本文關鍵詞：斜紋夜蛾酵母雙雜交文庫的構建及其在蛻皮激素受體互作蛋白篩選中的應用

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【摘要】：【目的】蛻皮激素在昆蟲變態(tài)發(fā)育中起著關鍵的調控作用。蛻皮激素活化為20-羥基蛻皮酮(20-hydroxyecdysone,20E)后與蛻皮激素受體二聚體〔蛻皮激素受體(ecdysone receptor,EcR)和超氣門蛋白(ultraspiracle protein,USP)〕結合,啟動20E誘導的級聯(lián)反應。本研究旨在從互作蛋白角度探究EcR/USP自身調控的分子機理�！痉椒ā恳灾匾r(nóng)業(yè)害蟲斜紋夜蛾Spodoptera litura為研究對象,通過構建酵母雙雜交篩選系統(tǒng)分別篩選了與EcR和USP相互作用的蛋白�！窘Y果】文庫轉化效率達到3.0×106cfu/μg,文庫滴度達到1.3×108cfu/m L,文庫插入片段大小在500~2 000 bp之間。4種誘餌質粒(EcRA/p GBKT7,EcRB1/p GBKT7,USP1/p GBKT7和USP2/p GBKT7)對酵母細胞無毒性,并且無自激活性,說明構建的酵母雙雜交文庫質量可靠。用以上4種誘餌質粒篩選酵母雙雜交文庫,共得到110個互作蛋白,其中與EcRB1,USP1和USP2互作的蛋白分別有26,52和32個,未篩選到與EcRA互作的蛋白。隨后,從中挑選了Dna J-5(Hsp40 homolog 5,一種熱激蛋白分子伴侶),MBF2(mediator of Bm FTZ-F1 type 2,一種轉錄共激活子),polyubiquitin(多聚泛素類蛋白),esr16(ecdysteroid regulated 16k Da protein,一種蛻皮激素調控蛋白)和NEDD8-like(neural precursor cell expressed,developmentally down-regulated protein 8,一種泛素調節(jié)相關蛋白)5種蛋白,利用酵母雙雜交和Far-Western印跡法進一步驗證了蛋白間的互作關系�！窘Y論】分子伴侶和泛素化修飾等在蛻皮激素受體調控中可能起著重要作用。本研究對深入理解昆蟲變態(tài)發(fā)育的分子機理具有重要意義。
【作者單位】： 華南師范大學生命科學學院廣州市昆蟲發(fā)育調控與應用研究重點實驗室;廣東省農(nóng)業(yè)科學研究院植物保護研究所廣東省植物保護新技術重點實驗室;
【關鍵詞】： 斜紋夜蛾 變態(tài)發(fā)育 蛻皮激素受體 酵母雙雜交文庫 互作蛋白
【基金】：國家自然科學基金項目(31172154) 廣東省自然科學基金項目(2015A030313390) 廣州市科技計劃項目(201510010055) 2015年廣東省“大學生創(chuàng)新性實驗計劃項目”
【分類號】：S433.4
【正文快照】： 斜紋夜蛾Spodoptera litura,屬鱗翅目(Lepidoptera)夜蛾科(Noctuidae),主要分布于熱帶和亞熱帶地區(qū),是一種能危害99科290種以上農(nóng)作物的蔬菜害蟲,給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成了巨大的危害(Lan et al.,2009)。昆蟲變態(tài)發(fā)育主要受保幼激素(juvenile hormone,JH)和蛻皮激素(ecdysone)兩種信號，

本文編號：648613