目的：本研究利用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建用于轉(zhuǎn)化變鏈菌的LuxS基因同源重組質(zhì)粒載體，利用所構(gòu)建質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化變鏈菌以敲除變鏈菌中LuxS基因，構(gòu)建LuxS基因缺失的變鏈菌突變株。采用哈氏弧菌生物熒光檢測法對變鏈菌標(biāo)準(zhǔn)株和LuxS基因突變株的AI-2活性進(jìn)行對比研究，為進(jìn)一步研究AI-2信號感應(yīng)系統(tǒng)對變鏈菌致齲毒力的調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法：1．提取變鏈菌基因組DNA及紅霉素抗性質(zhì)粒PJT10，使用Premier5.0引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)引物，通過嵌套式PCR的方法，分別擴(kuò)增出變鏈菌LuxS基因的上、下游片段及質(zhì)粒PJT10的紅霉素抗性基因片段。2．將PCR所獲得的3條片段依次采用相應(yīng)的雙酶切反應(yīng)酶切后采用T4連接酶連接入載體質(zhì)粒PUC19，按“LuxS上游序列～紅霉素抗性基因～LuxS下游序列”的排列順序連接，以構(gòu)建目的質(zhì)粒pUCluxKO重組載體。3．將突變載體電轉(zhuǎn)化到含完整LuxS基因的突變受體S．mutans菌株中，紅霉素抗性篩選出LuxS基因缺失的變鏈菌突變株，并經(jīng)PCR和生物熒光檢測法鑒定。4．分別培養(yǎng)變鏈菌和哈氏弧菌BB170，通過制備變鏈菌無細(xì)胞上清液，以新配制的TPY培養(yǎng)基為陰性... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
英文縮寫及譯名
前言
實(shí)驗(yàn)一
實(shí)驗(yàn)二
實(shí)驗(yàn)三
實(shí)驗(yàn)四
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
致謝



本文編號：3205131