柑橘全爪螨Panonychus citri （McGregor）是我國柑橘產(chǎn)區(qū)的第一大害螨,其大量發(fā)生嚴重影響柑橘的產(chǎn)量和品質(zhì),且以化學(xué)防治為主的控制措施加之該螨自身的特點（繁殖速度快、體小、活動范圍小等）,導(dǎo)致其抗性問題日益凸顯。目前,對于相橘全爪螨解毒代謝及抗藥性機理的報道相對較少,且多集中在生化水平及有限基因的鑒定方面。細胞色素P450酶系作為昆蟲（螨）體內(nèi)一類關(guān)鍵解毒酶系,可代謝多種內(nèi)源和外源化合物,在昆蟲（螨）對殺蟲（螨）劑解毒代謝過程中起著十分重要的作用。諸多研究表明,蜱螨P450與擬除蟲菊酯類、有機磷類、METIs、季酮酸類、生物源類等多種殺螨劑抗性有關(guān)。國內(nèi)外有關(guān)細胞色素P450酶系的研究多針對P450的特性展開,而對于酶系發(fā)揮作用的關(guān)鍵因子NADPH-細胞色素P450還原酶（CRP）和細胞色素b5（CYB5）的作用地位涉及相對較少。因此,對細胞色素P450酶系進行整體研究,將有利于全面理解細胞色素P450酶及其相關(guān)基因在解毒代謝過程中的作用方式和具體定位,從而為全面解析其解毒代謝及介導(dǎo)的代謝抗性機制奠定理論基礎(chǔ)。本學(xué)位論文以柑橘全爪螨為研究對象,圍繞細胞色素P450對... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

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中文摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1 柑橘全爪螨的為害現(xiàn)狀及抗性問題
    2 昆蟲（螨）抗性機制的研究
    3 細胞色素P450酶系
    4 轉(zhuǎn)錄組學(xué)在昆蟲（螨）抗藥性研究中的應(yīng)用
    5 昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)在P450功能研究中的應(yīng)用
前言
    1 論文的研究背景及意義
    2 論文的研究思路與總體框架
第二章 柑橘全爪螨抗藥性監(jiān)測及主要解毒酶活性比較
    第一節(jié) 柑橘全爪螨四個種群田間抗藥性測定
        1 材料與方法
            1.1 供試螨源
            1.2 供試主要試劑和儀器
            1.3 生物測定
            1.4 數(shù)據(jù)分析
        2 結(jié)果與分析
        3 小結(jié)
    第二節(jié) 柑橘全爪螨主要解毒酶活性比較
        1 材料與方法
            1.1 供試螨源
            1.2 供試主要試劑和儀器
            1.3 不同發(fā)育階段螨源的收集
            1.4 不同種群螨源的收集
            1.5 柑橘全爪螨的藥劑脅迫和誘導(dǎo)
            1.6 主要解毒酶活性測定
            1.7 數(shù)據(jù)分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 柑橘全爪螨P450s活性分析
            2.2 柑橘全爪螨GSTs活性分析
            2.3 柑橘全爪螨CarEs活性分析
        3 小結(jié)
    本章討論
        1 田間種群抗性監(jiān)測
        2 主要解毒酶活性研究
第三章 柑橘全爪螨轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫建立和解毒酶基因的篩選鑒定
    1 材料與方法
        1.1 供試螨源
        1.2 供試主要試劑（盒）和儀器
        1.3 柑橘全爪螨總RNA的提取
        1.4 柑橘全爪螨轉(zhuǎn)錄組測序及數(shù)據(jù)分析
        1.5 解毒酶基因鑒定及通路分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 柑橘全爪螨總RNA的提取質(zhì)量
        2.2 柑橘全爪螨轉(zhuǎn)錄組測序情況分析
        2.3 功能注釋
        2.4 柑橘全爪螨解毒酶基因鑒定及通路分析
    3 小結(jié)
    本章討論
第四章 柑橘全爪螨細胞色素P450及其相關(guān)基因的克隆與序列分析
    第一節(jié) 基于轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的柑橘全爪螨P450基因cDNA的克隆及序列分析
        1 材料與方法
            1.1 供試螨源
            1.2 供試主要試劑（盒）和儀器
            1.3 總RNA提取
            1.4 第一鏈cDNA的合成
            1.5 引物設(shè)計
            1.6 PCR擴增
            1.7 柑橘全爪螨P450基因序列及系統(tǒng)發(fā)育分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 柑橘全爪螨P450基因cDNA全長的獲得
            2.2 柑橘全爪螨P450基因cDNA序列的生物信息學(xué)分析
            2.3 柑橘全爪螨P450基因同源性分析
            2.4 柑橘全爪螨P450基因系統(tǒng)發(fā)育分析
        3 小結(jié)
5基因cDNA的克隆及序列分析">    第二節(jié) 柑橘全爪螨細胞色素P450還原酶和細胞色素b₅基因cDNA的克隆及序列分析
        1 材料與方法
            1.1 供試螨源
            1.2 供試主要試劑（盒）和儀器
            1.3 總RNA提取
            1.4 第一鏈cDNA的合成
            1.5 引物設(shè)計
            1.6 PCR擴增、產(chǎn)物克隆及測序
            1.7 柑橘全爪螨CPR和CYB5基因序列及系統(tǒng)發(fā)育分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 柑橘全爪螨CPR和CYB5基因cDNA序列分析
            2.2 柑橘全爪螨CPR和CYB5基因系統(tǒng)發(fā)育分析
        3 小結(jié)
    本章討論
        1 細胞色素P450的集團分類及同源結(jié)構(gòu)分析
5的分子生物學(xué)特性">        2 細胞色素P450還原酶和細胞色素b₅的分子生物學(xué)特性
            2.1 細胞色素P450還原酶
5">            2.2 細胞色素b5

