
• 2.3.2 基于功能化磁珠檢測(cè)金黃色葡萄球菌的機(jī)理33-35
• 2.3.3 MBs-vanc對(duì)金黃色葡萄球菌作用分析35
• 2.3.4 條件優(yōu)化35-37
• 2.3.5 特異性分析37-39
• 2.3.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立39-40
• 2.3.7 實(shí)際樣品檢測(cè)40-41
• 2.4 結(jié)論41-42
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 第3章 基于雙位點(diǎn)識(shí)別模式的化學(xué)發(fā)光分析法檢測(cè)變異鏈球菌45-58
• 3.1 引言45-46
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分46-48
• 3.2.1 試劑46
• 3.2.2 儀器46-47
• 3.2.3 變異鏈球菌培養(yǎng)，，處理及計(jì)數(shù)47
• 3.2.4 磁珠偶聯(lián)大鼠IgG2a （MBs-大鼠IgG2a）的制備47
• 3.2.5 ALP標(biāo)記萬(wàn)古霉素（ALP-vanc）的制備47
• 3.2.6 表征47-48
• 3.2.7 變異鏈球菌的檢測(cè)以及標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立48
• 3.3 結(jié)果與討論48-54
• 3.3.1 基于功能化磁珠檢測(cè)變異鏈球菌的機(jī)理48-49
• 3.3.2 ALP-vanc的分離純化49
• 3.3.3 ALP-vanc對(duì)變異鏈球菌的作用分析49-50
• 3.3.4 掃描電鏡表征50-51
• 3.3.5 條件優(yōu)化51-52
• 3.3.6 特異性分析52-53
• 3.3.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立53-54
• 3.3.8 實(shí)際樣品檢測(cè)54
• 3.4 結(jié)論54-56
• 參考文獻(xiàn)56-58
• 致謝58-60
• 發(fā)表論文及參加課題一覽表60

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