本文關(guān)鍵詞：斜紋夜蛾酵母雙雜交文庫的構(gòu)建及其在蛻皮激素受體互作蛋白篩選中的應(yīng)用

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【摘要】：【目的】蛻皮激素在昆蟲變態(tài)發(fā)育中起著關(guān)鍵的調(diào)控作用。蛻皮激素活化為20-羥基蛻皮酮(20-hydroxyecdysone,20E)后與蛻皮激素受體二聚體〔蛻皮激素受體(ecdysone receptor,EcR)和超氣門蛋白(ultraspiracle protein,USP)〕結(jié)合,啟動(dòng)20E誘導(dǎo)的級(jí)聯(lián)反應(yīng)。本研究旨在從互作蛋白角度探究EcR/USP自身調(diào)控的分子機(jī)理�！痉椒ā恳灾匾r(nóng)業(yè)害蟲斜紋夜蛾Spodoptera litura為研究對(duì)象,通過構(gòu)建酵母雙雜交篩選系統(tǒng)分別篩選了與EcR和USP相互作用的蛋白�！窘Y(jié)果】文庫轉(zhuǎn)化效率達(dá)到3.0×106cfu/μg,文庫滴度達(dá)到1.3×108cfu/m L,文庫插入片段大小在500~2 000 bp之間。4種誘餌質(zhì)粒(EcRA/p GBKT7,EcRB1/p GBKT7,USP1/p GBKT7和USP2/p GBKT7)對(duì)酵母細(xì)胞無毒性,并且無自激活性,說明構(gòu)建的酵母雙雜交文庫質(zhì)量可靠。用以上4種誘餌質(zhì)粒篩選酵母雙雜交文庫,共得到110個(gè)互作蛋白,其中與EcRB1,USP1和USP2互作的蛋白分別有26,52和32個(gè),未篩選到與EcRA互作的蛋白。隨后,從中挑選了Dna J-5(Hsp40 homolog 5,一種熱激蛋白分子伴侶),MBF2(mediator of Bm FTZ-F1 type 2,一種轉(zhuǎn)錄共激活子),polyubiquitin(多聚泛素類蛋白),esr16(ecdysteroid regulated 16k Da protein,一種蛻皮激素調(diào)控蛋白)和NEDD8-like(neural precursor cell expressed,developmentally down-regulated protein 8,一種泛素調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白)5種蛋白,利用酵母雙雜交和Far-Western印跡法進(jìn)一步驗(yàn)證了蛋白間的互作關(guān)系�！窘Y(jié)論】分子伴侶和泛素化修飾等在蛻皮激素受體調(diào)控中可能起著重要作用。本研究對(duì)深入理解昆蟲變態(tài)發(fā)育的分子機(jī)理具有重要意義。
【作者單位】： 華南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院廣州市昆蟲發(fā)育調(diào)控與應(yīng)用研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院植物保護(hù)研究所廣東省植物保護(hù)新技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 斜紋夜蛾 變態(tài)發(fā)育 蛻皮激素受體 酵母雙雜交文庫 互作蛋白
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31172154) 廣東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2015A030313390) 廣州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(201510010055) 2015年廣東省“大學(xué)生創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃項(xiàng)目”
【分類號(hào)】：S433.4
【正文快照】： 斜紋夜蛾Spodoptera litura,屬鱗翅目(Lepidoptera)夜蛾科(Noctuidae),主要分布于熱帶和亞熱帶地區(qū),是一種能危害99科290種以上農(nóng)作物的蔬菜害蟲,給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成了巨大的危害(Lan et al.,2009)。昆蟲變態(tài)發(fā)育主要受保幼激素(juvenile hormone,JH)和蛻皮激素(ecdysone)兩種信號(hào)，

本文編號(hào)：648613