第五章 柑橘全爪螨細胞色素P450及其相關(guān)基因的表達模式研究
    第一節(jié) 柑橘全爪螨P450基因的表達模式解析
        1 材料與方法
            1.1 供試螨源
            1.2 供試主要試劑（盒）和儀器
            1.3 不同發(fā)育階段螨源的收集
            1.4 藥劑脅迫和誘導(dǎo)
            1.5 總RNA提取
            1.6 第一鏈cDNA合成
            1.7 引物設(shè)計及內(nèi)參基因選擇
            1.8 引物熔解曲線及擴增效率分析
            1.9 定量PCR
            1.10 數(shù)據(jù)分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 擴增產(chǎn)物熔解曲線及引物擴增效率
            2.2 柑橘全爪螨不同發(fā)育階段P450基因的表達模式
            2.3 柑橘全爪螨P450基因?qū)λ巹┟{迫的響應(yīng)表達模式
            2.4 柑橘全爪螨P450基因?qū)Π捅韧姿徕c誘導(dǎo)響應(yīng)的表達模式
        3 小結(jié)
    第二節(jié) 柑橘全爪螨CPR和CYB5基因的表達模式解析
        1 材料與方法
            1.1 供試螨源
            1.2 供試主要試劑（盒）和儀器
            1.3 不同發(fā)育階段螨源的收集
            1.4 柑橘全爪螨的藥劑脅迫和誘導(dǎo)
            1.5 總RNA提取和第一鏈cDNA合成
            1.6 引物設(shè)計及內(nèi)參基因選擇
            1.7 引物熔解曲線及擴增效率分析
            1.8 定量PCR
            1.9 數(shù)據(jù)分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 擴增產(chǎn)物熔解曲線及引物擴增效率
            2.2 柑橘全爪螨不同發(fā)育階段PcCPR和PcCYB5基因的表達模式
            2.3 柑橘全爪螨PcCPR和PcCYB5基因?qū)λ巹┟{迫響應(yīng)的表達模式
            2.4 柑橘全爪螨PcCPR和PcCYB5基因?qū)Π捅韧姿徕c誘導(dǎo)響應(yīng)的表達模式
        3 小結(jié)
    本章討論
        1 細胞色素P450基因的表達模式
5基因的表達模式">        2 細胞色素P450還原酶和細胞色素b₅基因的表達模式
            2.1 細胞色素P450還原酶
5">            2.2 細胞色素b₅

