本文關(guān)鍵詞：黃牛肌肉生長發(fā)育相關(guān)基因甲基化鑒定及IGF2和ZBED6基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：我國地方黃牛具有獨(dú)特的基因資源，如何從遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)的角度來闡釋肉用性狀形成的原因及其分子調(diào)控機(jī)制，將成為我國黃牛遺傳改良工作的研究重點(diǎn)。本研究以中國黃牛作為研究對象，利用甲基化DNA免疫共沉淀測序（MeDIP-Seq）、亞硫酸氫鹽測序PCR（BSP）、結(jié)合重亞硫酸鹽處理和酶切分析（COBRA）、實(shí)時(shí)熒光定量PCR（QPCR）、蛋白質(zhì)免疫印跡（Western blot）、DNA池測序、Forced-PCR-RFLP、基因克隆、細(xì)胞培養(yǎng)、腺病毒的包裝以及真核表達(dá)等現(xiàn)代生物技術(shù)進(jìn)行了兩個(gè)方面的試驗(yàn)研究：第一，研究了秦川牛胎牛和成年時(shí)期的背部肌肉組織的全基因組DNA甲基化修飾圖譜，篩選出甲基化和表達(dá)差異顯著的基因及其作用的信號(hào)通路；第二，研究了與肌肉生長發(fā)育相關(guān)基因（ZBED6及其靶基因IGF2）的遺傳變異及其對黃牛生長性狀的轉(zhuǎn)錄調(diào)控的影響，分析了其組織表達(dá)譜、啟動(dòng)子活性、甲基化水平，以及在細(xì)胞水平上的表觀轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能。 主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下： 1、黃牛肌肉生長發(fā)育相關(guān)甲基化基因的篩選及其功能鑒定 （1）MeDIP-Seq分析牛肌肉組織的全基因組甲基化圖譜：首次繪制出牛2個(gè)關(guān)鍵生長發(fā)育時(shí)期（胎牛和成年牛）肌肉組織全基因組水平的DNA甲基化圖譜，發(fā)現(xiàn)兩組樣品測序Reads在每條染色體的尾端富集程度高于其他區(qū)域，高甲基化區(qū)域的長度主要集中在900~1000bp，大多含有10~15個(gè)CpG，高甲基化區(qū)域在5’非翻譯區(qū)（5’UTR）和編碼區(qū)（CDS）基因元件上覆蓋度（即覆蓋堿基數(shù)與該區(qū)域堿基總數(shù)的比值）最高。 （2）樣品間各表達(dá)水平基因在基因及附近區(qū)域的甲基化修飾分布趨勢：成年牛在基因內(nèi)及其上下游2kb區(qū)域的整體DNA甲基化水平高于胎牛，不同表達(dá)水平基因的DNA甲基化水平不同，基因的表達(dá)水平和其對應(yīng)的DNA甲基化修飾程度呈負(fù)相關(guān)，即基因的mRNA表達(dá)水平越高，其DNA甲基化水平越低，反之亦然。特別是基因的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)最為明顯。 （3）樣品間全基因組表達(dá)差異基因和甲基化差異基因統(tǒng)計(jì)：表達(dá)水平上調(diào)基因有1,885個(gè)，下調(diào)基因有4,889個(gè)；啟動(dòng)子（Promoter）區(qū)域甲基化水平上調(diào)基因有235個(gè)，下調(diào)基因有143個(gè)，該區(qū)域甲基化和表達(dá)水平負(fù)相關(guān)的基因共有77個(gè)�；蝮w（Genebody）區(qū)域甲基化水平上調(diào)基因有3,504個(gè)，下調(diào)基因有2,313個(gè)，該區(qū)域甲基化和表達(dá)水平負(fù)相關(guān)的基因有1054個(gè)。 （4）樣品間全基因組甲基化差異基因的GO功能顯著性富集分析：在Promoter區(qū)143個(gè)下調(diào)基因的分子功能分類中，有1項(xiàng)顯著富集條目，其功能都與甲基轉(zhuǎn)移酶活性相關(guān)。