快速定量檢測血清α-羥丁酸脫氫酶干化學方法的建立及應(yīng)用

發(fā)布時間：2020-06-08 19:32

【摘要】：α-羥丁酸脫氫酶為乳酸脫氫酶同功酶之一,在人體內(nèi)普遍存在,可應(yīng)用于多種疾病的早期診斷篩查。人體血液中α-羥丁酸脫氫酶的測定對鼻咽癌、肺癌、妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥、鐮狀細胞病等多種疾病的輔助診斷有重要的指導作用。目前臨床上檢測α-羥丁酸脫氫酶的方法為液生化法,但此方法需要大型的自動化生化儀器,儀器價格昂貴,且需要成熟的技術(shù)人員進行操作。目前市場上還沒有簡單、快速、操作方便的POCT檢測方法可應(yīng)用于臨床上。本研究利用干式生化檢測原理和技術(shù)研制了一種快速檢測人體中α-羥丁酸脫氫酶的干化學試紙,同時配套自行開發(fā)的小型臺式反射光度計可以定量檢測人體血液當中的α-羥丁酸脫氫酶含量,經(jīng)過臨床驗證性能符合臨床需要,形成的產(chǎn)品已獲得CFDA注冊文號,可以投入臨床實際應(yīng)用。該產(chǎn)品填補了國內(nèi)外干化學產(chǎn)品的空白,具有操作簡便、檢測時間短、試劑成本低等特點,在國內(nèi)外市場有廣泛的應(yīng)用前景。本研究設(shè)計了單因子及全因子實驗對試紙材進行料篩選及試紙配方的優(yōu)化。確定了測試條件:測試波長為550nm,反應(yīng)時間為120s,加樣量為15μL;對試紙反應(yīng)中涉及到的底物濃度、緩沖溶液pH值和離子濃度、顯色劑濃度、表面活性劑種類及穩(wěn)定劑、輔酶和保護劑主要組分進行優(yōu)化。試紙的配方優(yōu)化結(jié)果:α-羥丁酸的濃度為15mmol/L、緩沖液離子濃度為100mmol/L、pH值為8.2、顯色劑濃度為50mmol/L、吐溫-20的濃度為0.5%,穩(wěn)定劑濃度為4%,輔酶濃度為10%,保護劑濃度為1%。對試紙材料進行篩選,試劑層選用15μm孔徑的CNPC-SS12,擴散層選用PES30/24,中間層選用6613。將優(yōu)化后配方應(yīng)用于試劑層中,結(jié)合篩選好的膜材組裝成試紙,對試紙的精密度、準確度、線性范圍、穩(wěn)定性和抗干擾性進行驗證。結(jié)果表明:試紙的批內(nèi)精密度6.8%～7.1%、批間精密度4.0%～4.9%、總精密度7.8%～8.6%,均小于10%;測試朗道校準品高低值準確度的偏差分別為4.9%和5.3%,都小于15%;試紙線性范圍在24U/L～953 U/L內(nèi),相關(guān)方程為y=0.970x+1.971,相關(guān)系數(shù)R2=0.9997;試紙開瓶21天,測定結(jié)果的相對偏差在±10%以內(nèi),試紙保持穩(wěn)定;在37℃儲存14天,試紙測定結(jié)果的相對偏差在±10%以內(nèi),表明α-HBDH干化學試紙在2～8℃冷藏條件下可儲存12個月;常見干擾物質(zhì)低于以下濃度時:血紅蛋白5g/L、膽紅素342μmol/L、甘油三酯37mmol/L、抗壞血酸170μmol/L,對α-HBDH檢測無明顯干擾。干化學試紙與液體參考方法學比較,相關(guān)方程為y=0.995x+20.934(r=0.995),Passing-Bablok回歸方程的斜率為0.995,接近理論值1;Bland-Altman分析顯示4.16%的點在一致性界限之外。表明干化學與液體試劑相關(guān)性良好,具有可比性。對不同抗凝劑的影響進行了比較,肝素鈉血漿與血清檢測結(jié)果同源性最好,肝素鈉血漿的相對偏倚為5.7%,試紙測定腦�；颊擀�-HBDH濃度與正常人的差異性對比明顯,表明該試紙適用于腦梗患者的輔助診斷。臨床結(jié)果表明所制備的試紙可應(yīng)用于α-HBDH的檢測,可在基層醫(yī)院進行應(yīng)用推廣。
【圖文】：

技術(shù)路線圖,技術(shù)路線

第一意緒論紙可以很好應(yīng)用于臨床檢驗。逡逑論：通過上述研宄得出研制的ａ－ＨＢＤＨ芐化學試紙符合性能要求Ｉ且具有測試時間短、方便、快捷、試劑保存時間長、穩(wěn)定性好、抗千擾性很好的實用性、經(jīng)濟性，，特別適用于鄉(xiāng)鎮(zhèn)基Ｍ醫(yī)院的推廣，推動我國檢測技術(shù)的進一步發(fā)展＜＾逡逑技術(shù)路線逡逑

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