MicroRNA（miRNA）是一類內(nèi)源性非編碼小分子RNA,對(duì)基因的表達(dá)以及各種生命體活動(dòng)有重要的調(diào)控作用。研究表明,人類的許多疾病包括癌癥都與miRNA的異常表達(dá)有密切關(guān)系。MiRNA已經(jīng)作為一種新的生物標(biāo)志物用于癌癥等重大疾病的早期診斷。但是,miRNA序列短,在體內(nèi)含量低,且許多同源序列僅僅有1²個(gè)堿基的差別,相似程度很高,這就給miRNA的檢測(cè)帶來(lái)了挑戰(zhàn)。所以,人們一直熱衷于高靈敏的miRNA檢測(cè)方法的研究。但是,在追求高靈敏度的同時(shí),方法的簡(jiǎn)便、低成本,在方法的實(shí)際應(yīng)用中同樣重要。所以,如何建立簡(jiǎn)單、靈敏的miRNA檢測(cè)方法,對(duì)于相關(guān)疾病的臨床診斷,以及以miRNA為靶標(biāo)分子的藥物研究都具有重要意義。雙鏈特異性核酸酶信號(hào)擴(kuò)增（duplex-specific nuclease signal amplification,DSNSA）是一種由雙鏈特異性核酸酶（duplex-specific nuclease,DSN）誘導(dǎo)的恒溫核酸擴(kuò)增技術(shù)。DSN能夠特異性識(shí)別并降解RNA-DNA雜合雙鏈中的DNA鏈,RNA鏈被釋放,釋放的RNA鏈可以繼續(xù)參加下一輪的雜交-酶... 

【文章來(lái)源】：河北大學(xué)河北省

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Northern印跡技術(shù)示意圖

圖 1.2 RT-PCR 法分析檢測(cè) miRNA 原理圖R (Reverse transcription PCR，RT-PCR) 是 PCR 應(yīng)用成 cDNA，然后以 cDNA 為模板進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，通過(guò)檢測(cè) miRNA 的目的。2005 年，Raymond 等人[17]首次利用檢測(cè)原理如圖 1.2 所示，首先設(shè)計(jì)一條帶有較長(zhǎng) DNA rimer) ，GSP 引物與 miRNA 部分雜交并經(jīng)反轉(zhuǎn)錄延伸 cDNA；然后引入含有 LNA 修飾的第二條引物，以 cDNA BR Green Ⅰ進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光分析。該方法中引入 LNA 修度和選擇性，但同時(shí)也增加了實(shí)驗(yàn)的費(fèi)用。

圖 1.2 RT-PCR 法分析檢測(cè) miRNA 原理圖everse transcription PCR，RT-PCR) 是 PCRNA，然后以 cDNA 為模板進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，通iRNA 的目的。2005 年，Raymond 等人[17]首次理如圖 1.2 所示，首先設(shè)計(jì)一條帶有較長(zhǎng) ，GSP 引物與 miRNA 部分雜交并經(jīng)反轉(zhuǎn)錄；然后引入含有 LNA 修飾的第二條引物，以 creen Ⅰ進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光分析。該方法中引入 L選擇性，但同時(shí)也增加了實(shí)驗(yàn)的費(fèi)用。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雙鏈特異性核酸酶介導(dǎo)的高靈敏度microRNA分析[J]. 李曉利,王愈聰,張學(xué)晶,趙云頡,劉成輝,李正平.  化學(xué)學(xué)報(bào). 2014(03)

碩士論文
[1]基于金屬納米材料構(gòu)建高靈敏的電化學(xué)生物傳感器的研究[D]. 伍永梅.西南大學(xué) 2014
[2]基于金屬納米發(fā)光材料的新型生物傳感器研究[D]. 胡益輝.湖南大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3072842