在基因CDS區(qū)1076個(gè)上調(diào)基因的分子功能分類中，有9項(xiàng)顯著富集條目，其中大部分功能都與核苷酸結(jié)合和磷酸酶調(diào)節(jié)活性相關(guān)；792個(gè)下調(diào)基因的分子功能分類中，有8項(xiàng)顯著富集條目，其中大部分功能都與核苷酸結(jié)合和運(yùn)輸活性相關(guān)；在生物過程分類中，大部分功能都與甲基轉(zhuǎn)移酶活性相關(guān)，有1項(xiàng)顯著富集條目是移動(dòng)。 （5）樣品間全基因組甲基化差異基因的通路（Pathway）顯著性富集分析：在Promoter區(qū)，下調(diào)基因參與的通路有93個(gè)，上調(diào)基因參與的通路有143個(gè)，均無顯著富集的通路；在CDS區(qū)，下調(diào)基因參與的通路有195個(gè)，顯著富集的通路是粘著斑，有34個(gè)下調(diào)基因顯著富集到該通路；上調(diào)基因參與的通路有209個(gè)；無顯著富集的通路。 （6）樣品間全基因組表達(dá)和甲基化負(fù)相關(guān)基因的GO功能顯著性富集分析：兩組樣品在基因Promoter和Gene body區(qū)域負(fù)相關(guān)基因都沒有顯著富集的GO項(xiàng)。 （7）樣品間全基因組表達(dá)和甲基化負(fù)相關(guān)基因的通路（Pathway）分析：在Promoter區(qū)，77個(gè)負(fù)相關(guān)基因參與的通路有81個(gè)，顯著性富集通路有2個(gè)，分別是檸檬酸循環(huán)和軸突導(dǎo)向。在Gene body區(qū)，1054個(gè)負(fù)相關(guān)基因參與的通路有204個(gè)，顯著性富集通路有3個(gè)，分別是緊密連接，調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架和維生素的消化和吸收。 （8）樣品間全基因組啟動(dòng)子區(qū)表達(dá)和甲基化負(fù)相關(guān)基因的定量驗(yàn)證分析：利用QPCR技術(shù)在秦川牛3個(gè)不同發(fā)育時(shí)期9種不同組織中，，對啟動(dòng)子區(qū)負(fù)相關(guān)的48個(gè)基因進(jìn)行了表達(dá)譜分析，其中有45個(gè)基因的定量驗(yàn)證結(jié)果和甲基化測序結(jié)果一致。 2、黃牛IGF2和ZBED6基因mRNA表達(dá)及其與DNA甲基化水平相關(guān)性研究 利用QPCR、BSP和COBRA分析發(fā)現(xiàn)：牛IGF2和ZBED6基因在2個(gè)發(fā)育時(shí)期6中組織中mRNA表達(dá)量和甲基化水平呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，以胎牛時(shí)期的表達(dá)量和甲基化水平為對照組，ZBED6在肝臟、肺臟和脾臟的mRNA表達(dá)量均有所上升，而DNA甲基化水平均有所下降；IGF2在肌肉、心臟、肺臟和脾臟的表達(dá)量均有所下降，而甲基化水平均有所上升。 3、黃牛IGF2和ZBED6基因SNPs檢測及其與生長性狀的效應(yīng)分析 本研究利用DNA池測序分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在IGF2基因內(nèi)含子8區(qū)域發(fā)現(xiàn)4處非編碼突變，分別命名為IVS8-17GA，-220CT，-221AG和-1393AG。在ZBED6基因上游區(qū)域發(fā)現(xiàn)1處非編碼突變和編碼區(qū)發(fā)現(xiàn)2處錯(cuò)義突變，分別命名為-826GA，680CG和1043AG；關(guān)聯(lián)分析結(jié)果顯示：在南陽牛和郟縣紅牛群體中，不同基因型對5個(gè)關(guān)鍵生長發(fā)育時(shí)期的體重顯著相關(guān)；在秦川牛群體中，不同基因型與成年基礎(chǔ)母牛的10項(xiàng)體尺和體重指標(biāo)性狀顯著相關(guān)；兩個(gè)基因的突變型個(gè)體大于野生型個(gè)體（P0.01或者P0.05）。 