本文對禽流感GD/1/96株的M2基因進行了克隆與序列測定，并在昆蟲細胞（sf9）中表達了M基因，同時研制了一種經(jīng)濟有效的抗禽流感新藥，旨在為我國禽流感的新型疫苗的研制、快速診斷以及化學防制奠定基礎。具體內(nèi)容如下： 1．取感染GD1/9620小時的未死SPF雞胚的尿囊膜、肌肉等組織研磨、勻漿，提取總RNA。利用反轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應（RT-PCR）技術(shù)，擴增出編碼M2蛋白的cDNA，以pMD18-T為載體克隆轉(zhuǎn)化到感受態(tài)的大腸桿菌中，經(jīng)酶切和PCR分析鑒定后，測定全基因的核苷酸序列。測序結(jié)果表明克隆到M2基因的cDNA全長為311bp，包括整個閱讀框297bp，編碼97個氨基酸殘基。由于M2蛋白可作為新一代的流感疫苗，因而M2基因的成功克隆可為M2蛋白的大量表達和新型疫苗的研制奠定基礎。 2．從pUCM1質(zhì)粒中亞克隆M基因至轉(zhuǎn)移載體pFastBacl質(zhì)粒，PCR鑒定后，轉(zhuǎn)化DH10_BAC感受態(tài)細胞。提取重組bacmid桿粒rBacM，以M13為引物作PCR分析，證明M基因已轉(zhuǎn)入其中。用CellFECTIN試劑包裹rBacM桿粒轉(zhuǎn)染sf9細胞，96h收取感... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
全文摘要
文獻綜述： 禽流感的研究進展
    病原學
    流行病學及生態(tài)學
    病理學變化
    免疫
    診斷
    防制
    禽流感在哺乳動物（包括人）流感中的作用
試驗一： 禽流感病毒GD/1/96（H5N1）株M2基因的克隆與序列測定
    中文摘要
    正文
    英文摘要
試驗二： 禽流感病毒GD/1/96（H5N1）M基因在sf9昆蟲細胞中的表達
    中文摘要
    正文
    英文摘要
試驗三： 抗禽流感新藥‘呼毒靈’的研制
    中文摘要
    正文
    英文摘要
全文結(jié)論
參考文獻
全文英文摘要
附錄： 試驗用儀器藥品
致謝



本文編號：3471529