目的:探討下調(diào)垂體腫瘤轉(zhuǎn)化基因1(PTTG1)的表達(dá)對(duì)人去勢(shì)抵抗前列腺癌LNCaP-AI細(xì)胞衰老的影響。方法:采用體外誘導(dǎo)的人去勢(shì)抵抗前列腺癌LNCaP-AI細(xì)胞模型, LNCaP-AI細(xì)胞轉(zhuǎn)染靶向PTTG1基因的siRNA為siRNA-PTTG1組,只添加轉(zhuǎn)染試劑為Mock組,轉(zhuǎn)染陰性序列為NC組。于含雄激素培養(yǎng)液(FBS)/去除雄激素培養(yǎng)液(CSS)中培養(yǎng)各組細(xì)胞,細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)比較各組細(xì)胞數(shù)量變化。采用細(xì)胞衰老-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色試劑盒檢測(cè)衰老細(xì)胞數(shù)目;Western印跡檢測(cè)β-半乳糖苷酶蛋白1(Glb1)、細(xì)胞周期相關(guān)蛋白(p-21^CIP1、p-27^Kip1)、異染色質(zhì)蛋白1γ(HP1γ)的表達(dá)情況。結(jié)果:siRNA有效抑制了LNCaP-AI細(xì)胞中PTTG1的表達(dá)。siRNA-PTTG1組在FBS中培養(yǎng),細(xì)胞數(shù)量增加,而在CSS中培養(yǎng),細(xì)胞數(shù)量呈減少趨勢(shì);Mock組及NC組在上述不同培養(yǎng)液中細(xì)胞數(shù)量均呈增長(zhǎng)趨勢(shì),siRNA-PTTG1組與Mock組和NC組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。SA-β-Gal染...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 主要試劑
    1.3 主要儀器
    1.4 方法
        1.4.1 siRNA表達(dá)序列的確定
        1.4.2 細(xì)胞培養(yǎng)及siRNA轉(zhuǎn)染
        1.4.3 Mock組、NC組、siRNA-PTTG1組LNCaP-AI細(xì)胞在含/去雄激素培養(yǎng)液中的生長(zhǎng)情況比較
        1.4.4 轉(zhuǎn)染后細(xì)胞衰老情況檢測(cè)
        1.4.5 Western 印跡檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)
    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 Western印跡檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率
    2.2 轉(zhuǎn)染后LNCaP-AI細(xì)胞在FBS、CSS培養(yǎng)液中的生長(zhǎng)狀況
    2.3 SA-β-Gal染色檢測(cè)轉(zhuǎn)染后衰老細(xì)胞數(shù)變化
    2.4 Western印跡檢測(cè)衰老相關(guān)蛋白表達(dá)變化
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