第六章 柑橘全爪螨細胞色素P450基因的真核表達
    1 材料與方法
        1.1 供試主要試劑盒和儀器
        1.2 細胞培養(yǎng)
        1.3 PCR擴增及pMD-19T Simple載體構(gòu)建
        1.4 表達載體構(gòu)建
        1.5 細胞轉(zhuǎn)染及病毒株獲取
        1.6 P450重組蛋白表達及含量測定
    2 結(jié)果與分析
        2.1 柑橘全爪螨P450基因與pMD-19T Simple重組載體構(gòu)建
        2.2 pFastBac-CYP392A24和pFastBac-CYP392F1重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.3 Bacmid-CYP392A24和Bacmid-CYP392F1重組桿粒的構(gòu)建
        2.4 重組桿粒對昆蟲細胞的轉(zhuǎn)染
        2.5 CYP392A24和CYP392F1重組蛋白的表達及含量測定
    3 小結(jié)
    本章討論
第七章 主要結(jié)論、創(chuàng)新點及研究展望
    1 主要結(jié)論
        1.1 明確了重慶地區(qū)柑橘全爪螨對主要藥劑的抗性水平
        1.2 掌握了主要解毒酶系在柑橘全爪螨不同螨態(tài)和不同藥劑下的活性變化情況
        1.3 構(gòu)建了柑橘全爪螨全螨態(tài)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫
        1.4 篩選鑒定出了柑橘全爪螨主要解毒酶基因和代謝通路信息
        1.5 克隆獲得了柑橘全爪螨11個P450基因及CPR和CYB5基因
        1.6 解析了P450及CPR、CYB5基因在不同螨態(tài)的表達模式
        1.7 明確了P450及CPR、CYB5基因?qū)Σ煌巹┟{迫及誘導(dǎo)的響應(yīng)模式
        1.8 初步構(gòu)建了柑橘全爪螨P450的真核表達體系
    2 創(chuàng)新點
    3 展望
參考文獻
在讀期間發(fā)表論文目錄及參研課題情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]基于新一代測序技術(shù)的昆蟲轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究進展[J]. 張棋麟,袁明龍.  昆蟲學(xué)報. 2013(12)
[2]幾種代謝酶基因與柑橘全爪螨對雙甲脒抗性的關(guān)系[J]. 陳飛,張云飛,劉浩強,李鴻筠,冉春.  植物保護學(xué)報. 2013(02)
[3]柑橘全爪螨兩個田間種群抗性監(jiān)測及羧酸酯酶生化特性研究[J]. 張昆,丁天波,楊爵銘,豆威,王進軍.  應(yīng)用昆蟲學(xué)報. 2013(02)
[4]橘全爪螨對雙甲脒的抗性選育及其P450基因的表達差異分析[J]. 冉春,江高飛,劉斌,劉浩強,李鴻筠,王進軍.  昆蟲學(xué)報. 2012(06)
[5]柑橘全爪螨田間種群敏感性測定及三種主要解毒酶活性比較[J]. 丁天波,牛金志,夏文凱,孫倩倩,豆威,王進軍.  應(yīng)用昆蟲學(xué)報. 2012(02)
[6]基于Solexa高通量測序的黃曲條跳甲轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究[J]. 賀華良,賓淑英,吳仲真,林進添.  昆蟲學(xué)報. 2012(01)
[7]德國小蠊谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶在不同發(fā)育階段活性變化及其在野外種群中的水平[J]. 李秋紅,錢坤,周小潔,曾曉芃,高希武.  中國媒介生物學(xué)及控制雜志. 2011(05)
[8]二斑葉螨對甲氰菊酯的抗性選育及解毒酶活力變化[J]. 高新菊,沈慧敏.  昆蟲學(xué)報. 2011(01)
[9]柑橘全爪螨對4種殺螨劑的抗性監(jiān)測及增效作用[J]. 劉永華,蔣紅波,袁明龍,樊鈺虎,楊麗紅,陳靜,王進軍.  果樹學(xué)報. 2010(04)
[10]桔全爪螨田間種群對殺螨劑的敏感性[J]. 冉春,陳洋,袁明龍,王進軍,劉浩強,姚廷山.  植物保護學(xué)報. 2008(06)

博士論文
[1]桔小實蠅消化和解毒代謝相關(guān)基因鑒定及其對藥劑脅迫的應(yīng)激反應(yīng)[D]. 申光茂.西南大學(xué) 2013
[2]桔小實蠅GSTs生化及分子毒理學(xué)特性研究[D]. 胡飛.西南大學(xué) 2012
[3]柑橘全爪螨Panonychus citri（McGregor）對熱脅迫的響應(yīng)機制研究[D]. 楊麗紅.西南大學(xué) 2011
[4]桔全爪螨對甲氰菊酯和阿維菌素的抗性及其酯酶基因的克隆與表達研究[D]. 何恒果.西南大學(xué) 2010
[5]嗜卷書虱P450基因的分子生物學(xué)特性及其異源表達研究[D]. 蔣紅波.西南大學(xué) 2010
[6]3種書虱酯酶基因的克隆及其mRNA表達水平研究[D]. 唐培安.西南大學(xué) 2009
[7]植物次生物質(zhì)對棉鈴蟲細胞色素P450s的誘導(dǎo)及CYP6B6基因的克隆與表達[D]. 劉小寧.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005
[8]小菜蛾抗阿維菌素品系細胞色素P450的研究[D]. 黃劍.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2005
[9]棉鈴蟲細胞色素P450的誘導(dǎo)、純化及其性質(zhì)研究[D]. 鄭明奇.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 2003

碩士論文
[1]棉鈴蟲NADPH-細胞色素P450還原酶基因的克隆、時空表達及RNA干擾[D]. 汪丹.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[2]家蠶和野桑蠶解毒酶活性的比較及野桑蠶CYP9A20V1基因的克隆與表達[D]. 徐生才.蘇州大學(xué) 2009



本文編號：3066273

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