4、轉(zhuǎn)錄因子ZBED6對IGF2基因轉(zhuǎn)錄活性及調(diào)控特征的研究 （1）生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示，在ZBED6基因啟動(dòng)子突變型M-826A的序列上，發(fā)現(xiàn)一個(gè)新結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子PLZF，PLZF可能作為抑制因子參與了抑制ZBED6的轉(zhuǎn)錄活性，而參與上調(diào)動(dòng)物機(jī)體的造血功能，脂肪和肌肉細(xì)胞增殖及分化過程。 （2）雙熒光素酶檢測系統(tǒng)的檢測結(jié)果顯示：在啟動(dòng)子-866bp到-556bp位置之間的片段活性最高，野生型M-826G-pGL3的啟動(dòng)子活性顯著高于突變型。IGF2基因IVS3-3106GA突變后的3個(gè)不同長度片段的啟動(dòng)子序列的活性顯著上調(diào)，其中長度為439bp啟動(dòng)子截短體序列的活性最強(qiáng)；過表達(dá)ZBED6基因?qū)GF2基因的啟動(dòng)子活性有極顯著的下調(diào)作用。 （3）QPCR分析結(jié)果顯示：ZBED6基因編碼區(qū)發(fā)生突變的單倍型個(gè)體在秦川牛肌肉組織中的mRNA表達(dá)量顯著下降，IGF2基因mRNA表達(dá)量顯著上升。在體外培養(yǎng)的C2C12細(xì)胞中，過表達(dá)ZBED6可引起IGF2基因mRNA表達(dá)量顯著上升。 以上結(jié)果可知，轉(zhuǎn)錄因子ZBED6可與IGF2基因內(nèi)含子3區(qū)域突變位點(diǎn)（3106A）附近的序列結(jié)合來發(fā)揮其對IGF2基因轉(zhuǎn)錄活性的抑制調(diào)控功能。 5、抑制因子ZBED6基因腺病毒干擾載體的構(gòu)建及其功能研究 篩選出具有明顯干擾效果的shRNA（pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA-906）并進(jìn)行了病毒重組和包裝；重組的腺病毒干擾載體感染牛原代肌肉細(xì)胞，QPCR、半定量PCR和Western blot的檢測結(jié)果顯示，ZBED6表達(dá)量下調(diào)，IGF2基因表達(dá)量明顯上調(diào)，揭示了干擾轉(zhuǎn)錄因子ZBED6，可失去其對IGF2基因的抑制作用。 6、抑制因子ZBED6基因腺病毒過表達(dá)載體的構(gòu)建及其功能研究 構(gòu)建了牛Ad-ZBED6重組腺病毒超表達(dá)載體；包裝和擴(kuò)繁得到高滴度的超表達(dá)腺病毒；重組的過表達(dá)腺病毒Ad-ZBED6感染牛原代肌肉細(xì)胞，QPCR、半定量PCR和Westernblot的檢測結(jié)果顯示，ZBED6表達(dá)量上調(diào)，IGF2基因表達(dá)量明顯下調(diào)，揭示了過表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子ZBED6可增加其對IGF2基因的抑制作用。 以上的研究結(jié)果顯示，在黃牛不同發(fā)育時(shí)期的肌肉組織中存在大量DNA甲基化修飾和mRNA表達(dá)差異的基因，這些差異基因主要與肌肉細(xì)胞的生長分化和代謝相關(guān)；在細(xì)胞、個(gè)體和群體水平上鑒定了與肌肉生長發(fā)育相關(guān)的功能基因ZBED6及其靶基因IGF2，研究這兩個(gè)關(guān)鍵基因在轉(zhuǎn)錄前、轉(zhuǎn)錄后和翻譯過程中的相互調(diào)控作用，從而系統(tǒng)地從遺傳和表觀遺傳調(diào)控等方面揭示與肌肉生長發(fā)育相關(guān)基因的功能與分子調(diào)控機(jī)制，這不僅對全方位闡明黃牛肉用性狀遺傳和調(diào)控的分子機(jī)理具有重要科學(xué)意義，而且為黃牛肉用選育和高效生產(chǎn)提供科學(xué)理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：黃牛 肌肉 MeDIP-Seq 甲基化 ZBED6基因
