目的：本研究利用現(xiàn)代分子生物學技術構建用于轉化變鏈菌的LuxS基因同源重組質粒載體，利用所構建質粒電轉化變鏈菌以敲除變鏈菌中LuxS基因，構建LuxS基因缺失的變鏈菌突變株。采用哈氏弧菌生物熒光檢測法對變鏈菌標準株和LuxS基因突變株的AI-2活性進行對比研究，為進一步研究AI-2信號感應系統(tǒng)對變鏈菌致齲毒力的調控機制奠定基礎。方法：1．提取變鏈菌基因組DNA及紅霉素抗性質粒PJT10，使用Premier5.0引物設計軟件設計引物，通過嵌套式PCR的方法，分別擴增出變鏈菌LuxS基因的上、下游片段及質粒PJT10的紅霉素抗性基因片段。2．將PCR所獲得的3條片段依次采用相應的雙酶切反應酶切后采用T4連接酶連接入載體質粒PUC19，按“LuxS上游序列～紅霉素抗性基因～LuxS下游序列”的排列順序連接，以構建目的質粒pUCluxKO重組載體。3．將突變載體電轉化到含完整LuxS基因的突變受體S．mutans菌株中，紅霉素抗性篩選出LuxS基因缺失的變鏈菌突變株，并經PCR和生物熒光檢測法鑒定。4．分別培養(yǎng)變鏈菌和哈氏弧菌BB170，通過制備變鏈菌無細胞上清液，以新配制的TPY培養(yǎng)基為陰性... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
英文縮寫及譯名
前言
實驗一
實驗二
實驗三
實驗四
結論
參考文獻
綜述
致謝



本文編號：3205131