本文關(guān)鍵詞：銅綠假單胞菌產(chǎn)吩嗪類色素的分離純化及其對赤潮生物生長的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《云南大學》 2012年

滇池細菌優(yōu)勢種抑藻物質(zhì)的分離純化及其抑藻機理

馮陽  

【摘要】：隨著水體富營養(yǎng)化現(xiàn)象的日趨嚴重及有害藻類水華的頻繁暴發(fā),急需探索行之有效的藻類水華控制方法。微生物法具有具有廉價、安全、不破壞水體生態(tài)環(huán)境的特點。利用土著微生物抑制藍藻水華的方法成為目前生物控藻的研究熱點之一。 本文利用分泌物添加法研究了5株滇池水體土著溶藻細菌胞外分泌物對銅綠微囊藻的抑藻效應,發(fā)現(xiàn)編號為N1、N4、N5、W7和Y3的細菌胞外分泌物對藻細胞生長的抑制率分別為79.68%、64.71%、50.80%、37.79%和73.26%。選取其中胞外分泌物抑藻能力最強的N1菌株,從細菌培養(yǎng)、分泌物中活性物質(zhì)的分離、提純、鑒定及其抑藻機理這三個層次開展了系列研究。結(jié)果表明： (1)N1菌株培養(yǎng)條件為72h、pH=7.5時,衰退期的胞外分泌物對銅綠微囊藻的抑制作用較好。 (2)經(jīng)過高溫處理過的N1細菌胞外分泌物,抑藻活性仍然很高,而細菌菌體破碎處理后的抑藻活性較低,高溫處理后,對銅綠微囊藻沒有抑制作用。說明主要的抑藻成分在細菌胞外分泌物中,并表現(xiàn)出熱穩(wěn)定性。 (3)采用液-液萃取法將細菌N1發(fā)酵后的胞外分泌物初步分離為乙酸乙酯相、正丁醇相和水相三個部分,其中乙酸乙酯相、正丁醇相組分對銅綠微囊藻的半致死濃度分別為47.6和71.5mg/L。進一步經(jīng)柱層析分離、薄層層析(TLC)和高效液相色譜(HPLC)檢測(將相同或相似餾分合并)、活性跟蹤,從Ⅱ和V這2個活性較強的組分中提純得到兩個不飽和脂肪酸類化合物(N1-1B和N1-5D),其72h的半致死劑量分別為9.2mg/L和31.0mg/L (4)N1-1B和N1-5D均能降低藻細胞數(shù)量及葉綠素a含量,N1-1B刺激下單個銅綠微囊藻的葉綠素含量比對照組的有明顯的增加。推斷是N1-1B可以抑制藻細胞的分裂,造成細胞內(nèi)的色素積累。兩種化合物均能抑制超氧化物歧化酶(SOD)的活性,導致脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量升高。在后期,N1-1B主要導致藻細胞的過氧化損傷,銅綠微囊藻數(shù)量大大減少。但N1-5D處理下的藻細胞MDA水平比N1-1B處理下的要低。結(jié)合N1-5D類胡蘿卜素的含量變化不大,分析表明,N1-5D對銅綠微囊藻的類胡蘿卜素含量影響不大,而類胡蘿卜素可以在一定程度上降低活性氧水平。減輕N1-5D對銅綠微囊藻細胞的損傷。隨著處理時間的延長,N1-5D對銅綠微囊藻細胞造成不可逆的損傷。因而,N1-5D對銅綠微囊藻的72h-ECso要遠遠高于N1-1B,抑藻效果沒有N1-1B強。 從滇池細菌優(yōu)勢種N1菌株的發(fā)酵液中分離純化得到的兩個脂肪酸抑藻化合物,表現(xiàn)出較好的活性,并表現(xiàn)出對銅綠微囊藻不同的抑藻機理。可以進一步研究開發(fā),對今后應用這種方法控藻有一定的指導意義。

【關(guān)鍵詞】：
【學位授予單位】：云南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：X172
【目錄】：

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