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：S823.81
【目錄】：

• 摘要6-9
• ABSTRACT9-18
• 前言18-19
• 文獻(xiàn)綜述19-36
• 第一章 表觀遺傳學(xué)和 DNA 甲基化研究概述19-30
• 1.1 表觀遺傳學(xué)研究概述19-20
• 1.1.1 表觀遺傳學(xué)與表觀遺傳19
• 1.1.2 表觀遺傳學(xué)的研究內(nèi)容及其特點(diǎn)19-20
• 1.2 表觀遺傳學(xué)所涉及的主要機(jī)制20-24
• 1.2.1 DNA 甲基化20-21
• 1.2.2 非編碼 RNA 調(diào)控!21-23
• 1.2.3 組蛋白修飾23-24
• 1.2.4 染色質(zhì)重塑24
• 1.3 DNA 甲基化抑制基因表達(dá)的機(jī)制24-25
• 1.4 DNA 甲基化的生物學(xué)功能25-26
• 1.4.1 維持基因組穩(wěn)定25
• 1.4.2 調(diào)控基因表達(dá)25
• 1.4.3 參與其它表觀遺傳學(xué)修飾25
• 1.4.4 調(diào)節(jié)動(dòng)物生長發(fā)育25
• 1.4.5 影響雜種優(yōu)勢25-26
• 1.4.6 影響老化26
• 1.5 DNA 甲基化的檢測方法26-29
• 1.5.1 DNA 甲基化與 CpG 島26
• 1.5.2 全基因組甲基化模式（pattern）與甲基化譜（profiling）分析26-27
• 1.5.3 候選基因特異位點(diǎn)甲基化水平分析27-29
• 1.6 小結(jié)29-30
• 第二章 印跡基因 IGF2 和轉(zhuǎn)錄因子 ZBED6 研究概述30-36
• 2.1 IGF2 基因的研究概述30-31
• 2.1.1 IGFs 系統(tǒng)的組成及其生物學(xué)功能30
• 2.1.2 IGF2 基因的印跡調(diào)控現(xiàn)象30-31
• 2.1.3 IGF2 基因與肌肉生長發(fā)育的關(guān)系31
• 2.2 ZBED6 基因的研究概述31-35
• 2.2.1 鋅指蛋白的結(jié)構(gòu)與功能31-32
• 2.2.2 ZBED 基因家族成員概述32-33
• 2.2.3 ZBED6 基因的發(fā)現(xiàn)33-35
• 2.2.4 ZBED6 基因的功能35
• 2.3 小結(jié)35-36
• 實(shí)驗(yàn)研究36-174
• 第三章 黃牛肌肉生長發(fā)育相關(guān)甲基化基因的篩選及其功能鑒定36-89
• 3.1 材料與方法37-41
• 3.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物37
• 3.1.2 樣品采集37
• 3.1.3 RNA 的提取、檢測和 cDNA 合成37
• 3.1.4 DNA 的提取與檢測37-38
• 3.1.5 實(shí)時(shí)定量 PCR（QPCR）分析38-39
• 3.1.6 MeDIP-Seq 文庫制備流程39-40
• 3.1.7 MeDIP-Seq 信息分析流程40-41
• 3.2 MeDIP-Seq 高通量信息分析41-44
• 3.2.1 MeDIP-Seq 數(shù)據(jù)處理41-42
• 3.2.2 MeDIP-Seq 序列與參考序列的比對42
• 3.2.3 MeDIP-Seq 數(shù)據(jù)的全基因組分布趨勢42
• 3.2.4 MeDIP-Seq 數(shù)據(jù)高甲基化富集區(qū)域（Peak）分析42-43
• 3.2.5 基于高甲基化富集區(qū)域（Peak）的兩個(gè)樣品間差異性分析43-44
• 3.3 MeDIP-Seq 和 RNA-Seq 的聯(lián)合分析44-46
