背景:TRPC6是經(jīng)典瞬時受體電位通道家族成員之一,在哺乳動物的腦、心臟、腎臟和肺等多種組織器官中均有表達,并且在血管平滑肌收縮、足細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、中樞神經(jīng)發(fā)育和疼痛調(diào)節(jié)等多種生理過程中發(fā)揮重要的作用。TRPC6蛋白作為組成細胞膜Ca²⁺通道的分子基礎(chǔ),其基因變異導(dǎo)致的蛋白異常表達可引起細胞內(nèi)Ca²⁺信號通路改變,從而導(dǎo)致心肌肥厚、肺動脈收縮、神經(jīng)元發(fā)育異常、腫瘤細胞增殖等多種病理改變,誘發(fā)多種疾病。TRPC6作為眾多疾病的潛在治療靶點,其小分子調(diào)節(jié)劑逐漸成為新藥研究的熱點之一。然而,由于TRPC家族成員眾多,且不同成員間氨基酸序列同源性較高,因此有關(guān)TRPC6特異性小分子調(diào)節(jié)劑的報道并不多見。目的:使用計算機輔助藥物設(shè)計（computer aided drug design,CADD）的方法從天然小分子化合物庫中虛擬篩選可能和TRPC6蛋白結(jié)合的小分子化合物;運用分子間相互作用分析技術(shù)測定TRPC6蛋白和小分子化合物間的相互作用;建立過表達TRPC6蛋白的工具細胞,通過檢測細胞內(nèi)鈣離子濃度(intracellular calcium conc... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：132 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

IRX模板與TRPC6序列的對比分析

空軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文-32-圖3.化合物和不同口袋結(jié)合示意圖。（A）化合物和2號口袋結(jié)合（B）化合物和3號口袋結(jié)合（C）化合物和10號口袋結(jié)合（D）化合和13號口袋結(jié)合（E）化合物和31號口袋結(jié)合（F）化合物和18、19、32號口袋結(jié)合，淺綠色標記區(qū)域為18號

空軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文-52-1:5000），將膜放入一抗工作液中，4℃孵育過夜。10）二抗孵育：PBST洗除一抗10min×3次，二抗（PBST稀釋，1:5000）室溫搖床上孵育1.5h。11）化學(xué)發(fā)光：PBST洗除二抗10min×3次，將膜置于化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)中，滴加ECL發(fā)光液，拍照并使用Image-ProPlus6.0軟件分析條帶灰度值。1.2.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析采用SPSS22.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準誤（Mean±SEM）表示，兩組間均數(shù)比較使用兩樣本t檢驗；多組間均數(shù)比較使用單因素方差分析（one-way），組間兩兩比較使用Turkey法。以顯著水平α=0.05，P<0.05（雙側(cè)）表示組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義。1.3結(jié)果采用Western-Blot對各組細胞中TRPC6蛋白的表達量進行檢測，結(jié)果（Fig6）顯示，實驗組（Lv105-TRPC6group）中TRPC6表達量比空白對照組（untreatedgroup）升高6.94倍（P<0.01）。陰性對照組（Lv-controlgroup）與空白對照組（untreatedgroup）比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。表明慢病毒轉(zhuǎn)染成功，TRPC6蛋白在實驗組細胞中過表達，HEK293hTRPC6工具細胞構(gòu)建成功。圖6.慢病毒轉(zhuǎn)染HEK293細胞后，細胞TRPC6表達量顯著上調(diào)。(A)TRPC6的免疫印跡條帶圖；(B)條帶灰度值分析。n=3，**P<0.01。Fig6.TheexpressionofTRPC6wassignificantlyupregulatedafterLv-TRPC6transfectedintoHEK293cells.(A)RepresentativeWesternblotimagesofTRPC6in


本文編號：2995261