本文關(guān)鍵詞：D-二聚體膠體金免疫層析法定量檢測方法的建立

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【摘要】：背景D-二聚體(D-Dimer,D-D)是交聯(lián)纖維蛋白(Fb)經(jīng)纖溶酶作用后的特異降解產(chǎn)物,可作為體內(nèi)高凝狀態(tài)和纖溶亢進(jìn)的分子標(biāo)志物,是唯一反映凝血和纖溶的理想指標(biāo)。當(dāng)患有血栓性及肺栓塞性疾病、彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)、心腦血管疾病、肝臟疾病及腫瘤性疾病時,體內(nèi)D-二聚體含量會明顯升高,尤其在肺栓塞和深靜脈血栓的排除診斷中,D-二聚體的含量具有極其重要的臨床排除診斷價值。此外,D-二聚體的升高與急性胰腺炎、糖尿病血管性病變及急慢性蕁麻疹等疾病的發(fā)生發(fā)展和預(yù)后有極其密切的聯(lián)系。因此,檢測樣本血漿中D-二聚體的含量對于多種疾病的輔助診斷和預(yù)后監(jiān)測具有極其重要的臨床意義。目前,檢測D-二聚體的方法主要有乳膠凝集法、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、免疫比濁法和膠體金免疫層析法,目前臨床上應(yīng)用最多的是免疫比濁法。然而,免疫比濁法雖有定量準(zhǔn)確、靈敏度高、試劑重復(fù)性好、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn),但其需要大型儀器設(shè)備,從而限制了D-二聚體檢測項(xiàng)目在基層醫(yī)院的普及開展。這就使得在D-二聚體的檢測中,急需要一種快速、簡便同時可定量的檢測方法以普及D-二聚體的檢測,而膠體金免疫層析定量檢測技術(shù)正具有了上述優(yōu)點(diǎn),進(jìn)而彌補(bǔ)了免疫比濁法的不足。近年來,隨著膠體金免疫層析技術(shù)的不斷發(fā)展和成熟,膠體金免疫層析技術(shù)也已從定性發(fā)展為既可定性又可定量,并越來越廣泛地應(yīng)用于多種物質(zhì)的檢測,也以其獨(dú)特的優(yōu)勢有望應(yīng)用于D-二聚體的定量檢測中。目的建立一種靈敏度高、特異性強(qiáng)、精密性好、穩(wěn)定性優(yōu)、線性范圍寬的D-二聚體膠體金免疫層析定量檢測方法,為D-二聚體的檢測提供了一種新的技術(shù)和方法,為臨床輔助診斷相應(yīng)疾病提供更便捷的實(shí)用價值。方法本課題應(yīng)用檸檬酸三鈉還原氯金酸法制備膠體金溶液,應(yīng)用尿激酶裂解纖維蛋白的方法制備室內(nèi)參考品,運(yùn)用河南省生物工程技術(shù)研究中心金標(biāo)實(shí)驗(yàn)技術(shù)和平臺對本課題多種實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了優(yōu)化和選擇,對試紙條的靈敏度、特異性、線性、精密性和穩(wěn)定性等方面進(jìn)行了評價,并將本課題建立的檢測方法與美國IL公司的ACL-TOP700檢測系統(tǒng)(免疫比濁法)進(jìn)行了對比。結(jié)果研究結(jié)果顯示,本課題制得的D-二聚體室內(nèi)參考品在-20℃條件下可以保存至少7個月,4℃條件下可以保存至少3個月,37℃條件下可以保存至少7天,達(dá)到了室內(nèi)質(zhì)控品的要求;本檢測方法的最低檢測限為0.15625ug/ml,線性范圍為0.15625-10ug/ml;與纖維蛋白原、甘油三酯及膽紅素均無交叉反應(yīng)性;批內(nèi)變異系數(shù)分別為3.78%和2.81%,批間變異系數(shù)分別為4.95%和4.07%;在4~25℃儲存條件下截止目前存放了12個月,37℃條件下放置144h,試紙條性能未見下降;用本課題建立的檢測方法與美國IL公司的ACL-TOP700檢測系統(tǒng)(免疫比濁法)對55份臨床樣本中的D-二聚體含量進(jìn)行測定,兩種結(jié)果相關(guān)系數(shù)R2=0.98593,回歸方程Y=0.95964X+0.02645,兩者相關(guān)性良好。結(jié)論(1)制備出穩(wěn)定的D-二聚體室內(nèi)參考品,可成功用于D-二聚體膠體金免疫層析定量檢測方法的建立;(2)成功建立D-二聚體膠體金免疫層析定量檢測方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線;(3)初步建立了D-二聚體膠體金免疫層析定量檢測方法。
【關(guān)鍵詞】：D-二聚體 膠體金免疫層析 定量 標(biāo)準(zhǔn)曲線
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R446.6
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 中英文縮略詞表12-13
• 前言13-17
• 1 材料與方法17-30
• 2 結(jié)果與分析30-45
• 3 討論45-48
• 4 結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-53
• 綜述部分 D-二聚體的臨床應(yīng)用及檢測53-64
• 參考文獻(xiàn)61-64
• 個人簡歷64-66
• 致謝66-67

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本文編號：1006325