• 3.3.1 Reads 在基因組上的比對情況及分布44
• 3.3.2 全基因組水平上基因表達(dá)與甲基化的分布規(guī)律44-45
• 3.3.3 各表達(dá)水平基因在基因及附近區(qū)域的甲基化修飾45
• 3.3.4 各類甲基化修飾區(qū)域基因的平均表達(dá)水平45
• 3.3.5 樣品間基因甲基化修飾對表達(dá)的調(diào)控45-46
• 3.3.6 兩樣品間甲基化與表達(dá)呈負(fù)相關(guān)的基因的功能分析46
• 3.4 MeDIP-Seq 高通量測序結(jié)果與分析46-65
• 3.4.1 �；蚪M DNA 樣品的檢測46-47
• 3.4.2 MeDIP-Seq 數(shù)據(jù)處理47
• 3.4.3 MeDIP-Seq 序列與參考序列的比對47
• 3.4.4 MeDIP-Seq 測序數(shù)據(jù)全基因組分布趨勢47-53
• 3.4.5 MeDIP-Seq 數(shù)據(jù)高甲基化富集區(qū)域（Peak）分析53-58
• 3.4.6 基于高甲基化區(qū)域（Peak）的多樣品間甲基化差異性分析58-65
• 3.5 MeDIP-Seq 和 RNA-Seq 測序結(jié)果及其聯(lián)合分析65-86
• 3.5.1 Reads 在基因組上的比對情況及分布65-67
• 3.5.2 全基因組水平上基因表達(dá)與甲基化的分布規(guī)律67-69
• 3.5.3 各表達(dá)水平基因在基因及附近區(qū)域的甲基化修飾69-71
• 3.5.4 各類甲基化修飾區(qū)域基因的平均表達(dá)水平71-73
• 3.5.5 樣品間基因甲基化修飾對表達(dá)的調(diào)控73-75
• 3.5.6 兩樣品間甲基化與表達(dá)呈負(fù)相關(guān)的基因的功能分析75-78
• 3.5.7 兩樣品間啟動(dòng)子區(qū)甲基化與表達(dá)呈負(fù)相關(guān)的基因的 QPCR 驗(yàn)證分析78-86
• 3.6 討論86-87
• 3.7 小結(jié)87-89
• 第四章 黃牛 IGF2 和 ZBED6 基因 mRNA 表達(dá)及其與 DNA 甲基化水平相關(guān)性研究89-106
• 4.1 材料與方法89-96
• 4.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物89
• 4.1.2 樣品采集89-90
• 4.1.3 RNA 的提取、檢測和 cDNA 合成90
• 4.1.4 DNA 的提取與檢測90
• 4.1.5 實(shí)時(shí)定量 PCR（QPCR）分析90
• 4.1.6 亞硫酸氫鹽測序 PCR（BSP）90-92
• 4.1.7 結(jié)合重亞硫酸鹽處理和酶切（COBRA）分析92-96
• 4.1.8 統(tǒng)計(jì)分析96
• 4.2 結(jié)果96-104
• 4.2.1 實(shí)時(shí)定量 PCR（QPCR）分析96-98
• 4.2.2 亞硫酸氫鹽測序 PCR（BSP）分析98-102
• 4.2.3 結(jié)合重亞硫酸鹽處理和酶切（COBRA）分析102-104
• 4.3 討論104-105
• 4.4 小結(jié)105-106
• 第五章 黃牛 IGF2 和 ZBED6 基因 SNPs 檢測及其與生長性狀的效應(yīng)分析106-122
• 5.1 材料與方法106-109
• 5.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物106-107
• 5.1.2 主要試劑107-108
• 5.1.3 候選基因 SNPs 的篩查108
• 5.1.4 資料的統(tǒng)計(jì)與分析108-109
• 5.2 結(jié)果與分析109-120
• 5.2.1 候選基因DNA池測序分析109
• 5.2.2 利用Forced PCR-RFLP檢測SNPs109-112
• 5.2.3 候選基因SNPs的群體遺傳參數(shù)分析112-113
