恩諾沙星（Enrofloxacin,ENR）為人工合成的氟喹諾酮類抗菌藥物,被廣泛用于多種動物感染性疾病的預(yù)防和治療。近多年來,RNR在水生動物疾病的防治中應(yīng)用愈來愈多。然而ENR的大量使用,可能造成其在動物源食品中的殘留,嚴(yán)重影響到人類的身體健康。傳統(tǒng)的檢測方法中,高效液相色譜等檢測,需要復(fù)雜的樣品前處理,貴重的大型儀器,耗時較久。本研究中將ENR的核酸適配體組裝在納米金（Au nanoparticles,AuNPs）表面作為識別納米生物探針,結(jié)合磁珠（Microbeads,MBs）分離技術(shù)構(gòu)建針對ENR的適配體傳感器（aptasensor）。首先通過末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶（Terminal deoxynucleotidyl transferase,TdTase）介導(dǎo)的常溫下納米界面DNA的生長,實現(xiàn)針對ENR的信號響應(yīng),建立一種簡單易操作的檢測分析方法。其次,本研究中結(jié)合TdTase介導(dǎo)的納米界面DNA的生長和RCA擴(kuò)增技術(shù),實現(xiàn)了一種新型的TdT生成的具有通用引物的RCA的傳感分析方法,用于定量檢測ENR。本論文主要包括以下三個部分:（1）首先參照經(jīng)典的還原法制備粒徑15 nm的... 

【文章來源】：上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

指數(shù)富集指數(shù)富集的配體系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)示意圖

圖 1-2 基于核酸配體的生物傳感器原理示意圖Fig. 1-2 Structure diagram of aptasensors1.2.3 核酸適配體生物傳感器的應(yīng)用從 2004 年起到今天，核酸適配體已經(jīng)引起了研究者的廣泛關(guān)注。適配體的開發(fā)與利用極大地推動了生物傳感技術(shù)的研究與和發(fā)展。使得檢測對象從單一的模板分子如凝血酶、三磷酸腺苷等不斷的拓展為更具有實際意義的靶標(biāo)物如腫瘤標(biāo)

并被廣泛用于開發(fā)各種 ATP 檢測方法。1.2.3.1 比色法基于納米金或者納米銀等納米顆粒的比色法作為一種靈敏直觀的檢測手段，因為簡單、無需特別的專業(yè)操作技術(shù)。可以根據(jù)觀察納米顆粒的團(tuán)聚所體現(xiàn)出的顏色變化進(jìn)而直觀、便捷地實現(xiàn)對靶分子的快速檢測，因此在分析領(lǐng)域的應(yīng)用非常廣泛。針對于小分子的檢測 Chen 等人（如圖 1-3（a））借助未經(jīng)改性的金納米粒子和 DNA 適配體制備了一種通過裸眼可以直接觀察，通過紫外可見分光光度計表征來檢測 AuNPs 顏色變化的適體傳感器，用于無標(biāo)記磺胺地索辛(SDM) 的檢測，該策略對 SDM 的檢測限為 50ng/mL，此結(jié)果遠(yuǎn)低于中國和歐盟等地區(qū)對動物組織里面 SDM100ng/mL 最大殘留量的要求。Liu 等人（如圖 1-3（b））的團(tuán)隊依照靶分子滅蠅胺的結(jié)構(gòu)特性設(shè)計了一段高親和性適配體 polyT10，通過和金納米顆粒結(jié)合，進(jìn)而構(gòu)建了一種針對于滅蠅胺的高靈敏度比色法檢測。該傳感器的 LOD 和 LOQ分別為252ng/g和500ng/g。此結(jié)果符合我國對滅蠅胺的最大殘留限量要求(MRLs)，使得該策略能夠在黃瓜中得到成功應(yīng)用。


本文編號：3129088