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  本文關(guān)鍵詞：靶向表皮生長因子受體的腫瘤生物治療方法研究進展，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)》 2008年

人表皮生長因子受體酪氨酸激酶的克隆表達和酶抑制劑篩選模型的構(gòu)建

張洋  

【摘要】： 表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)屬受體酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase,RTK)家族成員。EGFR在與配基EGF結(jié)合后,誘導(dǎo)受體二聚化,并激活胞內(nèi)區(qū)的酪氨酸激酶和發(fā)生自磷酸化反應(yīng)。 人的EGFR基因定位于第7號染色體的短臂(7p12.3-p12.1),它的編碼產(chǎn)物EGFR由1210個氨基酸組成,是一種分子量約為170 kDa跨膜糖蛋白。其中,712-979位屬于酪氨酸激酶區(qū)。EGFR由含621個氨基酸殘基構(gòu)成的胞外域、23個氨基酸殘基組成的跨膜區(qū)、和具有酪氨酸激酶活性由542個氨基酸殘基形成的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域組成。 EGFR在細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中具有十分重要的作用。許多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展都與EGFR胞內(nèi)酪氨酸激酶的異常表達密切相關(guān)。因此,EGFR胞內(nèi)酪氨酸激酶的抑制劑有可能成為治療腫瘤的有效藥物。 本研究從人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)提取總RNA,采用RT-PCR獲得EGFR酪氨酸激酶(EGFR-TK)催化域的編碼基因。以pET-30a為載體,在E.coli BL21(DE3)中成功克隆并表達了EGFR-TK。采用Ni-NTA親和層析對表達產(chǎn)物進行了純化,通過對酶活性的測定,證明重組EGFR酪氨酸激酶蛋白具有利用ATP催化底物發(fā)生磷酸化反應(yīng)的激酶活性。以該重組激酶為靶位構(gòu)建了酶抑制劑篩選模型,對微生物代謝產(chǎn)物進行了篩選,初篩獲得9株陽性菌株,為研究新型結(jié)構(gòu)的抗腫瘤微生物藥物奠定了基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R96
【目錄】：

縮略語一覽表4-6

中文摘要6-7

英文摘要7-8

前言8-10

材料與方法10-21

結(jié)果21-42

討論42-44

結(jié)論44-45

論文部分參考文獻45-46

文獻綜述46-63

綜述部分參考文獻63-67

已發(fā)表文章67-68

致謝68-69

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本文編號：197064