• 5.2.4 候選基因SNPs的連鎖不平衡和單倍型分析113-116
• 5.2.5 候選基因SNPs與生長性狀的關(guān)聯(lián)分析116-119
• 5.2.6 候選基因SNPs組合基因型與生長性狀的關(guān)聯(lián)分析119-120
• 5.3 討論120-121
• 5.4 小結(jié)121-122
• 第六章 轉(zhuǎn)錄因子 ZBED6 對 IGF2 基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究122-144
• 6.1 材料與方法122-133
• 6.1.1 試驗(yàn)材料122-123
• 6.1.2 試驗(yàn)儀器123
• 6.1.3 試劑配制123
• 6.1.4 生物信息學(xué)分析轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)123
• 6.1.5 雙色熒光報(bào)告載體的構(gòu)建123-129
• 6.1.6 過表達(dá)載體的構(gòu)建129-131
• 6.1.7 細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染131-132
• 6.1.8 熒光素酶活性分析132
• 6.1.9 實(shí)時(shí)定量 PCR（QPCR）分析132-133
• 6.1.10 Western Blot 分析133
• 6.1.11 統(tǒng)計(jì)分析133
• 6.2 結(jié)果133-142
• 6.2.1 ZBED6 基因啟動(dòng)子區(qū)域轉(zhuǎn)錄因子分析133-134
• 6.2.2 ZBED6 基因啟動(dòng)子區(qū)域活性分析134-137
• 6.2.3 IGF2 基因定點(diǎn)突變重組體啟動(dòng)子活性分析137
• 6.2.4 過表達(dá) ZBED6 對 IGF2 啟動(dòng)子活性的影響137-139
• 6.2.5 不同單倍型個(gè)體 ZBED6 和 IGF2 表達(dá)量比較139-140
• 6.2.6 ZBED6 對 IGF2 轉(zhuǎn)錄調(diào)控的影響140-142
• 6.3 討論142-143
• 6.4 小結(jié)143-144
• 第七章 ZBED6 基因腺病毒干擾載體的構(gòu)建及其功能研究144-161
• 7.1 材料與方法144-153
• 7.1.1 試驗(yàn)材料144-145
• 7.1.2 試驗(yàn)儀器145
• 7.1.3 pDsRed1-N1-ZBED6 表達(dá)載體的構(gòu)建145-148
• 7.1.4 pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA 載體的構(gòu)建148-151
• 7.1.5 有效 shRNA 序列的篩選151
• 7.1.6 重組 ZBED6-shRNA 腺病毒載體構(gòu)建與鑒定151-152
• 7.1.7 重組 shRNA 腺病毒包裝、擴(kuò)增及滴度測定152
• 7.1.8 重組 shRNA 腺病毒的滴度測定152
• 7.1.9 最佳感染強(qiáng)度的確定152-153
• 7.1.10 牛原代肌肉細(xì)胞的培養(yǎng)153
• 7.1.11 重組 shRNA 腺病毒干擾效果研究153
• 7.2 結(jié)果與分析153-160
• 7.2.1 pDsRed1-N1-ZBED6 載體的構(gòu)建153
• 7.2.2 pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA 載體的構(gòu)建153-155
• 7.2.3 有效 shRNA 的篩選155-156
• 7.2.4 重組 shRNA 腺病毒載體的包裝及擴(kuò)增156-157
• 7.2.5 重組 shRNA 腺病毒滴度測定157-158
• 7.2.6 最佳感染強(qiáng)度的確定158
• 7.2.7 重組 shRNA 腺病毒載體的干擾效率158
