本文關(guān)鍵詞：生防芽孢桿菌的篩選及其抗菌物質(zhì)的分離純化與鑒定

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【摘要】：農(nóng)作物病害是一個全球性的難題,它給人類帶來了巨大的經(jīng)濟損失。農(nóng)作物病害主要是由真菌引起的。農(nóng)作物病害的生物防治是利用有益微生物或微生物代謝產(chǎn)物對農(nóng)作物病害進行有效防治的技術(shù)與方法。芽孢桿菌的諸多優(yōu)勢如高抗逆、分布廣、生長快等特點在生物防治中受到越來越多的關(guān)注。本實驗從篩選芽孢桿菌的目的出發(fā),從黑龍江省涼水國家級自然保護區(qū)林下土壤中篩選芽孢桿菌,經(jīng)過反復(fù)純化,得到幾十株芽孢桿菌。以植物病原真菌為靶標菌株,對所篩選得到的芽孢桿菌初篩和復(fù)篩,最終挑選出3株抑菌活性強的生防芽孢桿菌并保藏。從形態(tài)學(xué)鑒定、生理生化鑒定,菌株16SrDNA序列的測定三個方面對所篩選得到3株生防芽孢桿菌進行了鑒定,經(jīng)鑒定,拮抗芽孢桿菌F1、F17和H1分別是短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)、多粘類芽孢桿菌(Paenibacillus polymyxa)和枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)。對所篩選得到的拮抗菌株的拮抗機理進行了初步研究,發(fā)現(xiàn)所篩選出的拮抗芽孢桿菌F1、F17和H1的發(fā)酵代謝產(chǎn)物對植物病原菌都有明顯抑制作用,可以初步判定篩到的拮抗芽孢桿菌F1、F17和H1都是通過發(fā)酵液中胞外分泌物對植物病原菌起到的抑菌作用,且同種拮抗芽孢桿菌對不同的植物病原菌有明顯不同的抑制效果。且經(jīng)過高溫處理后,拮抗芽孢桿菌菌株F1、H1的發(fā)酵液仍然具有很明顯的抑菌活性,而拮抗芽孢桿菌菌株F17經(jīng)高溫處理后,其無菌發(fā)酵液里的抗菌物質(zhì)失活。利用飽和度為60%的硫酸銨沉淀短小芽孢桿菌F1的無菌發(fā)酵液,得到粗蛋白,然后經(jīng)DEAE-Sepharose陰離子交換層析后,用不同濃度梯度的NaCl洗脫,其中用0.35 mol/L NaCl洗脫的組分具有抑菌活性。將具有抑菌活性的蛋白進行通過SDS-PAGE進行觀察,發(fā)現(xiàn)該抑菌蛋白的分子量約為36.0 kDa。將得到的抗菌蛋白進行121℃處理30 min后,發(fā)現(xiàn)該蛋白仍然具有明顯的抑菌活性。本文篩選得到了具有抑菌作用的芽孢桿菌,并初步分離純化得到抗菌蛋白,為今后的研究奠定了基礎(chǔ),將為其應(yīng)用于生物防治起著非常重要的作用。
【關(guān)鍵詞】：生物防治 短小芽孢桿菌F1 枯草芽孢桿菌H1 抑菌機理
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S476.1
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-10
• 第1章 緒論10-21
• 引言10
• 1.1 課題來源10
• 1.2 課題背景及研究的目的和意義10-16
• 1.2.1 植物病害的防治方法10-14
• 1.2.2 芽孢桿菌的主要特征14-15
• 1.2.3 芽孢桿菌的分類15
• 1.2.4 芽孢桿菌的應(yīng)用15-16
• 1.3 研究現(xiàn)狀16-18
• 1.3.1 拮抗枯草芽孢桿菌生物防治國內(nèi)外研究現(xiàn)狀16-17
• 1.3.2 拮抗短小芽孢桿菌生物防治國內(nèi)外研究現(xiàn)狀17-18
• 1.4 國內(nèi)外文獻綜述的簡析18
• 1.5 課題研究目的及意義18-19
• 1.6 課題主要研究內(nèi)容及技術(shù)路線19-21
• 第2章 實驗材料與方法21-29
• 2.1 實驗材料21-23
• 2.1.1 實驗儀器21-22
• 2.1.2 實驗菌種及培養(yǎng)基22
• 2.1.3 實驗藥品與試劑22-23
• 2.2 實驗方法23-29
• 2.2.1 培養(yǎng)基23
• 2.2.2 植物根際土壤中芽孢桿菌的分離、純化及拮抗菌的篩選23-24
• 2.2.3 拮抗菌株形態(tài)、生理生化及分子鑒定24-26
• 2.2.4 拮抗活性的測定26
• 2.2.5 拮抗菌株的拮抗機理初步研究26-27
• 2.2.6 拮抗菌株所產(chǎn)抗菌物質(zhì)初步分離純化27-29
• 第3章 生防芽孢桿菌的篩選與鑒定29-37
• 引言29
• 3.1 芽孢桿菌的初步分離及純化29-30
• 3.2 拮抗芽孢桿菌的初篩30-31
• 3.3 拮抗芽孢桿菌的復(fù)篩31-32
• 3.4 拮抗芽孢桿菌的鑒定32-36
• 3.4.1 形態(tài)觀察結(jié)果32-33
• 3.4.2 菌株 16SrDNA序列的測定結(jié)果33-34
• 3.4.3 生理生化鑒定結(jié)果34-36
• 3.5 本章小結(jié)36-37
• 第4章 拮抗菌株的拮抗機理初步研究37-43
• 引言37
• 4.1 拮抗菌株生長曲線的測定37-38
• 4.2 拮抗菌株發(fā)酵液抑菌作用的測定38-40
• 4.3 發(fā)酵液超濾分離后抑菌活性的測定40-41
• 4.4 發(fā)酵液高溫處理后抑菌活性的測定41
• 4.5 本章小結(jié)41-43
• 第5章 拮抗菌株F1抗菌蛋白的分離純化及鑒定43-48
• 引言43
• 5.1 拮抗菌株F1抗菌蛋白的提取43-44
• 5.2 DEAE-Sepharose陰離子交換柱層析44
• 5.3 洗脫組分抑菌活性的測定44-45
• 5.4 抗菌蛋白濃度的測定45-46
• 5.5 抗菌蛋白的聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）46
• 5.6 拮抗菌株所產(chǎn)抗菌物質(zhì)的熱穩(wěn)定性檢測46-47
• 5.7 本章小結(jié)47-48
• 結(jié)論48-49
• 參考文獻49-56
• 致謝56

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本文編號：802504