發(fā)布時(shí)間：2019-07-25 20:51

【摘要】：叢枝菌根(arbuscular mycorrhizal fungi, AM)真菌是一類廣泛分布于土壤中的有益植物內(nèi)生真菌,可以和自然界中絕大多數(shù)植物形成互惠共生聯(lián)合體,對(duì)其宿主植物生長(zhǎng)及提高抗逆性方面均起到促進(jìn)作用。AM真菌能夠侵染豆科木本植物紫穗槐(Amorpha fruticosa L)根部,形成良好共生關(guān)系。AM真菌在紫穗槐根部的定殖會(huì)誘導(dǎo)其根部一系列生理生化以及形態(tài)的變化,蛋白表達(dá)也會(huì)發(fā)生相應(yīng)的改變。應(yīng)用差異蛋白質(zhì)組學(xué)方法對(duì)AM真菌-紫穗槐共生體形成過程中特異蛋白表達(dá)的變化進(jìn)行研究,對(duì)于揭示菌根共生體形成時(shí)期的分子機(jī)制將具有重要理論價(jià)值。本研究分別測(cè)定AM真菌侵染率隨植株生長(zhǎng)時(shí)間的變化,以及AM真菌促進(jìn)宿主植物紫穗槐生長(zhǎng)的情況。利用差異蛋白質(zhì)組學(xué)常用的雙向電泳-質(zhì)譜技術(shù),建立了一套適用于紫穗槐菌根蛋白的雙向電泳體系,并對(duì)蛋白提取方法、上樣量和染色方法等條件進(jìn)行優(yōu)化。利用優(yōu)化的體系分離了信號(hào)識(shí)別時(shí)期及成熟共生體時(shí)期紫穗槐菌根相關(guān)蛋白,運(yùn)用nano ESI MS/MS對(duì)相關(guān)蛋白進(jìn)行測(cè)序鑒定,并對(duì)測(cè)定的特異序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析。根據(jù)侵染率與生長(zhǎng)情況綜合分析發(fā)現(xiàn),接種AM真菌對(duì)紫穗槐的生長(zhǎng)起到明顯促進(jìn)作用,并隨著侵染強(qiáng)度的增加,這種促進(jìn)作用更明顯,而信號(hào)識(shí)別時(shí)期及成熟共生體時(shí)期最具有其代表性。試驗(yàn)采用TCA丙酮法、改良酚提取法提取紫穗槐菌根蛋白,并比較了不同上樣量和不同考馬斯亮藍(lán)染色方法。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：采用改良的酚提取法,1000μg上樣量、考馬斯亮藍(lán)R-350染色可獲得分辨率高、重復(fù)性好的雙向電泳圖譜,為后續(xù)AM真菌-紫穗槐共生關(guān)系的研究奠定了良好基礎(chǔ)。利用改良的雙向電泳體系分析菌根信號(hào)識(shí)別時(shí)期及成熟共生體時(shí)期紫穗槐根蛋白表達(dá)量的變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn),信號(hào)識(shí)別時(shí)期共發(fā)現(xiàn)12個(gè)蛋白出現(xiàn)表達(dá)變化,其中9個(gè)蛋白出現(xiàn)上調(diào)表達(dá)、2個(gè)蛋白出現(xiàn)下調(diào)表達(dá)、1個(gè)特異表達(dá)蛋白點(diǎn)。成熟共生體時(shí)期共發(fā)現(xiàn)32個(gè)蛋白出現(xiàn)表達(dá)量變化,其中14個(gè)蛋白出現(xiàn)上調(diào)表達(dá)、3個(gè)蛋白點(diǎn)出現(xiàn)下調(diào)表達(dá)、15個(gè)特異表達(dá)蛋白點(diǎn)。根據(jù)蛋白點(diǎn)的表達(dá)豐度變化差異分析的結(jié)果,將信號(hào)識(shí)別時(shí)期和成熟共生體時(shí)期共44個(gè)差異表達(dá)蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜鑒定并通過MASCOT搜索引擎在Swiss-Prot數(shù)據(jù)庫(kù)檢索。共37個(gè)差異表達(dá)蛋白點(diǎn)被成功鑒定,其中信號(hào)識(shí)別時(shí)期成功鑒定蛋白點(diǎn)10個(gè)；成熟共生體時(shí)期成功鑒定27個(gè)蛋白點(diǎn)。對(duì)成功鑒定的蛋白質(zhì)進(jìn)行功能分類,發(fā)現(xiàn)這些蛋白質(zhì)分別屬于代謝相關(guān)蛋白、能量相關(guān)蛋白、DNA調(diào)控相關(guān)蛋白、DNA合成相關(guān)蛋白、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)蛋白、蛋白合成相關(guān)蛋白、細(xì)胞結(jié)構(gòu)蛋白、防御相關(guān)蛋白、未知蛋白九大類。
【學(xué)位授予單位】：黑龍江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：S793.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2519336