• 7.2.8 重組 shRNA 腺病毒載體干擾效果研究158-160
• 7.3 討論160
• 7.4 小結(jié)160-161
• 第八章 ZBED6 基因腺病毒過表達(dá)載體的構(gòu)建及其功能研究161-172
• 8.1 材料與方法161-166
• 8.1.1 試驗(yàn)材料161-162
• 8.1.2 試驗(yàn)儀器162
• 8.1.3 腺病毒穿梭載體 pAdTrack/CMV-ZBED6 構(gòu)建162-164
• 8.1.4 腺病毒穿梭載體 Pme I 線性化164
• 8.1.5 腺病毒穿梭載體與骨架載體 pAdEasy-1 的重組164-166
• 8.1.6 重組腺病毒 Ad-ZBED6 的包裝與擴(kuò)增166
• 8.1.7 重組腺病毒 Ad-ZBED6 滴度測定166
• 8.1.8 最佳感染強(qiáng)度的確定166
• 8.1.9 重組腺病毒 Ad-ZBED6 的功能研究166
• 8.2 結(jié)果與分析166-171
• 8.2.1 穿梭載體 pAdTrack/CMV-ZBED6 的構(gòu)建166
• 8.2.2 重組質(zhì)粒 Ad-ZBED6 的 Pac I 酶切鑒定166-167
• 8.2.3 腺病毒載體 Ad-ZBED6 的包裝及擴(kuò)增167-168
• 8.2.4 重組過表達(dá)腺病毒滴度測定168-169
• 8.2.5 最佳感染強(qiáng)度的確定169
• 8.2.6 重組腺病毒 Ad-ZBED6 的超表達(dá)效率169
• 8.2.7 重組腺病毒 Ad-ZBED6 的功能研究169-171
• 8.3 討論171
• 8.4 小結(jié)171-172
• 第九章 結(jié)論與創(chuàng)新點(diǎn)172-174
• 9.1 結(jié)論172-173
• 9.2 創(chuàng)新點(diǎn)173-174
• 參考文獻(xiàn)174-187
• 附錄（第三章）187-228
• 附錄（第四章）228-230
• 附錄（第五章）230-256
• 附錄（第六章）256-281
• 附錄（第七章）281-287
• 縮略詞287-289
• 致謝289-290
• 個(gè)人簡介290-293

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 陳英;白小青;李軍峰;王金勇;;不同體重階段榮昌豬基因組DNA甲基化水平檢測[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2009年09期

2 張立嶺,菊林花,楊麗君;蒙古羊胸椎數(shù)的親本印記遺傳研究[J];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2000年02期

3 馮凱;石福岳;孫露露;潘雨來;胡春輝;吳信生;;家兔骨形態(tài)發(fā)生蛋白4基因(BMP4)啟動(dòng)子甲基化與雜種優(yōu)勢的關(guān)系[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào);2012年05期

4 蔣曹德,鄧昌彥,熊遠(yuǎn)著;DNA甲基化差異對豬生長性狀的影響[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2005年02期

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7 潘增祥;劉振山;李隱俠;于莎莉;李明桂;謝莊;李齊發(fā);;犏牛及其親本睪丸組織中印記基因SNRPN DMR甲基化與mRNA表達(dá)差異研究[J];中國農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年22期

  本文關(guān)鍵詞：黃牛肌肉生長發(fā)育相關(guān)基因甲基化鑒定及IGF2和ZBED6基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：369731