【摘要】：叢枝菌根(arbuscular mycorrhizal fungi, AM)真菌是一類廣泛分布于土壤中的有益植物內(nèi)生真菌,可以和自然界中絕大多數(shù)植物形成互惠共生聯(lián)合體,對其宿主植物生長及提高抗逆性方面均起到促進作用。AM真菌能夠侵染豆科木本植物紫穗槐(Amorpha fruticosa L)根部,形成良好共生關系。AM真菌在紫穗槐根部的定殖會誘導其根部一系列生理生化以及形態(tài)的變化,蛋白表達也會發(fā)生相應的改變。應用差異蛋白質(zhì)組學方法對AM真菌-紫穗槐共生體形成過程中特異蛋白表達的變化進行研究,對于揭示菌根共生體形成時期的分子機制將具有重要理論價值。本研究分別測定AM真菌侵染率隨植株生長時間的變化,以及AM真菌促進宿主植物紫穗槐生長的情況。利用差異蛋白質(zhì)組學常用的雙向電泳-質(zhì)譜技術,建立了一套適用于紫穗槐菌根蛋白的雙向電泳體系,并對蛋白提取方法、上樣量和染色方法等條件進行優(yōu)化。利用優(yōu)化的體系分離了信號識別時期及成熟共生體時期紫穗槐菌根相關蛋白,運用nano ESI MS/MS對相關蛋白進行測序鑒定,并對測定的特異序列進行生物信息學分析。根據(jù)侵染率與生長情況綜合分析發(fā)現(xiàn),接種AM真菌對紫穗槐的生長起到明顯促進作用,并隨著侵染強度的增加,這種促進作用更明顯,而信號識別時期及成熟共生體時期最具有其代表性。試驗采用TCA丙酮法、改良酚提取法提取紫穗槐菌根蛋白,并比較了不同上樣量和不同考馬斯亮藍染色方法。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：采用改良的酚提取法,1000μg上樣量、考馬斯亮藍R-350染色可獲得分辨率高、重復性好的雙向電泳圖譜,為后續(xù)AM真菌-紫穗槐共生關系的研究奠定了良好基礎。利用改良的雙向電泳體系分析菌根信號識別時期及成熟共生體時期紫穗槐根蛋白表達量的變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn),信號識別時期共發(fā)現(xiàn)12個蛋白出現(xiàn)表達變化,其中9個蛋白出現(xiàn)上調(diào)表達、2個蛋白出現(xiàn)下調(diào)表達、1個特異表達蛋白點。成熟共生體時期共發(fā)現(xiàn)32個蛋白出現(xiàn)表達量變化,其中14個蛋白出現(xiàn)上調(diào)表達、3個蛋白點出現(xiàn)下調(diào)表達、15個特異表達蛋白點。根據(jù)蛋白點的表達豐度變化差異分析的結(jié)果,將信號識別時期和成熟共生體時期共44個差異表達蛋白點進行質(zhì)譜鑒定并通過MASCOT搜索引擎在Swiss-Prot數(shù)據(jù)庫檢索。共37個差異表達蛋白點被成功鑒定,其中信號識別時期成功鑒定蛋白點10個；成熟共生體時期成功鑒定27個蛋白點。對成功鑒定的蛋白質(zhì)進行功能分類,發(fā)現(xiàn)這些蛋白質(zhì)分別屬于代謝相關蛋白、能量相關蛋白、DNA調(diào)控相關蛋白、DNA合成相關蛋白、信號轉(zhuǎn)導相關蛋白、蛋白合成相關蛋白、細胞結(jié)構(gòu)蛋白、防御相關蛋白、未知蛋白九大類。
【學位授予單位】：黑龍江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：S793.2

【參考文獻】

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3 郭興;潘登奎;羅曉麗;;植物超氧化物歧化酶的研究及其在基因工程中的應用[J];山西農(nóng)業(yè)科學;2008年03期

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1 胡小娟;幾種活性物質(zhì)與超氧化物歧化酶相互作用的研究[D];安徽大學;2012年

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本文編號：2519336