【摘要】：目的:胰島素(insulin)是由體內(nèi)胰臟的胰島β細(xì)胞分泌的一種內(nèi)源性的蛋白質(zhì)激素,胰島素作為一種重要的生物標(biāo)志物,在不同類型的糖尿病、低血糖綜合征、胰島素β細(xì)胞瘤以及胰腺炎等疾病的診療中起著至關(guān)重要作用。目前,傳統(tǒng)的胰島素檢測技術(shù)主要包括免疫放射法、全自動化學(xué)發(fā)光法、酶聯(lián)免疫吸附法等,但這些方法儀器昂貴、檢測時間長、技術(shù)要求高以及檢測過程較復(fù)雜。本研究結(jié)合電化學(xué)生物傳感平臺建立了一種胰島素檢測的新方法。該研究方法具有高效、靈敏、無酶、免標(biāo)記等特點,且有望實現(xiàn)臨床實踐中對胰島素的檢測。方法:本研究構(gòu)建了一個基于金納米顆粒修飾的二硫化鉬復(fù)合納米材料(AuNP@MoS_2)和抗體偶聯(lián)DNA觸發(fā)的雜交鏈反應(yīng)(HCR)的電化學(xué)生物傳感器�；诮鸺{米顆粒修飾的二硫化鉬納米片修飾的玻碳電極可以捕獲大量胰島素抗體(Ab_1)。當(dāng)靶物質(zhì)胰島素被暴露后,加入胰島素抗體抗(Ab_2)與DNA觸發(fā)鏈(T_0)交聯(lián)以形成Ab_2@T_0復(fù)合物的以進(jìn)行夾心免疫反應(yīng)。隨后,通過Ab_2@T_0和輔助探針(H_1,H_2)之間的雜交鏈反應(yīng)形成長雙鏈DNA多聯(lián)體。最后,通過帶負(fù)電的DNA磷酸骨架和帶正電的DNA探針之間的靜電吸附相互作用將六銨合釕(Ⅲ)插入到雙鏈DNA產(chǎn)物中產(chǎn)生電化學(xué)信號。結(jié)果:該方法在50 mV s~(-1)的-0.5至0.1 V電位下電化學(xué)響應(yīng)最佳,檢測的胰島素動態(tài)范圍為0.1 pmol L~(-1)至1 nmol L~(-1),且檢出限低至50fmol L~(-1)。另外在臨床實際血樣本的檢測中,依然能完成胰島素的定量檢測,且具有一定的抗干擾能力,該研究方法具有較好的特異性,可重復(fù)性且穩(wěn)定性較好。結(jié)論:本研究基于金納米顆粒修飾的二硫化鉬復(fù)合納米材料(AuNP@MoS_2)和抗體偶聯(lián)DNA觸發(fā)的雜交鏈反應(yīng)(HCR),已成功構(gòu)建了用于檢測胰島素的三明治夾心免疫型電化學(xué)測定法。該檢測方法的良好性能歸因于金納米顆粒修飾的二硫化鉬納米片(AuNP@MoS_2)的大比表面積和和雜交鏈反應(yīng)(HCR)的高擴(kuò)增效率。此外,該免疫測定方法具有簡單和靈敏的優(yōu)點,已成功應(yīng)用于稀釋的人血清樣品中的胰島素檢測,其為糖尿病的診斷技術(shù)提供了一種新的檢測途徑,具有較為重要的臨床意義。
【圖文】：

13圖 1 基于 AuNP@MoS2和 HCR 的胰島素檢測免疫傳感器的原理圖Fig. 1 Schematic illustration of the immunosensor for insulin detection based on AuNP@MoS2and HCR

交鏈反應(yīng)的 PAGE（12％）結(jié)果如圖 A 所示；泳道 1：20 bp DNA ladder 標(biāo)記1T0; 泳道 3：1 mol L-1H1; 泳道 4：1 mol L-1H2;泳道 5：1 mol L-1T0+ 1 mol mol L-1H1+1 mol L-1H2; 泳道 7：0.5 mol L-1T0+ 1 mol L-1H1+ 1 mol L-1H2純化的 DNA（a），，Ab2@T0（b）和 Ab2（c）的紫外吸收光譜圖。A）The PAGE (12%) results of hybridization chain reaction; Lane 1: 20 bp DN
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R587.1;TP212.3

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本文編號：2688913